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肺炎链球菌荚膜改良染色法研究.doc

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肺炎链球菌荚膜改良染色法研究.doc

肺炎链球菌荚膜改良染色法研究蒋莲秀,黄光玲,何义,吴丹,钟毓娟*(桂林医学院基础医学实验中心广西桂林541004)[摘要]:目的探索一种新的细菌荚膜改良染色法,提高细菌荚膜染色质量。方法涂片用A液60℃水蒸汽蒸染、B液媒染、C液固定脱色、D液复染。结果改良法菌体紫红色,背景浅蓝,荚膜无色透明,涂片背景干净,菌体、荚膜、背景三者对比明显。结论改良法荚膜染色荚膜清晰,菌体与荚膜之间对比明显,方法简便,重复性好,便于批量教学标本制作。[关键词]:荚膜;染色法;改良荚膜是某些细菌的特殊结构,具有黏附、抗吞噬作用,与细菌的致病性有关,在细菌的鉴定中有重要意义。荚膜的形成主要受遗传因素决定,但也与环境条件有关,如在动物体内和营养丰富(含大量血清和糖)的培养基中容易形成,而在普通培养基上极易消失[1]。细菌的荚膜染色在微生物学教学实验和某些细菌学诊断中是一种常用的也是较难掌握的染色技术。目前常用的染色法有Hiss、Muir,Olt、湿(干)墨水负染法以及改良染色法等,但这些方法仍然存在染色繁琐、效果不理想等缺点。我们在传统的染色技术的基础上经过多次实验,探讨建立一种新的肺炎球菌荚膜染色法,现报道如下。1材料和方法1.1肺炎链球菌(本室保存菌种)。1.2实验动物小白鼠(本院动物中心清洁级)。1.3荚膜染色液A液(鞭毛染色液):甲液为5%石炭酸5份,20%饱和钾明矾溶液2份,20%鞣酸2份混合,乙液为碱性复红酒精饱和液1份,甲、乙两液混合过滤后第三天使用;B液:碘液(革兰染色第二液);C液:20%甲醇;D液:乳酸酚棉兰(石炭酸20g,乳酸20mL,甘油40mL,棉蓝0.05g,蒸馏水20mL)。1.4荚膜保护液15%葡萄糖溶液9份,无菌灭活兔血清1份,临用时混匀。1.5培养基血清肉汤培养基(普通肉汤培养基,临用时加5-8%的无菌灭活兔血清)。1.6方法1.6.1细菌涂片的制备将肺炎链球菌接种于血清肉汤培养基中,培养24h,以比浊法稀释菌液浓度为3×108CFU/ml,取1ml培养物注射于体重约20g小白鼠腹腔内,16h发病后,在濒死的小白鼠腹腔内注射1ml荚膜保护液,轻揉腹部,无菌条件下取腹腔液,再注射至另外健康小白鼠腹腔内,每只0.3ml,连续转种2次,待最后一次小鼠发病时,于小鼠腹腔内注射1ml无菌生理盐水,轻揉腹部2min,最后取腹腔液涂片。1.6.2染色方法涂片先滴加A液60

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