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车前草超氧化物歧化酶的分离纯化及种类鉴定.doc

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车前草超氧化物歧化酶的分离纯化及种类鉴定.doc

车前草超氧化物歧化酶的分离纯化及种类鉴定【摘要】目的从车前草中分离纯化超氧化物歧化酶(SUPEROXIDEDISMUTASE,SOD)。方法采用40乙醇作为提取液,经过丙酮沉淀,CMSEPHAROSEFASTFLOW和SEPHADEXG75柱层析,收集活性峰,冷冻干燥后即得。结果纯化的SOD经SDSPAGE显示单一条带,亚基分子量为201KDA;抑制试验显示为FESOD。结论通过两步柱层析从新鲜车前草提取液中纯化得到FESOD,其亚基分子量、颜色、紫外吸收与文献报道相近。【关键词】车前草;纯化;超氧化物歧化酶车前草又名车前、车轮菜、猪耳草等,为车前科植物车前PLANTAGOASIATICAL、平车前PDEPRESSSAWILLD[1]的干燥全草。车前以种子和全草入药,用于治疗小便不利、水肿、暑热泄泻、痰多咳嗽、热毒痛肿等。随着现代中药化学的不断发展,从车前中分离出许多有效成分[2]①多糖类;②黄酮及其苷类,如木樨草素;③环烯醚萜类,如桃叶珊瑚甙AUCUBIN、京尼平甙酸GENIPOSIDICACID等;④苯乙酰咖啡酰糖酯类,如连翘酯甙ACTEOSIDE;⑤还有熊果酸、乌苏酸、生物碱、小分子的酸性物质、Β谷甾醇苷等,从而揭示了部分传统药效的作用机制,还发现了许多传统用药所没有的新的药理作用,如镇咳祛痰、平喘、抗衰老、缓泻、抗菌等。但是对车前草中大分子成分如蛋白、多糖等的研究很少,车前草超氧化物歧化酶的分离提纯文献尚未见报道。本文探讨了从车前中分离纯化超氧化物歧化酶的方法并鉴定其种类,为植物性超氧化物歧化酶的应用提供依据。1材料与仪器11材料车前草购自广州程岗路农贸市场,由广州军区广州总医院邓伟杰主管药师鉴定为车前科植物车前PLANTAGOASIATICAL的干燥全草。12主要仪器凝胶层析系统(LKB)(PHARMACIABIOTECH);二两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司);GENERALTU1901紫外分光光度计(日本岛津公司);LGJ12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司);SORVALLRC5C低温高速离心机;电子天平TP320A(湘仪天平仪器设备有限公司);电子天平BP210SSARTORIUS(德国);垂直电泳仪(BIORAD);TGL16H台式离心机(BECKMAN公司);UNIVERSALHOODⅡ凝胶成像系统(BIORAD);B

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