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MicroRNAs 在肿瘤和其它疾病诊断治疗中的应用.pdf

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MicroRNAs 在肿瘤和其它疾病诊断治疗中的应用.pdf

分子诊断与治疗杂志2010年3月第2卷第2期JMOLDIAGNTHER,MARCH2010,VO1.2NO.2123MICRORNAS在肿瘤和其它疾病诊断治疗中的应用贾音张毅孙树汉【摘要】MICRORNASMIRNAS是一类内源性非编码小分子RNA,通过与靶MRNA3’端非翻译区完全或不完全互补配对,引起MRNA降解或翻译抑制,发挥基因调控作用。MIRNAS在细胞增殖、分化、凋亡,个体发育等多种生物学过程中都起到重要作用,其表达失调可以导致疾病的产生。本文就MIRNAS在肿瘤和其它疾病的发生、诊断等方面的研究进展作简要综述。【关键词】肿瘤;疾病;MICRORNASMIRNAS;基因调控APPLICATIONOFMICRORNASINDIAGNOSISANDTREATMENTOFTUMORANDOTHERDISEASESJIAYIN,ZHANGYI,SUNSHUHANDEPARTMENTOFMEDICALGENETICS,COLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCES,SECONDMILITARYMEDICALUNIVERSITY,SHANGHAI200433,CHINA【ABSTRACT】MIRNASAREENDOGENOUS,NONCODINGSMALLRNASTHATREGULATEGENEEXPRESSIONBYINDUCINGTRANSLATIONALINHIBITIONORCLEAVAGEOFTHEIRTARGETMRNASTHROUGHBASEPAIRINGATPARTIALLYORFULLYCOMPLEMENTARYSITES.MIRNASMAYPLAYACRITICALROLEINMANYBIOLOGICALPROCESSESINCLUDINGCELLPROLIFERATION,DIFFERENTIATION,APOPTOSISANDONTOGENY,MIRNADEREGULATIONMAYLEADTODISEASE.THISARTICLEAIMSTOREVIEWMIRNASINTUMORANDOTHERDISEASESOCCURRENCE,DIAGNOSISANDOTHERASPECTSOFRESEARCH.【KEYWORDS】TUMOR;DISEASE;MICRORNAMIRNA;GENEREGULATION遗传是生物体的基本生命现象之一,任何疾病的发生都可以视为遗传与环境共同作用的结果。随着社会老龄化程度加重,由遗传和环境因素综合作用引起的高血压、心血管疾病、关节炎、恶性肿瘤等老年性疾病的比重也在逐年增加。MICRORNASMIRNAS的发现,把人类疾病分子水平研究带入了一个新的层次。MIRNAS是一类长度约22个核苷酸分子组成的非编码小分子RNA,通过与靶基因3’端非翻译区UTR的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使MRNA降解或抑制靶MRNA翻译。MIRNAS广泛参与了生物体多种生理过程,如个体发育,细胞增殖、凋亡和分化,代谢与应激反应的调节,肿瘤形成等N。研究发现,MIRNAS编码基因的失调与遗传学和表观遗传学的改变有关,比如染色体缺失、扩增、点突变、单核苷酸多态性SNP以及DNA甲基化异常等】。1MIRNAS的生成和作用机制综述MIRNAS中心文库一MIRBASERELEASE12.0包含了8000多种动植物和病毒的MIRNA。许多MIRNAS在不同物种间非常保守,暗示了它们的重要地位口。MIRNAS在各种生物体内的加工、成熟过程及机制基本相似。简单地说,大多数成熟MIRNAS是RNA聚合酶II的合成产物,转录产物则由两种RNASELII酶DROSHA酶和DICER酶进行加工。成熟MIRNA与目标MRNA结合,形成RNA诱导的基因沉默复合体RISC,MIRNA与靶MRNA的3’一UTR不完全互补配对,从而抑制基因表达N。该过程有以下几个可能的机制MRNA的降解,对翻译起始和延伸阶段的抑制,以及在细胞质内P小体上的定位。正常组织中,MIRNA转录、加工、结合基金项目国家自然科学基金项目30901613;国家“十一五”科技支撑计划项目2006BA105A05;上海市科委基础研究重点项目08JC1405300;上海市科委自然基金09ZRA439100作者单位第二军医大学医学遗传研究所,上海200433124分子诊断与治疗杂志2010年3月第2卷第2期JMOLDIAGNTHER,MARCH2010,VO1.2NO.2到靶MRNA的互补位点,通过改变MRNA稳定性或抑制蛋白翻译来抑制基因表达,使细胞生长、增殖、分化和死亡维持平衡。动物的MIRNA结合并不完全互补,单个MIRNA能调节上百个靶位基因影响蛋白表达,一旦MIRNA失调就会对生物体的正常生理功能造成影响,使细胞异常发育,甚至产生疾病。2MIRNAS与肿瘤肿瘤是目前对人类威胁最大的疾病之一,其产生是由于体细胞内遗传物质的改变。各种肿瘤的发病都涉及特定组织细胞中染色体或癌基因、抑癌基因的变化,即起因于遗传物质的突变。已经发现约50%得到注解的MIRNAS在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点,这说明MIRNAS在肿瘤发生过程中起至关重要的作用。MIRNAS与肿瘤相关研究最早源于CALIN等发现慢性淋巴细胞白血病CLL中染色体13Q14的缺失。此研究表明MIR.15A和MIR一16.1是这个缺失区域内仅有的两个基因,在接近68%CLL患者中这两种基因均有缺失或下调。随着对MIRNAS与肿瘤关系研究的深入,陆续发现不同肿瘤中MIRNAS表达水平存在很大差别。2.1癌基因与抑癌基因研究表明,MIRNAS可以作为癌基因和抑癌基因在体内发挥作用。MIRNAS作为癌基因首先报道的是MIR.155,儿童BURKITT淋巴瘤患者MIR.155/BICRNA表达丰度增加,是其他儿童白血病的1O0倍左右,提示MIR.155可能在B细胞淋巴瘤的发生中起重要作用。VOLINIA等用芯片分析了6种实体瘤肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌、胰管癌MIRNA的表达谱,发现MIR21表达均有显著增加,提示了这种MIRNA分子在肿瘤形成过程中可能起广泛的致癌作用。另有研究发现,MIR21通过负调控抑癌基因PTEN的表达,可以促进肝癌细胞生长N。乳腺癌细胞中,抑癌基因原肌球蛋白1TROPOMYOSIN1,TPM1的3’.UTR含有MIR21结合位点,MIR.21在翻译水平影响TPM1表达。有抑癌基因作用的MIRNAS,其表达下调或缺失将使MIRNA的靶蛋白表达上调,细胞过度增殖、凋亡减少、组织分化异常或去分化等,最终导致肿瘤发生。LET.7家族是典型的具有抑癌基因作用的MIRNA分子,在肺癌、结肠癌”等研究中发现,1ET.7负调控原癌基因RAS/LET.60的表达,非小细胞性肺癌中1ET.7表达水平越低,预后越差,术后生存期越短。LET.7还可直接或问接调控与细胞周期、细胞分裂有关的基因,抑制肿瘤细胞生长和分裂。2.2MIRNAS在肿瘤诊断、预测和治疗中的作用分子水平检测肿瘤相关基因序列或表达情况的改变,有利于肿瘤的早期发现和治疗。MIRNAS在组织和细胞中表现为显著的肿瘤相关J生、组织特异性和表达稳定IE161,这为临床医生区别不同肿瘤、诊断肿瘤分型、提供治疗方案、分析预后等提供了重要的辅助手段。基因缺失或重复复制部位杂合子丧失可以导致MIRNAS编码部位基因断裂。说明染色体组的这种改变不只影响这些部位的基因表达水平,还与位于染色体组的MIRNAS表达水平有关。通过检测由杂合子缺失导致的MIRNAS和其定位的改变协助诊断组织特异性肿瘤成为可能。LU等应用一种基于微球的流式细胞术应用于20种不同肿瘤后,发现不仅每种癌症都有特异的MIRNAS表达谱,这些表达谱还可以有效反映肿瘤组织的发展与分化状态,大多数低分化肿瘤也能根据MIRNAS表达水平确定其组织或器官来源。最近研究发现,外周血中检出特异性MIRNAS并将其作为生物学标志,对肿瘤早期诊断具有重要意义。MIRNAS在血浆和血清中非常稳定,不受RNA裂解酶RNASES影响,在长期储存或反复冻融等情况下仍能保持稳定,表明可以开发血循环中肿瘤来源的MIRNAS作为生物标志物。随着检测技术方法不断进步,循环MIRNAS的应用研究有了实质性进展,在肿瘤诊断和预后、代谢性疾病、产前诊断、组织损伤等领域都取得了一些重要成果。MITCHELL等M将人前列腺癌细胞22RVL接种到NOD/SCID免疫缺陷小鼠体内,发现接种癌细胞的小鼠外周血循环中含有人肿瘤来源的MIRNAS,说明来自肿瘤的MIRNAS可以进人血液循环。在筛选出与前列腺癌发生可能相关的一些MIRNAS之后,发现MIR141表达量显著增高,并且与前列腺特异抗原PSA水平有一定相关陛,提出了可以选择MIR141作为诊断前列腺癌的肿瘤标志物。RESNIKE等利用MIRNA芯片证实了卵巢癌患者和健康人血清中MIRNAS存在表达差异,其中MIR.21、92、93、126、29A、155、127和99B等8个MIRNA的表达差异具有统计学意义。另外,CA.125阴性的卵巢癌患者血清中,MIR21、92、93表达量显著增高,提示外周血MIRNAS检测可用于卵巢癌的筛查诊断,其临床价值可能优于CA.125。另一研究发现,结直肠癌患者分子诊断与治疗杂志2010年3月第2卷第2期JMOLDIAGNTHER,MARCH2010,VO1.2NO.2L25血清中MIR173P和MIR92表达量显著增高,但术后患者血清中这两种MIRNAS却明显下降。而且,MIR92还可以把结直肠癌与胃癌、炎症日饧病和健康区分开来1。MIRNAS在肿瘤发生发展中所起的重要作用给新型抗癌药物的开发带来了希望。改变肿瘤中MIRNAS的表达量被视为一种新的治疗策略,主要包括引入抑癌基因性MIRNAS、敲除或削减癌基因性MIRNAS。“ANTAGOMIR”是根据MIRNA成熟体序列设计,专门用于抑制内源性MIRNAS的高效阻断剂,其抗癌作用在神经母细胞瘤模型中被证实3_MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,和肿瘤恶性分期、进展速度、耐药性等高度相关。无MYCN基因扩增的神经母细胞瘤中,MIR一17.92簇过表达可使体内肿瘤体积增大。皮下植人肿瘤的裸鼠用ANTAGOMIR17.5P治疗2周后,发现肿瘤生长受到抑制,并且体积减小30%左右,而对照组的ANTAGOMIR对肿瘤生长则没有影响。锁核酸LNA是一种新型寡核酸衍生物,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒F生等优点,主要用于基因诊断和治疗。最近利用小鼠和非洲绿猴模型研究发现,LNAANTIMIR可以使MIR一122有效沉默,导致血浆总胆固醇持久、可逆性下降。可行性论证指出,使用反义MIRNA的寡核苷酸AMOS安全、有效。这一成果有望为癌症、心血管疾病等多种症状的治疗开辟新途径。另一种技术就是人工合成小RNASMIRNA拟态MIRNAMIMETICS,它模拟生物体内源性MIRNAS,增强内源性MIRNAS的功能,减少其他不相关MIRNAS的干扰。MIRNA拟态可诱导细胞死亡并显著降低白血病细胞模型中MIR一15A/16簇”和肺癌模型中MIR一29簇的潜在致瘤效应。3MIRNAS与妊娠相关疾病3.1MIRNAS与产前诊断产前诊断可以对胚胎或胎儿出生前是否还有遗传病或先天畸形做出准确判断,从而决定是否需要终止妊娠。在减少遗传病患儿出生,提高人口素质方面具有重要意义。母体血浆中发现游离的胎儿核酸物质,开创了新的无创产前诊断方法。CHIM等应用MIRNA芯片检测孕期及产后母体外周血,发现L7个MIRNAS在孕期高表达,而产后则没有检测到。与CSH1编码的MRNA相比,MIR141在母体血浆中更稳定。GILAD等研究发现,所有胎盘表达的MIRNAS在孕妇血浆中均高表达。MIR.526A、MIR一527和MIR.520D一5P还可以准确辨别是否妊娠。这些研究结果均提示外周血MIRNAS不仅能够反映生理状态的异常,也可以为发展出生缺陷人群监测和预防技术体系、快速产前诊断及无创性产前诊断提供技术支撑。3.2MIRNAS与病理妊娠PINELES等对比了先兆子痫患者与健康人的胎盘组织,发现先兆子痫患者胎盘组织中有两种MIRNAS明显增高。ZHU等也用MIRNA芯片筛选了先兆子痫患者胎盘组织中34个异常表达的MIRNAS。这些结果提示异常MIRNAS可能参与了先兆子痫的病理发展,并有望成为诊断、治疗和预测先兆子痫的生物标志物。本实验室相关研究也发现,不仅在患者胎盘中,孕妇外周血中也存在妊高症相关MIRNAS的表达量改变。妊娠糖尿病系高危妊娠,严重危害母婴健康。CHEN等采用SOLEXA测序方法对糖尿病患者血清中的MIRNAS进行测序分析发现,其血清MIRNAS谱与健康人血清表达谱明显不同,而且糖尿病患者血清与血细胞相比,血清MIRNAS改变可以更敏感地反映糖尿病患者的病情。这也提示了我们可以结合正常孕妇及糖尿病患者血清异常MIRNAS变化,预测或诊断妊娠糖尿病的发生。4MIRNAS与其它疾病病毒中同样发现了基因编码的MIRNAS,病毒MIRNAS在蛋白质编码基因中所起的调节作用可能是在病毒中维持复制、逃逸宿主免疫等。文献报道,MIR一122与靶基因的5UTR相结合,可以促进HCV的复制,这种结合作用可能改变了HCVRNA的二级结构,通过转录子5’端开关调控病毒的翻译水平。目前已经开发MIR.122作为抗病毒治疗靶点,丹麦制药公司SANTAFISPHARMA宣布其开发的丙型肝炎新型治疗手段SPC3649LNAANTIMIRTM一122开始进入人体第一阶段临床试验,这是世界上首个在人体中试验的MIRNA药物。动脉粥样硬化有家族聚集倾向,在控制其它危险因素后,家族史是一个独立的危险因素。其形成的病理生理机制目前比较公认的是炎症反应学说,单核源巨噬/泡沫细胞是动脉粥样硬化炎症反应最主要的细胞,科研人员用OXLDL刺激人原代外周血单核细126分子诊断与治疗杂志2010年3月第2卷第2期JMOLDIAGNTHER,MARCH2010,VO1.2NO.2胞后,发现MIR一125A一5P显著上调,并证实ORP9OXYSTEROLBINDINGPROTEINLIKE9为MIR一125A一5P的靶基因之一。通过抑制MIR一125A一5P表达,可以提高ORP9在MRNA和蛋白水平的表达。此研究认为MIR一125A5P可能部分参与调控OX.LDL刺激单核细胞过程中的炎症反应、脂类摄取和ORP9表达,并可能起到阻止动脉粥样硬化发生的作用。5结语MIRNAS的发现无疑是对现有真核生物基因表达调控的补充,其在基因调控及生物发育中的作用正在被不断研究并开发。MIRNAS在体内不仅作为功能分子发挥作用,还参与并决定基因表达调控、蛋白质翻译,从而影响细胞代谢等所有生命进程。由MIRNA介导的RNA干扰技术正迅速从基础研究领域迈进临床应用,循环MIRNAS作为一种无创性检测手段在疾病的早期诊断和预后中也展示出广阔的应用前景。虽然MIRNAS在疾病发生发展过程中的作用是“因”还是“果”仍需更多研究来证明,但可以认为对MIRNAS的深入研究推动了从RNA、DNA和蛋白质三大生物分子方面对疾病进行预测、诊断和治疗的进程。参考文献1】BARRELDEMICRORNASGENONLIES,BIOGENESIS,MECHANISM,ANDFUNCTIONJ.CELL,2004,L16281297.【2NEGRINIM,FERRACINM,ETA1.MICRORNASINHUMANCANCERFROMRESEARCHTOTHERAPYJ.JCELLSCIENCE,2007,120,1833.1840.【3】STEFANIG,SLACKFJ.SMALLNONCODINGRNASINANIMALDEVELOPMENTJ.NATREVMOLCELLBIOL,2008,9219230.4】CALINGA,DUMITRUCD,SHIMIZUM,ETA1.FREQUENTDELETIONSANDDOWNREGULATIONOFMICRORNAGENESMIR15ANDMIR16AT13Q14INCHRONICLYMPHOCYTICLEUKEMIAJ.PROCNANACADSCIUSA,2002,99241552415529.F5】METZLERM,WILDAM,BUSCHK,ETA1.HIGHEXPRESSIONOFPRECURSORMICRORNA一155/BICRNAINCHILDRENWITHBURKITTLYMPHOMAJ.GENESCHROMOSOMECANCER,2004,3921167169.66VOLINIAS,CALINGA,LIUCG,ETA1.AMICRORNAEXPRESSIONSIGNATUREOFHUMANSOLIDTUMORSDEFINESCANCERGENETARGETS【J.PMCNATLACADSCIUSA,2006,103722572261.7】MENGF’HENSONR,WEHBEJANEKH,ETA1.MICRORNA一21REGULATESEXPRESSIONOFTHEPTENTUNLORSUPPRESSORGENEINHUMANHEPATOCELLULARCANCERJ.GASTROENTEROLOGY,2007,1332647658.8ZHUS,SIML,WUH,ETA1.MICRORNA21TARGETSTHETBNLORSUPPRESSORGENETRUPOMYOSINLTPM1【J.JBIOLCHEM,2007,282191432814336.9JOHNSONCD,ESQUELAKERSCHERA,STEFANIG,ETA1.THELET7MICRORNAREPRESSESCELPROLIFERATIONPATHWAYSINHUMANCELLSJ.CANCERRES,2007,671677137722.10JOHNSONSM,GROSSHANSH,SHINGARAJ,ETA1.RASISREGULATEDBYTHELET一7MICRORNAFAMILYJ.CELL,2005,1205635647.11AKAONAKAGAWANAOET.1ET7MICRORNAFUNCTIONSASAPOTENTIALGROWTHSUPPRESSORINHUMANCOLONOINCERCELLSJ.BIOLPHARMBULL,2006,295903906.12】MITCHELLPS,PARKINRK,KROHEM,ETA1.CIRCULATINGMICRORNASASSTABLEBLOOD.BASEDMARKERSFORCANCERDETECTIONJ.PROCNATLACADSCIUSA,2008,10510513L0518.13CHIMSS,SHINGTK,HUNGEC,ETA1.DETECTIONANDCHARACTERIZATIONOFPLACENTALMICRORNASINMATERNALPLASMAJ.CLINCHEM,2008,543482490.14WANGK,ZHANGS,MARZOLFB,ETA1.CIRCULATINGMICRORNAS,POTENTIALBIOMARKERSFORDRUGINDUCEDLIVERINJURYJ.PNAS,2009,F10644024407.15】CHENX,BAMAL,ETA1.CHARACTERIZATIONOFMICRORNASINSERUMANOVELCLASSOFBIOMARKERSFORDIAGNOSISOFCANCERANDOTHERDISEASESJ.CELLRES,2008,18109971006.16CHOWC.ONCOMIRSTHEDISCOVERYANDPROGRESSOFMICRORNASINCANCERSJ.MOLCANCER,2007,660.17LUJ,GETZG,ERICA,ETA1.MICRORNAEXPRESSIONPROFILESCLASSIFYHUMANCANCERJ.NACRE,2005,4357043834838.18RESNIKEKE,ALDERH,HAGANJP,ETA1.THEDETECTIONOFDIFFERENTIALLYEXPRESSEDMICRORNASFROMTHESERUNLOFOVARIANCANCERPATIENTSUSINGANOVELREALTIMEPCRPLATFORMJ.OYNECOLONCOL,2009,11215559.19】NGEK,CHONGWJINH,ETA1.DIFFERENTIALEXPRESSIONOFMICRORNASINPLASMAOFCOLORECTALCANCERPATIENTSAPOTENTIALMARKERFORCOLORECTALCANCERSCREENINGJ.GUT2009,9.EPUBAHEADOFPFINT.20ELMENJ,LINDOWM,SCHUTZS,LAWRENCEM,ETA1.LNAMEDIATEDMICRORNASILENCINGINNONHUMANPRIMATESJ/.NATURE,2008,452896899.分子诊断与治疗杂志2010年3月第2卷第2期JMOLDIAGNTHER,MARCH2010,VO1.2NO.21272L】CALINGA,CIMMINOA,FABBRIM,ETA1.MIR一15AANDHUMANPLACENTASOFPATIENTSWITHPREECLAMPSIAJ.AMJMIR一161CLUSTERFUNCTIONSINHUMANLEUKAEMIAJ.PROCNATLACADSCIUSA,2008,10551665171.22FABBRIM,GARZONR,CIMMINOA,ETA1.MICRORNA一29FAMILYREVERSABERRANTMETHYLATIONINLUNGCANCERBYTARGETINGDNAMETHYLTRANSFERASES3AAND3BJ.PROCNATLACADSCIUSA,2007,1041580515810.23】FONTANAL,FIORIME,ALBINIS,ETA1.ANTAGOMIR175PABOLISHESTHEGROWTHOFTHERAPYRESISTANTNEUROBLASTOMATHROUGHP21ANDBIMJ.PLOSONE,2008,3E2236.24】GILADS,MEIRIE,YOGEVY’ETA1.SERUMMICRORNASAREPROMISINGNOVELBIOMARKERSJ.PLOSONE,2008,39E3148.25PINELESBL,ROMEROR,MONTENEGROD,ETA1.DISTINCTSUBSETSOFMICRORNASAREEXPRESSEDDIFFERENTIALLYINTHEOBSTETGYNECOL,2007,196261.EL一6.26ZHUXM,HANSARGENTIL,ETA1.DIFFERENTIALEXPRESSIONPROFILEOFMICRORNASINHUMANPLACENTASFROMPREECLAMPTICPREGNANCIESVSNORMALPREGNANCIESJ.AMJOBSTETGYNECOL,2009,2006661.EL一7.27JOPLINGCL,YIM,ETA1.MODULATIONOFHEPATITISCVIRUSRNAABUNDANCEBYALIVERSPECIFICMICRORNAJ.SCIENCE,2005,30915771581.28CHENLHUANGZQ,WANGLS,ETA1.MICRORNA一125A一5PPALYREGULATESTHEINFLAMMATORYRESPONSE,LIPIDUPMKE,ANDORP9EXPRESSIONINOXLDLSTIMULATEDMONOCYTE/MACROPH

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