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NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤.doc

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NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤.doc

NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤作者:涂三芳,郭坤元,胡亮衫,梅家转,周健,孙明【摘要】目的:探讨NKG2D配体在不同发育阶段树突状细胞(DC)表面的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响。方法:用细胞因子(rhIL-4、rhGM-CSF、TNF-α)体外诱导培养单核细胞来源的未成熟树突状细胞(iDC)和成熟树突状细胞(mDC)并鉴定形态和表型,免疫磁珠法分离纯化NK细胞。流式细胞术(FCM)检测iDC和mDC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3的表达。用LDH释放法检测NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性以及抗NKG2D单克隆抗体(mAb)阻断NK细胞后的杀伤活性。结果:培养的iDC和mDC具有典型的细胞形态和免疫表型特征。iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP3,表达率分别为(32.39lt;0.05,图4)。图4抗NKG2DmAb阻断前后NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性(略)Fig4CytotoxicityofNKcellsandtheNKcellsblockedwithanti-NKG2DmAbagainstiDCandmDC3讨论NK细胞和DC是机体天然免疫和获得性免疫系统中重要的组成部分,近年来研究[1,5]表明二者在天然免疫早期阶段存在相互作用,DC能增强NK细胞的杀伤活性,同时NK细胞能选择性杀伤iDC,到目前为止其杀伤机制仍在探索中。DC根据发育阶段的不同可分为iDC和mDC,其在形态,表型和功能上有所不同[6]。NK细胞的杀伤活性同时受活化性和抑制性受配体结合产生的信号平衡调节起作用[7],其活化性受体主要包括II型跨膜蛋白受体NKG2D和NK细胞自然细胞毒受体NCR,与配体结合向NK细胞传递活化性信号。NKG2D配体[8]主要包括多态性的MHC-I类链相关的肽A、B(MICA/B)和人巨细胞病毒UL16结合蛋白(ULBPs),它们在不同发育阶段DC的表达情况尚未见研究报道。我们通过FCM分别检测iDC和mDC表面NKG2D配体的表达,结果显示iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1和ULBP3,而mDC表面只表达MICA和ULBP3,且表达率很低。因此iDC可以通过表面NKG2D配体与NKG2D结合激活NK细胞的杀伤活性,mDC通过NKG2D配体很难激活NK细胞。本研究杀伤试验显示

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