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丙型肝炎病毒感染实验室诊断进展.pdf

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丙型肝炎病毒感染实验室诊断进展.pdf

286的应用J.实用心脑肺血管病杂志。2007,155340342.【13HeeschenC,HammCW,MitrovicV,ela1.NterminalBtypenatri.ureticpeptidelevelsfordynamicriskstratificationofpatientswith}cutecoronarysyndromesJ】.Circulation,2004,l1032063212.14】DeFilippiC,vanKimmenadeRR。PintoYM.AminoterminalProBtypenatriureticpeptidetestinginrenaldiseaseJ.AmJCardiol,2008,1018288.15BayesGenisA,DeFilippiC,Jammi且Jr.UnderstandingaminoterminalproBtypenatriureticpeptideinobesityJ.AmJCardiol,2008,1013A8994.刘晓敏编辑丙型肝炎病毒感染实验室诊断进展叶燕芹,许文龙萧山医院检验科,浙江萧山311201关键词丙型肝炎病毒抗.HCV抗体HCV核心抗原酶联免疫吸附试验逆转录聚合酶链反应蛋白芯片检测荧光PCR仪中图分类号R446.6R512.61文献标识码A文章编号10061703201104028603据世界卫生组织统计,全球丙型肝炎病毒HCV的感染率约为3%,每年新发HCV病例约315万例¨J,而高度慢性化是该病的最大特征BJ。据报道慢性丙型肝炎患者10年内约有20%发展为肝硬化,肝硬化患者每年约3%发展为肝细胞癌【3J,严重威胁着人类的健康。因此。控制HCV感染的形势十分严俊,而早发现、早诊断和早治疗是防控HCV传染源、阻断传播途径最为有效的手段。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗HCV抗体、HCVRNA等实验室指标为临床诊断依据。现将HCV感染实验室诊断进展综述如下。l抗.HCV抗体、HCV.RNA实验室检测HCV是输血后肝炎病毒感染的最主要病原体之一,目前尚无有效的疫苗能够预防HCV感染。因此探讨抗HCV的快速有效的临床检测方法和试剂,有助于早发现、早治疗,并对控制各种交叉感染具有重要意义。HCV自从1989年被发现以来,科学家们已进行了大量研究,建立了各种检测方法。1990年第一代抗.HCVELISA试剂获得美国食品药品管理局批准,目前第三代试剂的敏感度和特异度都有很大提高。ELISA试剂为筛检试剂,存在一定数量的假阳性和假阴性结果,在HCV流行率低的人群中,如无偿献血者抗HCVELISA试剂的假阳性和假阴性问题都一直比较突出mJ。因此,1998年美国CDC建议,抗.HCV筛检阳性结果需要采用重组免疫印迹试验reeombinanlimmunoblotassay,RIBA或核酸试验nucleicacidtest,NAT证实后方可报告阳性。孙军红等1采用ELISA检测抗HCV抗体和逆转录聚合酶链反应RT.PCR法检测HCVBNA含量,同时检测150份血清标本,实验表明荧光RTPCR法的特异性为98%,敏感性为92%。两种检测均阳性者8l份,占54%81/150,抗一HCV阴性HCVRNA阳性12份,占8%12/150,抗一HCV阳性HCVRNA阴性18份,占12%18/150,两者均阴性的39例,占26%39/150。两种检测方法一致率为80%。两者检测经统计学处理无显著性差异x20.83,P0.05。研究表明,出现单独HCVRNA阳性12份,占8%,这可能与人体感染HCV早期血清尚未产生抗体或与抗HCV试剂敏感度有关,此时检测到HCVRNA对于诊断丙型肝炎具有很大意义。同时实验也表明单独抗HCV阳性18份,占12%,这可能与抗病毒治疗有关。在治疗期间抗HCV转阴要较HCVRNA转阴时间晚得多,况且HCVRNA检测中存在病毒RNA的逆转录,此时很容易被具有生物活性的酶类物质所降解,进而引起逆转录失败造成假阴性。因RTPCR法检测HCV过程较繁琐,所以HCV筛选仍以ELISA检测抗体为首选伸j,但从临床治疗角度出发,HCVRNA能够定量,同时通过HCVRNA含量的变化可以评价HCV治疗的疗效,而抗HCV不能做到。所以,在HCV感染时建议采用ELISA检测抗HCV抗体和RT.PCR法检测HCVRNA含量,这不仅可以降低漏诊,同时也为临床抗病毒提供有效的医学数据。2丙型肝炎病毒核心抗原HCVcAg检测HCV侵入人体后,血液中首先出现的是HCV抗原,经过一段时间后才可能产生相应的抗体。HCVcAg是由HCV基因中最为保守的部分编码而来,研究表明19J,患者外周血HCVtAg与HCVRNA含量有良好的相关性,HCVtAg的检出时间与HCVRNA相比平均仅相差I一2天,这样HCVeAg检测也可能成为检出HCV早期感染一个有用实验室指标。王福成等H刚调查了3972份献血者血清标本,初检抗HCV阳性lO份,阳性率0.25%,复检抗一HCV阳性12份,阳性率0.收稿日期20110110修回日期20110328作者简介叶燕芹,女,检验师,从事I|缶床基础检验工作。Tel18967163095Emailyeyanqinzjxsh.corn万方数据拯运星壅坌堑复蝤鏖垫Q至旦筮鲞篡翅30%,经HCVRNA检测证实仅有2份呈阳性,表明抗.HCV检测假阳性率较高,这是由于在ELISA法试剂中的包被抗原主要包括HCVCore,1、1S3,NS4和NS区特异性抗原等,其中大部分为基因工程表达抗原,虽然其特异性和灵敏度都比较高,但各厂商所用抗原来源、质量和各抗原片段包被比例的不同,因此试剂在灵敏度和特异性方面存在~定差异,从而导致抗.HCV结果的不一致,易产生漏检和生物假阳性等情况。文献11报道HCVtAg检测可检测到抗HCV检测阴性窗口期样本,表明HCVcAg检测可缩短感染窗口期,提高HCV检出结果的准确性,可明显降低抗HCV检测的假阳性。litPCR是一个很敏感的方法,HCV感染后1一13天,应用RTPCR即可检测到HCVRblA。Courouee等¨副报道,与检测抗一HCV相比,检测HCVeAg可以提前1个半月检出HCV早期感染者,与单人份NAT技术定量测定HCVRNA相比。ItCVtag检出时间仅晚2天,HCV.tag与HCVRNA几乎同时出现。王福成等¨叫应用RTFC11技术对仅ELISA法阳性的25份血清的检测结果,HCVtAg与HCVRblA检测符合率为66.67%,表明检测HCVtAg与HCVRNA有类似的效果。HCVtagELISA法快速、便捷,可与HCV抗体联合应用,阻断HCV经血传播途径,减少丙型肝炎的感染率。李蒙等¨到将量子点材料和磁微粒技术相结合,建立了针对HCVtAg的快速检测体系。随着荧光显微镜在各级医院的逐渐普及,只需荧光显微镜和外加磁场即可有效放大荧光信号的较为简易的检测体系,更易于被各级医院所接受。李蒙等采用针对HCVtAg不同抗原决定簇的单克隆抗体分别包被量子点与磁微粒,以夹心法结合待测标本中的抗原,预先完成用抗体对量子点及磁微粒的标记后,检测目标抗原所需时间仅为3040rain,较目前的ELLsA法大大缩短。该体系对蛋白抗原检测灵敏度可达5ng/mL,与PCR法检测HCV.RNA相比较,特异度为96.5%,灵敏度为81.8%,灵敏度略低,但与ELISA试剂检测结果无显著差别且与HAV抗体、HBV表面抗原阳性标本无交叉反应,同时不受脂血、溶血、黄疸的干扰,证明该体系检测目标抗原是可行的。此外,提高检测仪器对光信号的灵敏度后有望提高该方法的检测限。应用该体系对HCVtag进行检测,所需设备简单,缩短了从感染到检出的窗口时间,灵敏度和特异性较高,较PCR方法简单、廉价,较ELISA方法提高了检测速度,适用于大批量门诊及体检标本的检验,值得临床开发应用。3蛋白芯片检测HCV分片段抗体蛋白质芯片是伴随着基因芯片发展起来的一项新技术.已开始多方面的应用,以经过化学修饰的载玻片为固相基质,将HCV的融合抗原、核心抗原、非结构区的NS3,NS4,1、/5抗原,经过机器人点样系统按一定顺序点至玻片上,制成HCV分片段抗体检测蛋白质芯片。明安萍等¨41用该法对42份临床被确诊的慢性丙型肝炎患者血清及64份临床检测丙肝抗体ELISA法的门诊和住院患者血清标本进行检测。男75例,女31例,平均年龄35.5士lO.5岁,分别用ELISA法和蛋白质芯片法检测血清HCV抗体。结果显示106份血清标本287中,用ELISA法查抗体检测出阳性标本80份,阴性标本26份。106份血清标本中,用蛋白芯片查抗体检测出阳性标本77份,阴性标本27份,不确定结果标本2份。将ELISA法检测为阳性,蛋白质芯片法检测为非阳性的3份血清标本进行ItIBA法检测,结果1份ELISA法检测为阳性而蛋白质芯片检测为阴性的血清标本其RIBA法检测结果为阴性另2份ELISA法检测为阳性而蛋白质芯片检测为不确定结果的血清标本其RIBA法检测结果认为可疑。此实验表明,HCV分片段抗体检测蛋白质芯片具有良好的检测灵敏度,可降低ELISA试剂检测的假阳性同时,蛋白质芯片确证阳性的病例,说明感染性及肝病的存在。HCV以血液和性传播为主要传播手段,发病隐匿,症状不典型,加之公众对其认知水平较低,因此病毒的传播不易控制,患者也容易因不能及时诊断而错过治疗的最佳时机。控制HCV传播、提高丙型肝炎的治疗效果需要依赖于及时、准确的实验室诊断。分子诊断技术的进步,核酸检测包括HCV.RNA定性、定量检测应用于临床,大大缩短了HCV感染诊断的窗口期,也使抗病毒治疗的监测成为可能。特别是基于荧光共振能量转移原理的实时荧光PCIt仪的应用,可降低扩增产物污染,简化实验操作,使PCR检测分子诊断得到推广普及。近几年来,HCV抗原检测及抗原/抗体联合检测试剂的不断完善以及检测技术的进步和新技术的出现提高了HCV的诊断水平,但仍存在不少问题,需要今后研究和解决。参考文献1买制刚.丙型肝炎I临床检验技术现状与发展J.中国卫生检验杂志,2008.18I190192.2Kimw1t.TheburdenofhepatitisCintheunitedstate8J.1Iepatology,2002,365S330341.3Roti3L,RedaelliA,ColloredoG,eta1.OutcomeofliverdiseaseinalargecohortofhistologicallyprovenchronichepatitisCinfluenceofHCVgenotypeJ.EurJGastroenterolHepatol,2001,135501506.4AllainJP.HepatitisCvirusinblooddonationJ.Lancet,2005,365276278.5王福生.ELISA和PCR法筛查无偿献血者结果的分析J.细胞与免疫学杂志.2010,264398.【6谢立,吴晓东.丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义J.世界华人消化杂志。2005,137884886.7孙军红,张永乐,王巧燕,等.抗一ttCV抗体检测与荧光定量RTPCR检测在丙型肝炎诊断中的比较J.中国卫生检验杂志。2009。t9715621563.8文汉成,安杜刚。张红芳.抗一HCV与HCV.RNA检测结果不一致原因分析J.实用医技杂志,2004,1181707.1708.9leesR,Petel目onJ,NivenP,eta1.EfficacyofahepatitisCviruscor℃antigenenzymelinkedimmnunosorbentassayfortheidentitleationofwindowphmblooddonationsJ.VoxSang,2001,8019.23.IO】王福成。施之雍,蔡隽,等.丙型肝炎病毒核心抗原检测用于献血者筛查价值的探讨J.中华实验和临床病毒学杂志,2007,214389390.万方数据11汪国华,张贺秋,李少波,等.丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的研制及初步应用J】.中国输血杂志,2004,17299铷1.12c0椰Ⅲ∞AM,MarrecNL,BouehardeauF,et81.EfficacyofHCVcoreantigendetectionduringthepresetseroconversionpriodJ】.Transfusion,2000。40l1981202.13李蒙,李玲,余鹃春,等.量子点技术快速检测HCV核心抗原的研究J.国际检验医学杂志,2009,305430432,436.【14】明安萍。朱清静,李瀚曼,等.蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体的临床意义J.中华实验和临床病毒学杂志,2006,204415.陈泮藻编辑标记免疫分析与临床杂志征稿启事附对来稿的要求1.本刊为全国性公开发行的医学刊物双月刊,是中国科技论文统计源期刊中国科技核心期刊。按照普及与提高相结合、临床应用与基础研究兼顾的原则,登载标记免疫分析、核素诊断与治疗等领域的理论、应用与方法、抗体理论和抗体标记技术以及与免疫分析相关的分子生物学、生物化学、微生物学、临床检验学、细胞生物学等方面的研究成果和经验总结、新进展、新技术。本刊读者主要为标记免疫分析工作者、临床医生、检验工作者及有关专业科研人员。2.本刊辟有如下栏目临床研究、基础研究、方法研究、综述、讲座、专论、研究报告、技术经验交流、国外参考资料、新技术、新方法、试剂与试剂盒等。前六个栏目的文章每篇字数限6000字左右,其余栏目文章每篇字数限3000字左右。3.本刊欢迎广大作者踊跃投稿,来稿要求所述方法可靠,内容翔实,数据准确,结论正确。4.来稿注意I①文题字数不超过20个字②临床研究、基础研究、方法研究三个栏目的文章须有中英文摘要和35个关键词,摘要内容依次按目的、方法、结果、结论这些字在稿中不要出现以第三人称撰写,中英文摘要的内容必须相互对应,英文摘要请放在中文关键词下③中外文参考文献须有文题④每文中首次出现的外文缩略语一定要有对应的中文名称,其后请统一用外文缩略语或中文名称,切勿混用⑤不常见或生僻的外文缩略语,请附其外文全名⑥计量单位用符号表示,数字用阿拉伯数字表示⑦图表放在正文相应处。5.作者投稿时登陆WWW.chinabjmy.eonl,点击页面左上方的作者在线投稿,注册后进行投稿。作者也可随时登陆网站点击作者在线查稿查看稿件处理进展情况。6.投稿时,请邮寄单位介绍信或推荐信,同时在我社网址首页上下载版权转让协议,签字后同单位介绍信一同寄来。在杂志社未通知来稿不采用前,作者如想改投其他杂志,请事先同杂志社联系并征得同意。不采用的稿件除通知作者外不予退还。7.稿件文责由作者自负。稿件刊出后,按规定支付稿酬并赠杂志。8.每篇来稿请附稿件处理费50元,同意录用的稿件,请按规定及时支付版面费。9.本刊为双月刊,每本定价20.00元,全年120.00元含邮费。北京西城区三里河南四巷一号512室标记免疫分析与临床杂志社邮编100045联系电话i【0106852514101068515701网址IWWW.chinabjmy.tomEmailbjmychinaisotope.corn标记免疫分析与临床杂志社万方数据

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