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不同季节虎杖根茎与茎叶中大黄素含量变化研究.doc

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不同季节虎杖根茎与茎叶中大黄素含量变化研究.doc

不同季节虎杖根茎与茎叶中大黄素含量变化研究作者胡冠宇,夏醒醒,尹政,陈勤【摘要】目的通过测定药用植物虎杖在不同季节时其不同生长部位中的有效成分大黄素含量及其变化规律,旨在为虎杖的最佳采收时间提供依据。方法采用高效液相色谱法,DiamonsilC18250mm4.6mm,5μm色谱柱,甲醇0.1磷酸80∶20为流动相检测波长254nm流速1.0mL/min柱温27℃进样量20μL。结果通过测定不同季节虎杖的茎叶与根中的大黄素含量,发现根中大黄素含量最高,且大黄素含量在8月最高。结论虎杖在生长发育过程中,大黄素含量变化是有规律的,可根据其根中的大黄素含量确定最佳的采收时间。【关键词】虎杖大黄素采收时间高效液相色谱法AbstractObjectiveTofindthechangingregularityofemodincontentindifferenttissuesofPolygonumcuspidatumgatheredindifferentseasonsbyHPLC,sotodecidethebestgatheringtime.MethodsTheseparationwasperformedonDiamonsilC18250mm4.6mm,5μmcolumn,usingmethanol0.1H3PO480∶20asmobilephase,detectedat254nm.Theflowratewas1.0mL/min,thecolumntemperaturewas27℃.ResultsAmongtherhizomeandstemleafofPolygonumcuspidatum,thecontentofemodinintherhizomewasthehighest.Overayear,thecontentofemodinwasthehighestinaugust.ConclusionThecontentofemodinchangesregularlyintheprocessofgrowthanddevelopmentofPolygouumcuspidatum,ThebestgatheringtimecouldbedeterminedbytheemodincontentintherhizomeofPolygouumcuspidatum.KeywordsPolygonumcuspidatumemodingatheringtimeHPLC虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.是蓼科蓼属多年生草本植物,在我国有广泛的分布,常见于江苏、浙江、安徽、山东、广东、广西、四川、陕西、云南、贵州等地。传统药用部分为其干燥根和根茎,性味苦寒,具有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化瘀等功效。其主要化学成分有蒽醌、酚性物质及黄酮类化合物等,其中蒽醌类化合物主要有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等。大黄素有较广泛的生物活性,具有抑菌、抗炎、免疫调节和抗肿瘤等作用1。由于大黄素具有显著的药理学功效,故有着广泛的应用。传统经验认为,大多数根茎类中药都在春秋季节时采挖,因为在这个季节里中药材中的有效成分往往贮藏于根中。中药大辞典也记载虎杖的根及根茎应在春秋二季采挖2。然而,植物在其生长发育过程中,体内合成的次生代谢物质包括有效成分或称生物活性成分随着季节的变化,其不同生长部位的含量可能存在很大的差异,仅凭经验模式采挖,并不一定适合所有的中药材,药材质量也就无法得到保证。本试验采用高效液相色谱HPLC法测定虎杖的根茎和叶部位中大黄素的含量,通过跟踪观测安徽合肥地区3-9月间虎杖中大黄素含量的动态变化,以期为确定虎杖的最佳采收季节提供依据。1材料Agilent1100series高效液相色谱仪色谱柱DiamonsilC18250mm4.6mm,5μmAgilent色谱化学工作站。大黄素对照品中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号7569203虎杖药材采于安徽省委党校植物园,经本实验室鉴定为虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.。甲醇为色谱纯水为重蒸水其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱DiamonsilC18250mm4.6mm,5μm流动相甲醇0.1磷酸80∶20检测波长254nm流速1.0mL/min柱温27℃进样量20μL。2.2对照品溶液的配制精密称取大黄素对照品1.0mg,以甲醇溶解并定容至10mL,摇匀,配成100μg/mL的溶液。2.3供试品溶液的制备3取虎杖茎叶与根适量,分别干燥研细,过60目筛,精密称取约0.1g,加入三氯甲烷25mL和2.5mol/L硫酸溶液20mL,称定重量,置80℃水浴回流2h,冷却后称重,用三氯甲烷补足失重,摇匀,分取三氯甲烷,精密量取10mL,水浴蒸干,残渣加甲醇使溶解,定容至10mL,用0.45μm微孔滤膜滤过,备用。2.4线性关系试验取100μg/mL的对照品溶液,用甲醇稀释为100、16.67、8.33、1.67、0.83μg/mL,按上述色谱条件测定,每个浓度重复3次,进样量为20μL。以对照品峰面积积分值为纵坐标,以进样浓度为横坐标进行线性回归,得回归方程为Y=134405X+16.119R=0.9999。表明大黄素在0.83~100μg/mL浓度范围内线性关系良好。2.5精密度试验精密吸取同一对照品溶液20μL,重复进样5次,测定大黄素的峰面积值,RSD=1.83,表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验将待测样品溶液在室温下贮存,在相同的色谱条件下,每隔2h进样1次,共5次,测定大黄素的峰面积值,RSD=0.91,表明该样品溶液在10h内基本稳定。2.7重复性试验取同一代样品5份,每份0.1g,精密称取,按2.3项中的方法处理,测定大黄素的峰面积值,结果大黄素峰面积值RSD=1.85。结果表明重复性良好。2.8加样回收率试验采用加样回收法。精密称取已知含量21.609μg/mL的样品,分别精密加入一定量的大黄素8.333μg/mL对照品,按正文样品溶液的制备方法及上述的色谱条件,依法测定峰面积,计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果略2.9样品含量测定精密称取干燥虎杖不同组织粉碎品,按2.3项下方法制备供试品溶液,吸取20μL供试品溶液注入高效液相色谱仪,测定含量。结果见表2,HPLC图见图1。表2样品中大黄素含量测定结果略3讨论虎杖为多年生草本植物,4月中旬开始展叶,5-8月份为生长旺盛期,8-9月份为花期,一般在10月底部分叶片开始发黄脱落,11月中旬落完。结果表明,大黄素平均含量根部明显高于茎叶。在根中,大黄素含量在3-9月间基本呈递增趋势,至8月达到顶峰与此同时,茎叶中大黄素含量则呈递减趋势。这说明虎杖在生长发育过程中,其有效成分大黄素的生成量最高出现在叶中3月份,随后,呈下降趋势,而此时根茎中却是全年最低点随后根茎中的大黄素含量逐渐升高,至4月份时,根茎中的大黄素含量就明显超过叶中,8月份时为全年最高点。对于这一情况,我们认为有两种可能其一,植物在生长发育过程中,合成次生代谢物质的基因在植株不同部位中转录与表达的时间不同其二,生长早期,由于虎杖幼嫩的茎叶营养丰富,物理结构不坚韧,易遭受微生物、食草动物侵袭,大黄素可能在这个时期通过体内转运通道从根部转移到茎叶中以起到一种化学防御作用,而在生长晚期,这种次生代谢产物含量随器官成熟而逐渐下降贮存于根茎中。这种现象在其他植物中也有发现,例如,喜树幼叶中喜树碱含量是成熟叶的100倍4。从试验结果来看,我们认为,虎杖的采收时间应在8月份较为适宜。为了保证试验结果的重复性和可靠性,本试验样品均是在植物园的不同样本区,选择采样30株作为样本,每次采集同一样本植株上的茎叶和根茎,低温烘干,混合粉碎成60目细粉,保证了采样的代表性。【参考文献】1王淑玲,孙云廷,刘昱霞,等.大黄素的药理学研究近况J.中成药,2007,296877-879.2江苏新医学院.中药大辞典上册M.上海上海科学技术出版社,1977.1329-1330.3国家药典委员会.中华人民共和国药典一部S.北京化学工业出版社,2000.146.4刘文哲,王自芬.喜树幼枝的喜树碱积累及其组织内定位J.植物生理与分子生物学报,2004,304405-412.

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