人力资源管理论文-自体和异体血液在全血分离实验体系中对免疫细胞因子的影响.doc

人力资源管理论文-自体和异体血液在全血分离实验体系中对免疫细胞因子的影响作者：夏晓峰郭峰钱宝华花美仙【摘要】目的：运用系统血液免疫反应分离实验体系，探讨在抗原激活的情况下异体血细胞对反应体系中细胞因子含量水平影响的变化规律。方法：以S180作为激活抗原，加异体血细胞与自体血细胞对比，37孵育1h，取上清液用ELISA法测定IL-8、TNF-、IFN-的分泌量。结果：IL-8的分泌量异体红细胞实验组（133.92±135.85）%与自体红细胞对照组（37.93±27.74）%相比明显上升（P<0.05）；TNF-的分泌量异体红细胞实验组（8.31±3.57）%与自体红细胞实验组（16.55±10.38）%相比明显下降（P<0.05）；IFN-分泌量无明显差异。结论：异体红细胞对自体血液免疫反应细胞因子的分泌具有双向调控作用，提示异体输血对受者的血液免疫反应具有干扰和失平衡的不良影响。【关键词】淋巴细胞；红细胞；抗原；免疫调控；细胞因子EffectsofAutogeneticandAllogenousBloodonCytokinesbyMeansofNaturalIsolatedExperimentalSystemAbstractObjectiveAutogeneticandallogenouserythrocytesregulatetheimmunologicalreactionsactivatedbyantigensbymeansofnaturalisolatedexperimentalsystem,toobservethechangesofcytokines.MethodsUsinginactivatedS180asactivatingantigenandautologousplasmaasreactionsubstratum,Afterincubationanhourin37,supernatefluidissuspendedanddetectedthechangeofIL-8、TNF-andIFN-byELISAassay.ResultsThesecretionofIL-8ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(133.92±135.85)%ismuchhigherthanthatofautogeneicerythrocytescontrolgroup(37.93±27.74)%(P<0.05),ThelevelofTNF-ofallogenouserythrocytesexperimentalgroup(8.31±3.57)%ismuchlowerthanthatofautogeneicerythrocytesexperimentalgroup(16.55±10.38)%(P<0.05)；theexpressionofIFN-红细胞在天然免疫防御网络中发挥着重要作用，红细胞在补体系统天然免疫反应的参与下有黏附和调理抗原、清除循环免疫复合物、调控淋巴细胞表达免疫分子和细胞因子等作用。有实验证明在库存血中有多达14种以上炎性细胞因子，中性粒细胞弹性蛋白酶和TNF-浓度的增加在临床的异体输血时都可造成免疫功能的不利影响1。结合了补体的病原体可以被红细胞补体受体免疫分子黏附，激发对致病原发生连锁的系统血液天然免疫反应，同时红细胞还可参与相关免疫细胞分泌细胞因子的调节。本实验研究是运用全血分离实验体系2，通过ELISA的方法测定上清液中相关细胞因子IL-8、TNF-、IFN-分泌量在实验体系反应中的变化，探讨其可能存在的临床意义。1材料与方法1.1材料1.1.1酸性枸橼酸钠葡萄糖溶液（acidcitratedextrose,ACD）抗凝的健康成人新鲜全血由解放军上海血站提供。1.1.2磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution,PBS）和癌细胞悬液（S180）由解放军上海血站血液免疫研究室自行制备。1.1.3红细胞裂解液（10×）购于深圳晶美生物公司。1.1.4IL-8、TNF-、IFN-酶联免疫反应试剂盒（ELISA法）购于法国DIACLONE公司。1.2方法1.2.1血浆的分离制备采集新鲜的健康成人ACD抗凝全血10mL，室温下2000r/min离心5min，吸取上层血浆至另一试管备用。1.2.2红细胞悬液（RBC）的制备小心吸取沉底红细胞100L，加入2mL生理盐水溶液中洗涤，2000r/min离心5min，弃上清，全自动血细胞分析仪计数，光学显微镜下观察证实不含白细胞和血小板后，调整红细胞悬液浓度为1×108/mL。1.2.3白细胞悬液（WBC）的制备取全血细胞悬液1.6mL加4mL蒸馏水在冰水中轻轻混匀作用不超过1min，立即加4mL1.8%氯化钠液混匀，2500r/min离心5min，弃上清，调整白细胞悬液浓度为1×106/mL。1.3分离实验体系的设计和建立实验共分6只试管，以自体或异体血浆作为反应基质，分离实验组以灭活腹水癌细胞S180作为激活抗原，其对照组加NS作为对照，即（注：*为加异体血浆组）：0.1mL异体RBC+0.1mLS180+0.2mL自体WBC+0.3mL异体血浆*（加异体血浆）。0.1mL异体RBC+0.1mLS180+0.2mL自体WBC+0.3mL自体血浆（加自体血浆）。0.1mL异体RBC+0.1mLNS+0.2mL自体WBC+0.3mL异体血浆*（加异体血浆）。0.1mL异体RBC+0.1mLNS+0.2mL自体WBC+0.3mL自体血浆（加自体血浆）。0.1mL自体RBC+0.1mLS180+0.2mL自体WBC+0.3mL自体血浆（加自体血浆）。0.1mL自体RBC+0.1mLNS+0.2mL自体WBC+0.3mL自体血浆（加自体血浆）。将上述6只试管置于37水浴箱中温育1h，加盖，中间摇匀2次，间隔20min；完成后，2000r/min离心5min；小心取出上清液约400L装入安瓿管中，编号，置于-20冰箱中冷藏待测。1.4上清液细胞因子IL-8、TNF-、IFN-的检测实验前20min从冰箱中取出试剂盒和待测样品，平衡至室温（25），96孔板用包被缓冲液稀释的试剂，每孔加100L，4过夜，洗板3次；加100L待检样品上清液于已包被的反应孔中（同时做空白、阴性及阳性孔对照），37孵育1h，洗板3次；于反应孔中加入新鲜稀释的streptavidin-HRP100L，室温下孵育20min，洗板3次；于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液100L，避光反应20min使其显色；于各反应孔中加入2mol/L硫酸100L终止反应；在ELISA酶标检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔A值，绘制标准曲线，并比较各孔实测值。1.5统计学处理数据以x±s表示，统计学处理采用t检验或方差分析，P<0.05为差异显著。2结果2.1IL-8、TNF-、IFN-分泌量（pg/mL）的变化在S180激活情况下，异体红细胞能够对自体血液免疫反应的细胞因子发生调控作用。其中，IL-8的分泌量异体红细胞实验组*（133.92±135.85）%与自体红细胞对照组（37.93±27.74）%相比表现出明显上升（P<0.05）；TNF-的分泌量异体红细胞实验组（8.31±3.57）%与自体红细胞实验组（16.55±10.38）%相比表现出明显降低（P<0.05）；IFN-的分泌量，在各组之间相比均无明显差异（P>0.05），详见表1。