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siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用.doc

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siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用.doc

siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用【关键词】RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达[摘要]目的研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段,转录针对VEGFmRNA的siRNA,通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC-7901细胞,设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR检测转染后VEGFmRNA表达水平的变化,ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGFmRNA的表达也受到有效抑制,明显减少;同时,对应的VEGF蛋白水平也显著降低,作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。[关键词]RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达[ABSTRACT]ObjectiveToevaluatethegeneexpressionofVEGFbyRNAinterferenceinhumangastriccancer.MethodssiRNAstargetingVEGFmRNAwasobtainedbyinvitrotranscription,whichwastransfectedintohumangastriccancercelllinesSGC-7901withLipofectamine2000.Thenon-transfectedcells,cellstreatedwithLipofectimineandcellstreatedwithSCRweretakenascontrols.MTTwasusedtodetecttheinhibitiverateofcellgrowth.Flowcytometrywasusedtodetectthechangesofcyc-lingofthecell.TheinhibitiveeffectofsiRNAonmRNAlevelwasdetectedbyRT-PCR,thesecretionofVE

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