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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定.doc

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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定.doc

大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定作者李显澎樊粤光刘建仁范海蛟江晓兵孙志刚曾建春阳建权【摘要】【目的】研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)的分离纯化和在诱导条件下的成骨能力。【方法】取SPF级SD大鼠6只,采用全骨髓贴壁培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代的MSCS进行细胞形态和免疫组化鉴定;应用含地塞米松、Β甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液诱导传代细胞向成骨细胞分化,检测碱性磷酸酶(ALP)的活性和细胞矿化作用进行成骨细胞鉴定。【结果】全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCS,MSCS在含体积分数为10胎牛血清的低糖DMEM(LDMEM)培养液中生长性状相对稳定,增殖速度快;诱导条件下,细胞ALP活性明显增高,并出现了矿化结节。【结论】建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCS的方法,成骨能力肯定,为中药蛋白质组学研究提供材料基础。【关键词】骨髓间充质干细胞/病理学;细胞培养,体外的;组织工程骨髓间充质干细胞(MSCS)在体内外诱导因子的作用下,可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、神经细胞和星形胶质细胞转化,具有很大的可塑性[1],这使其在组织工程、细胞治疗等方面成为研究的热点[2]。为更好地将MSCS应用于骨质疏松症、骨坏死、骨缺损,本实验通过体外细胞培养的方法将MSCS从骨髓中分离纯化,观察MSCS在体外的扩增、鉴定,并诱导其定向成骨分化。现报道如下。1材料与方法11动物SD大鼠6只,SPF级,体质量140160G,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号为0025033。12主要试剂与仪器低糖DMEM(LDMEM,美国GIBCO公司,GNM31600);兔抗大鼠CD34(BA0532)、CD44(BA0321)、CD54(BA0541)(武汉博士德公司);高糖DMEM(HYCLONE,SH3002201B);胎牛血清(HYCLONE,SV3008701);胰蛋白酶(HYCLONE,SV3004201);Β甘油磷酸钠(美国SIMGA公司);地塞米松(美国SIGMA公司);DHANKS(美国SIMGA公司);维生素C(美国SIGMA公司);生物素化抗生蛋白链菌素复合物(STREPTAVIDINBIOTINCOMPLEX,SABC)(SA1022)试剂盒(武汉博士德公司);二氨基联苯胺(DIAMINOBENZIDINE

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