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中医证候学研究与证候蛋白质组学.pdf

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中医证候学研究与证候蛋白质组学.pdf

中医药学报2003年第31卷第3期李术探讨中医证候学研究与证候蛋白质组学刘为民,指导姚乃礼,吴志奎,刘绍能中国中医研究院广安门医院,北京100053摘要总结近年来中医证候学研究方法提倡将蛋白质组学引入中医证候分类及证侯演变规律的研究中,用蛋白质差示二维电泳及生物信色学方法,从分子流行病学水平着重阐述中医证候分类的分干基拙关健词证侯;蛋白质组学;中医证候研究方法中图分水号一R2OIL立献标识T5A立奄编县1012一2392200303一0111一01证候是在致病因素作用下,机体内外环境各系统之间相互关系发生紊乱所产生的综合反应,是反映疾病处于某一阶段病因、病性、病位、病势等病理要素的综合性诊断概念。“证”是生命物质在疾病过程中具有时相性的本质的反映,“候”的原意是说明事物变化的情状,在医学范畴是指病变的临床表现。“证候”说明了中医学是通过观察病人的异常表现来把握疾病本质的。证具有整体性、定型性、定系性、制约制、时相性,可以概括反映疾病发生的原因和病机、部位和范围;反映邪正相争的态势、病变的性质、类型和机能异常。目前,证候研究方法有4种飞主次症状判断法,根据中医的现证,用传统的辨证方法分析综合,通过临床实践,反复修改、完善确定主次症状,制定辨证标准。2在宏观辨证的基础上,用现代医学的方法,寻找证的客观指标,探讨其本质,即用微观指标认识与辨证3多学科多层次多因素分析法,该法是借用数学模型达到辨证的计最目的。4主症辨证法,主症通常是诊断该证必须依靠的特征症状或非特异性症状的特意组合,在证中起决定和主导作用,而次症只起补充和参考作用,此法在辨证中将复杂的辨证条理化、简明化、系统化。中医重视疾病某阶段机体的整体状态,传统中医学对疾病的认识侧重干整体、宏观、司外揣内,通过疾病表现在外的征象推测演绎疾病的病因、病性、病位,归纳出证的概念。证候是致病因子与体质因素相互作用的综合反应,这种综合反应的过程具有一定的物质基础,用现代科技手段和方法来揭示其物质基础并进行定址和定性对证候及辨证的规范化具有十分重要的意义。中医界早年致力于探索证候的高特异性和高灵敏性的指标,试图建立证候实验诊断单个金指标,然而,由于证的整体性、动态性和异病同证,同病异证等特征,不可能用单一指标作定性、定址、定位的说明。据此,脏腑证候客观化研究采用综合指标,精选非特异指标进行特异组合,建立能反映证本质并能区别他证的定性、定量、定位综合实验指标,辅助四诊,确定证候诊断。笔者认为,就分子水平而言,证候不一,基因表达谱也不一样,“证”的本质是基囚型及其表达,体外能用肉眼观察到的症状和体征变化具有其分子基础,是基因及其在RNA,蛋白质水平差异的外在表现。结合临床辨证分型,我们提出证候荃因组学、证候蛋白质组学理论,提倡通过分子流行病学调查,综合,RNA、蛋白质等多种分子生物学标志物,引人分子生物学方作者简介刘为民1973一,男,主治医师中国中医研究院2000级博士研究1L,从事I0药抗肝纤维化研究在证候墓因组学、蛋白质组学、络病理论LI肝纤维化方面有一定研究2FRZ一日一2法、蛋白质组学方法,如RNA差异显示法、差异二维蛋白质电泳方法,从RNA,蛋白质水平探讨中医“证,的实质、证的分类、证的辨治、证的衍变规律,阐明证的基因表型、蛋白质表形及其转化。蛋白质组学研究基因的最终表达产物具有活性的蛋白质,以蛋白质双向电泳和新型质谱分析为技术平台,研究不同条件和状态下蛋白质组的性质和变化规律,是后基因组时代的研究重点。其代表方法为二维聚丙烯酷胺凝胶电泳,通过引人两个纬度两个完全独立的物化参数经过两次垂直方向的分离,含多种蛋白质的样品展开成为有近千个蛋白点的繁星图,利用计算机数字图象处理系统和大型统计分析软件,对不同疾病或不同证候与对照样品的蛋白质进行比较,寻找具有统计学意义和丰度差异的蛋白点,并根据测得的蛋白质及氨基酸的实验数据,到网上蛋白质组基因组数据库中,利用生物信息的方法进行比较研究。以慢性乙肝为例,乙肝“证”具有相对定型性,引起乙肝发病的是一种特定“疫毒之气’在病程中持续作用,对肝象系统有特殊亲和力,并且表现出湿热的特性,这就从病因、定位、定性上奠定了乙肝“证的定型性的基础,使于临床进行研究但是,由于体质有强弱,脏腑素察有区别,体内有‘留饮”“癣血”“疡疾”“故邪”之异,对证的个体反应各不相同。气候、地理环境、年龄、性别诸因家也会影响证表现的差异。同时,由于病变可以发生渐变、传变或突变,因此,尽管病因、病位、病性基本相同。慢性乙型肝炎还是可能出现不同的类型,临床分为U1,湿热中阻、肝郁脾虚、肝肾阴虚、癖血阻络、脾肾阳虚五型。研究表明慢性乙型肝炎患者中医证型与肝脏病理改变、肝内型胶原、生化指标相关,慢性乙型肝炎中医证型的划分具有一定的物质基础。在我们承担的国家九五攻关课题中,对慢乙肝后肝纤维化进行了理论研究,并重点进行茂术颐粒抗肝纤维化的药理、药效、毒理实验,探讨了蔑术报粒抗肝纤维化,重点是肝郁脾虚及其兼夹证的机理。在承担的中国中医研究院课题中,笔者通过前瞻性的大样本流行病学调查,从循证医学角度,归纳中医证候流行病学情况,分析慢性乙型肝炎、肝纤维化、早期肝硬化之间的证候演变规律,确立肝纤维化的证候标准及证候演变趋势。因而,进一步展开分子流行病学研究,果用差异双向蛋白质电泳等方法,借助SPSS大型统计分析软件,通过生物信息学的方法,从蛋白质组水平研究慢性乙型肝炎、肝纤维化、早期肝硬化,最终确立慢性肝病证候蛋白质组学分类标准,探讨其衍变规律,并进一步研究中药蔑术颗粒治疗慢性乙型肝炎、肝纤维化、早期肝硬化的肝郁脾虚及其兼夹证的分子机理,在理论上、实践中均具有重大的现实意义。收稿日期万方数据

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