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fat1转基因小鼠的构建与鉴定.doc

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fat1转基因小鼠的构建与鉴定.doc

fat1转基因小鼠的构建与鉴定【摘要】目的构建和鉴定携带有外源fat1基因的转基因小鼠。方法将fat1基因的cDNA与动物表达载体pEFneo连接,构建pEFfat1重组质粒,酶切、测序鉴定正确后,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、Southernblot杂交等方法确立阳性整合有目的基因的G0代小鼠。结果成功构建了pEFfat1重组质粒,将其显微注射到小鼠受精卵中,得到G0代小鼠,PCR、Southernblot杂交确立了4只整合有fat1基因的首建鼠。结论fat1基因可整合到小鼠体内,得到的转基因小鼠为研究fat1基因的生物学功能提供了动物模型。【关键词】小鼠转基因DNA重组fat1基因[ABSTRACT]ObjectiveToconstructandidentifythetransgenicmicewithextrinsicfat1gene.MethodsFat1cDNAandanimalexpressionvectorpEFneowereconjugatedtoconstructtherecombinantplasmidpEFfat1whichwasdigestedbyrestrictenzymeandsequencedcorrectly.TheobtainedlinearrecombinantplasmidpEFfat1wasmicroinjectedintothearsenoblastsofmousezygote,whichwasimplantedintotheuterustoproducetransgenicmice.PCRandSouthernblotwereperformedtoidentifythepositiveG0generationoffat1transgenicmice.ResultsRecombinantplasmidpEFfat1wassuccessfullyconstructedandfourG0micewithintegratedfat1genewereidentifiedviaPCRandSouthernblot.ConclusionFat1genecanbeintegratedintomousetoobtainthetransgenicmouset

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