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2 O2 处理大块牛松质骨后成分分析.doc

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2 O2 处理大块牛松质骨后成分分析.doc

2O2处理大块牛松质骨后成分分析作者:罗卓荆胡蕴玉刘智广【关键词】骨移植关键词:骨移植;氨基酸分析;移植,异种摘要:目的研究大块牛松质骨(MBCB)处理后的各种成分及高浓度H2O2消除异种骨抗原性的机制.方法采用干燥失重法及残渣法检测经过系统去抗原处理后的大块异种骨的有机、无机质及水份含量;将25块大块新鲜牛松质骨均分为5组,分别用高浓度H2O2浸泡0,24,48,72和96h,采用氨基酸分析方法研究不同H2O2处理时间的骨块中羟脯氨酸、脯氨酸含量.结果经处理后,MBCB为色白,并呈现出多孔样结构,扫描电镜观察,松质骨呈清晰的多孔结构,孔壁光滑;5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸的含量随着H2O2处理时间的延长均有同步下降的趋势,但各组间无显著性差异(Pgt;0.05,Tab4).表2骨样品中羟脯氨酸、脯氨酸质量分数(略)表3骨样品中氨基酸质量分数表4氨基酸中羟脯氨酸、脯氨酸质量分数(略)3讨论松质骨由骨小梁及骨小梁间的骨髓成分构成,骨髓内包含大量的各种血细胞以及血管、神经、脂肪等组织,骨髓将骨小梁间隙填充,在扫描电镜下未能见到松质骨的多孔样结构.异种骨抗原分布研究资料表明,骨中的主要抗原成分集中于骨细胞、成骨细胞、软骨细胞以及骨髓细胞、血浆等[5].在本实验中,反复采用50℃压力水冲洗,使松质骨中细胞低渗裂解,氯仿甲醇脱脂清除骨小梁间的大量脂肪组织,以高浓度H2O2浸泡处理,二者交替进行,结合离心处理,将牛松质骨内的脂肪、细胞及残片均有效清除.处理后的牛松质骨在SEM观察下显示清晰的多孔结构,孔壁干净、光滑,未见其他物质残留,彻底清除异种骨中的主要抗原物质,为骨生长因子的复合及新骨的长入提供理想的微环境[4].正常成熟骨中含水质量分数为20%~25%、有机质40%和无机盐60%,无机盐决定骨的强度,而有机质决定骨的弹性和韧性.本实验中冻干MBCB的成分检测结果表明,MBCB的水分残留质量分数低于5%,而胶原等有机质和无机骨矿各占47%左右,由于保持了合理的有机及无机质比例,故也保持MBCB一定的韧性和强度[6].成熟骨的有机质中大约90%为胶原,其余为氨基多糖、其他蛋白质、肽类及脂类.骨基质中的胶原主要是Ⅰ型胶原,由两条α1肽链和一条α2肽链相互拧成的三联螺旋结构.α肽链组成有以下两个主要特点∶①α肽链的氨基酸排列顺序中,每隔两个其他氨基酸残基就有一个甘氨酸;②α肽链

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