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hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定.doc

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hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定.doc

hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定作者:张剑凯,杨聚荣,李雪鹏,何娅妮【摘要】目的构建hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。方法PCR扩增获得hNaDC1基因5’侧翼转录调控区不同长度片段:hNaDC1A(-2232/+136,2368bp)、hNaDC1B(-1640/+136,1776bp)、hNaDC1C(-1084/+136,1221bp)、hNaDC1D(-253/+136,389bp)、hNaDC1E(-2232/-12,2244bp),以pGL3Basic为载体构建hNaDC1基因5’侧翼序列系列缺失质粒。重组体通过特异限制性内切酶酶切鉴定,并送样测序鉴定。结果成功构建hNaDC1基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体5个:pGL3hNaDC1A~E。结论为进一步研究NaDC1基因5’侧翼区转录调控元件的分布特点及转录调控元件与转录因子间的相互作用提供了基本实验条件。【关键词】hNaDC1基因基因表达调控载体构建Abstract:ObjectiveToconstructthefireflyluciferasereportgenevectorsfor5’flankingregulatedelementsofhNaDC1gene.MethodsTheDNAfragmentshNaDC1A~E(-2232/+136)in5’flankingregionofhNaDC1genewereamplifiedfromthenephridialtissuebyusingPCR.ThePCRproductsweredirectionallysubclonedintopGL3Basicvector.TherecombinedcloneswereidentifiedbyagarosegelelectrophoresisafterrestrictionendonucleasedigestingandDNAsequencing.Results5expressionvectors(pGL3NaDC1A~E)for5’flankingregulatedelementsofhNaDC1genehadbeenconstructed.ConclusionTheseexpressionvectorsofferthe

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