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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定.doc

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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定.doc

大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定作者:李显澎樊粤光刘建仁范海蛟江晓兵孙志刚曾建春阳建权【摘要】【目的】研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离纯化和在诱导条件下的成骨能力。【方法】取SPF级SD大鼠6只,采用全骨髓贴壁培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代的MSCs进行细胞形态和免疫组化鉴定;应用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液诱导传代细胞向成骨细胞分化,检测碱性磷酸酶(ALP)的活性和细胞矿化作用进行成骨细胞鉴定。【结果】全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM(L-DMEM)培养液中生长性状相对稳定,增殖速度快;诱导条件下,细胞ALP活性明显增高,并出现了矿化结节。【结论】建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法,成骨能力肯定,为中药蛋白质组学研究提供材料基础。【关键词】骨髓间充质干细胞/病理学;细胞培养,体外的;组织工程骨髓间充质干细胞(MSCs)在体内外诱导因子的作用下,可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、神经细胞和星形胶质细胞转化,具有很大的可塑性[1],这使其在组织工程、细胞治疗等方面成为研究的热点[2]。为更好地将MSCs应用于骨质疏松症、骨坏死、骨缺损,本实验通过体外细胞培养的方法将MSCs从骨髓中分离纯化,观察MSCs在体外的扩增、鉴定,并诱导其定向成骨分化。现报道如下。1材料与方法1.1动物SD大鼠6只,SPF级,体质量140~160g,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号为:0025033。1.2主要试剂与仪器低糖DMEM(L-DMEM,美国Gibco公司,GNM31600);兔抗大鼠CD34(BA0532)、CD44(BA0321)、CD54(BA0541)(武汉博士德公司);高糖DMEM(Hyclone,SH30022.01B);胎牛血清(Hyclone,SV30087.01);胰蛋白酶(Hyclone,SV30042.01);β-甘油磷酸钠(美国Simga公司);地塞米松(美国Sigma公司);D-hanks(美国Simga公司);维生素C(美国Sigma公司);生物素化抗生蛋白链菌素复合物(streptavidinbiotincomplex,SABC)(SA1022)试剂盒(武汉博士德公司);二氨基联苯胺(di

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