百度文库

热门搜索: 直缝焊接机 矿井提升机 循环球式转向器图纸 机器人手爪发展史 管道机器人dwg 动平衡试验台设计

首页 人人文库网 > 资源分类 > DOC文档下载

Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定.doc

  • 资源星级:
  • 资源大小:29.00KB   全文页数:6页
  • 资源格式: DOC        下载权限:游客/注册会员/VIP会员    下载费用:5
游客快捷下载 游客一键下载
会员登录下载
下载资源需要5

邮箱/手机号:
您支付成功后,系统会自动为您创建此邮箱/手机号的账号,密码跟您输入的邮箱/手机号一致,以方便您下次登录下载和查看订单。

支付方式: 微信支付       支付宝      
验证码:   换一换

友情提示
2:本站资源不支持迅雷下载,请使用浏览器直接下载(不支持QQ浏览器)
3:本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰   

Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定.doc

Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定【摘要】目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和WesternBlot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(Plt;0.05,表1).表1实时定量PCR检测Hela细胞中Cdh1的表达(略)2.3WesternBlot检测Cdh1蛋白的表达与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1蛋白表达水平明显降低(图1).3讨论细胞周期分裂后期促进复合物及其调节亚基Cdh1不仅在增殖细胞中起重要作用,研究发现其在哺乳动物大脑皮质、海马、小脑等部位的终分化神经元核内有大量的表达,且具有泛素化周期蛋白B的活性,泛素化其他的底物,发挥其潜在作用[4].研究表明在不同类型的神经元,Cdh1APC的表达降低引起的结果可能也不一样.在胚胎鼠皮质神经元,降低Cdh1APC的表达,周期蛋白B表达升高,使细胞异常地重新进入细胞周期,引起神经元的凋亡[5];而在新生鼠小脑颗粒神经元,抑制Cdh1APC的表达及活性,发现神经元仍可存活,且轴突增长[1].RNA干扰技术是指生物体内导入短的双链RNA(dsRNA)后使体内同源基因特异性的沉默.siRNA的来源有多种,如化学合成、体外转录合成及利用质粒或病毒载体表达siRNA.2002年,Brummelkamp等[6]首次使用小鼠H1启动子构建了小发卡RNA(smallhairpinRNA,shRNA)表达载体pSUPER,并证实转染该载体可有效、特异性地剔除哺乳动物细胞内目的基因的表达.在体内表达的shRNA与dsRNA很接近,它包含了两

注意事项

本文(Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定.doc)为本站会员(abingge)主动上传,人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知人人文库网(发送邮件至[email protected]或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!

温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。

关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

网站客服QQ:2846424093    人人文库上传用户QQ群:460291265   

[email protected] 2016-2018  renrendoc.com 网站版权所有   南天在线技术支持

经营许可证编号:苏ICP备12009002号-5