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PCR-SSP法基因定型解决临床配血中血型问题.doc

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PCR-SSP法基因定型解决临床配血中血型问题.doc

PCR-SSP法基因定型解决临床配血中血型问题赵志弘何路军乔芳田亚娟王振雷张虹刘敬闪【摘要】目的利用ABO基因定型技术解决临床疑难血型定型1例。方法运用血型血清学方法、PCR-SSP(SequenceSpecificPrimer,SSP)基因定型法对比进行1例正反定型不符标本的检测。结果血清学方法不能正确定型。PCR-SSP法基因定型结果是该患者为O1O1V基因型。结论血型基因定型技术较血型血清学方法更准确、可靠,是血型血清学技术的极好补充。【关键词】PCR-SSP;血型血清学;正反定型不符;ABO基因定型;冷凝集素近些年来,随着城市人口的激增,血站不仅在采供血量上增长很快,而且在实际工作中出现了更多的正反定型不符合标本,这些标本有来自血站内部检验科的,也有来自医院临床的。传统的血清学检测方法由于其自身局限性,因此面临很大挑战。笔者在实际工作中运用ABO基因定型方法解决了一些疑难血型定型的常见问题,现以1例临床配血中出现的正反定型不符标本的鉴定报告如下。1材料与方法1.1血型血清学试验按照文献[1]操作。抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB、抗-H、抗-M、抗-N、抗球蛋白试剂、标准试剂ABO红细胞、谱细胞均由上海血液生物医药有限责任公司制备。1.2血型基因定型PCR-SSP;血型血清学;正反定型不符;ABO基因定型;冷凝集素采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术。DNA提取严格按照TIANGEN血液基因组DNA提取试剂盒说明书进行。引物为采用瑞典隆德Martin.L.Olsson研究小组[2~4]与笔者自行设计,内对照为扩增人类生长激素基因(HGH),均由上海生工合成。PCR扩增仪为美国ABI公司9700。引物混合物检测的基因特异性、突变位点和PCR产物片段大小见表1。引物序列见表2。1.2.1PCR反应体系总反应体系10μl,引物浓度10pmol/μl,dNTPs浓度10pmol/μl,基因组DNA浓度50ng/μl,15mMMgCl2(SIGMA公司),内对照引物浓度5pmol/μl,5U/μlTaqDNA聚合酶(Promega,Shanghai),甘油和甲酚红终浓度分别为5%和0.01%(SIGMA公司)。表1基因分型引物检测的基因特异性、突变位点和PCR产物片段大小1.2.2PCR循环参数采用热启动DNA变性技术96℃预置7min,然后按94

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