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成人脂肪来源间充质干细胞的分离培养与鉴定.doc

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成人脂肪来源间充质干细胞的分离培养与鉴定.doc

成人脂肪来源间充质干细胞的分离培养与鉴定作者:李战强,黄友章,彭勤建,汪立川,解永学,廖丽【关键词】脂肪【关键词】成人;脂肪;干细胞;分离;培养1实验资料试剂均购自Sigma公司,荧光标记单抗购自BD公司,DMEM购自Gibco公司.成年女性48岁行吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20mL.在1h内将其移至离心管内,加入等量PBS缓冲液,充分振荡后低速离心800r/min×10min.反复冲洗3次后加入等量15g/LI型胶原酶.37℃水浴中充分振荡30min,再加入等量胎牛血清(FBS)中止.低速离心10min后弃去上清.将下层细胞用PBS悬浮后加入16mmol/LNH4Cl37℃水浴中10min以裂解红细胞.低速离心10min后再用PBS冲洗3次.最后将瞎胞用含100mL/LFBS+10g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中,37℃,50mL/LCO2培养箱中孵育,48h后首次换液,弃去悬浮细胞.随后每3d换液,1wk后传代.将第3代细胞用于流式细胞仪检测.浓集细胞到109/L后按文献所述方法进行流式细胞仪检测.细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基(表1)中进行培养.诱导培养2wk后,对成脂诱导组进行油红O脂肪颗粒染色,对成骨诱导组进行碱性磷酸酶组化染色,对成软骨诱导组进行II型胶原染色,对成肌诱导组进行肌浆球蛋白组化染色.结果:观察2d细胞贴壁.倒置显微镜下见细胞为大而扁平的单层细胞.有的细胞体细长,似成纤维细胞.流式细胞仪图上为单一群体细胞.免疫表型:CD1069.8%,CD1399.2%,CD2991.0%,CD5581.6%,CD5998.6%,CD10598.0%,CD16632.1%,CD140%,CD450%,CD3485.7%,HLADR0%,与国外文献一致.油红O染色、碱性磷酸酶染色、II型胶原染色阳性、肌浆球蛋白染色分别呈阳性.表1含10g/L青霉素的定向诱导培养基DMEM成份(略)2讨论脂肪来源的干细胞(adiposetissuederivedstemcells)虽然具备干细胞的一些特性,但还不能将其称为脂肪干细胞,因为其中可能含有不同分化阶段的脂肪前体细胞(preadipocyte).从这个意义上讲,将其称为脂肪基质细胞(adiposetissuederivedstromalcells)更为适合[1-

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