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TK自杀基因的构建及鉴定.doc

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TK自杀基因的构建及鉴定.doc

TK自杀基因的构建及鉴定【摘要】目的利用分子生物学技术,构建胸苷激酶基因(TK)自杀基因并测定其结构,为该自杀基因的进一步研究提供良好的实验基础。方法以人类单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV1)基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)法,扩增出约为1100bpTK基因,定向克隆到载体PEGM-T,构建克隆载体。两端分别引入限制性内切酶NotⅠ、XholⅠ酶切位点,经PCR及酶切鉴定初步证实为重组体后,测序认证。结果经PCR、酶切鉴定和测序鉴定完成TK基因的构建,同源性高达98.70%,完全具备表达该目的基因的要求。结论成功扩增出TK基因,为继续研究打下基础。【关键词】TK基因自杀基因聚合酶链反应Abstract:ObjectiveToconstructthesuicidegeneherpessimplexvirusthymidinekinasegene(HSV-TK)andtosequenceitsstructureforidentification.MethodsTheTKgenefragmentwasamplifiedbyPCRfromthegenomeDNAofherpessimplexvirus.ThePCRproductwasclonedtothevectorPEGM-T.TheinterestedTKgenefragmentintherecombinantplasmidobtainedwasconfirmedbyPCR,enzymedigestionandsequencing.ResultsTheTKgenewassuccessfullyobtained.Theproductwas98.70%original.ConclusionTheconstructionofTKgenemayhelpstarttheresearchintothesuicidegenestrategyforthecontrolofcancers.Keywords:thymidinekinase;suicidegene;polymerasechainreaction(PCR)将某些细菌及病毒中特有的药物敏感基因转导入肿瘤细胞,使肿瘤细胞产生某些酶类,将原来无毒或低毒的前体药物代谢转化成细胞毒性产物而杀伤宿主细胞,这种使肿瘤细胞自杀的基因称为“自杀基因”[1]。肿瘤的自杀基因疗法首创于1986

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