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MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

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MiR34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

硕士学位论文论文题目MIR34B在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究研究生姓名王娜指导教师姓名柴忆欢教授专业名称儿科学研究方向儿童血液论文提交日期2013年3月MIR34B在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究中文摘要IMIR34B在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究中文摘要目的研究MIR34B在儿童急性白血病中的表达及其启动子区CPG岛甲基化状态,探讨其临床意义。同时检测MIR34B对细胞增殖是否有影响,进一步了解其生物学功能。方法8种白血病细胞株(U937,HL60,MV411,M2R,K562,RAJI,CCRF,DAMI),儿童初诊急性白血病(AL)患儿骨髓标本87例,其中初诊急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿55例,初诊急性髓系白血病(AML患儿32例,正常对照患儿43例。提取细胞株或其骨髓标本总RNA,并进行引物特异性逆转录成CDNA,运用实时荧光定量PCR(QRTPCR)技术对MIR34B进行检测,循环阈值CT值比较法进行MIRNA表达定量分析。统计分析白血病细胞株、初诊AL、ALL、AML及MLL各组患儿MIR34B表达是否有差异,并根据临床资料进行进一步分析,以探讨MIR34B在儿童初诊AL、ALL及AML的意义。同时提取细胞株或其骨髓标本DNA,进行重亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,运用甲基化特异性PCR(MSP)检测MIR34B启动子区CPG岛甲基化状态,并通过甲基转移酶抑制剂(5AZA2DC)处理HL60及K562进一步检测其甲基化状态,结合临床资料进一步统计分析儿童初诊AL、ALL及AML与其甲基化状态是否相关。采用脂质体转染HSAMIR34BMIMICS到K562细胞,通过流式细胞仪检测转染效率,CCK8法检测细胞增殖情况。结果1、MIR34B在正常对照、白血病细胞株、儿童初诊AL、ALL、AML及MLL各组的相对表达量XSX分别为522115、003003、118047、165069、018006、064034,与正常对照组相比,儿童初诊ALL组(P005)、白血病细胞株组、初诊AL组、AML组及MLL组(P均001)均有统计学差异。中文摘要MIR34B在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究II2、结合临床资料(如性别、年龄、免疫分型、染色体、融合基因、泼尼松实验等)做了进一

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