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MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

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MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

硕士学位论文 论文题目 MiR-34b在儿童急性白血病中的表达、 甲基化调控及临床意义的研究 研究生姓名 王 娜 指导教师姓名 柴忆欢 教授 专 业 名 称 儿科学 研 究 方 向 儿童血液 论文提交日期 2013年 3月 MiR-34b 在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究 中文摘要 I MiR-34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及 临床意义的研究 中文摘要 目的: 研究 miR-34b 在儿童急性白血病中的表达及其启动子区 CpG 岛甲基化状 态,探讨其临床意义。同时检测 miR-34b 对细胞增殖是否有影响,进一步了解其生物 学功能。 方法 : 8 种白血病细胞株( U937, HL-60, MV4-11, M2R, K562, Raji, CCRF, DAMI) , 儿童初诊急性白血病( AL)患儿骨髓标本 87 例,其中初诊急性淋巴细胞 性白血病( ALL)患儿 55 例,初诊急性髓系白血病( AML)患儿 32 例,正常对照患 儿 43 例。提取细胞株或 其 骨髓标本 总 RNA,并进行引物特异性逆转录成 cDNA,运 用 实时荧光定量 PCR( qRT-PCR) 技术对 miR-34b 进行检测,循环阈值 (Ct 值 )比较法 进行 miRNA 表达定量分析。统计分析 白血病细胞株、 初诊 AL、 ALL、 AML 及 MLL+ 各组患 儿 miR-34b表达是否有差异,并根据临床资料进行进一步分析,以探讨 miR-34b 在儿童初诊 AL、 ALL 及 AML 的意义 。 同时 提取细胞株或 其 骨髓标本 DNA,进行 重 亚硫酸氢钠修饰基因组 DNA,运用甲基化特异性 PCR( MSP)检测 miR-34b 启动子 区 CpG 岛甲基化状态,并通过甲基转移酶抑制剂( 5-aza-2-dC)处理 HL-60 及 K562 进一步检测其甲基化状态,结合 临床资料 进一步 统计分析儿童 初诊 AL、 ALL 及 AML 与其甲基化状态是否相关。采用脂质体转染 hsa-miR-34b mimics 到 K562 细胞,通过 流式 细胞仪检测转染效率, CCK-8 法检测细胞增殖情况。 结果: 1、 miR-34b在 正常对照、 白血病细胞株、儿童初诊 AL、 ALL、 AML及 MLL+ 各 组 的相对表达量 (x±sx)分

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