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TLR4与相关炎性因子在高脂饮食诱导肥胖大鼠中的表达

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TLR4与相关炎性因子在高脂饮食诱导肥胖大鼠中的表达

中图分类号密级TLR4与相关炎性因子在高脂饮食诱导肥胖大鼠中的表达ExpressionofTollLikeReceptor4andRelativeInflammatoryFactorsinObeseRatsFedbyHighFatDiet计学位论文39页表插格6个图8幅指导教师刘正娟教授申请学位级别硕士学位陈禹含学科专业儿科学培养单位大连医科大学附属第二医院完成时间二。一三年五月答辩委员会主席独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作砉签名叁禹金签字日期坐年上月上日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于请在以下相应方框内打41.保密口,在一年解密后适用本授权书。2.不保密吼作者签名一『专、焉舍日期.2。l≥年,月,日导师签名2谚巧醐砌B年朋7日目录一、摘要1一中文摘要1二英文摘要3二、正文5一前言5一一日IJ舌二材料与方法61.主要试剂及药品62.仪器设备73.动物模型的制备74.酶联免疫吸附测定法94.1准备试剂94.2检测程序94.3结果计算与判定105.免疫组化染色检测下丘脑及肝脏组织中TLR4的表达105.1常规石蜡包埋105.2组织切片105.3免疫组织化学染色法106.RealTimePCR方法测定下丘脑及肝脏组织中TLR4mRNA的表达量126.1总RNA的提取126.2RealTimePCR法检测目的基因相对表达量137.统计学方法14三结果151.大鼠生长状况及两组大鼠饲料摄入量和热量情况152.大鼠血清中炎症因子TNF.Q、IL.6的水平173.免疫组化染色显示TLR4组织中蛋白的表达184.下丘脑及肝脏组织中TLR4mRNA表达水平18四讨论19五结论24六参考文献25三、综述28一综述28二参考文献34四、附录DIDOIDDLD36五、攻读学位期间发表文章情况38六、致谢39大连医科大学硕士学位论文TLR4与相关炎性因子在高脂饮食诱导肥胖大鼠中的表达硕士生姓名指导教师专业名称陈禹含支4正娟教授儿科学摘要目的探讨在高脂饮食诱导下Toll样受体4Tolllikereceptor4,TLR4在肥胖大鼠下丘脑及肝脏组织中的表达,以及血清中相关炎性因子如肿瘤坏死因子TNF.0【、白介素.6IL.6的改变。方法选择清洁级雄性4周龄SD大鼠30只,体重约809,购白大连医科大学动物部。将实验动物按随机排列法分为两组高脂饮食组20只和正常饮食对照组10只,共喂养8周。建立高脂饮食诱导的肥胖DIO大鼠模型,应用免疫组化染色方法对比两组大鼠下丘脑及肝脏组织TLR4在蛋白水平表达差异,RealTimePCR方法检测下丘脑及肝脏组织中TLR4在mRNA水平的表达差异,以及ELISA方法分析血清中相关炎性因子肿瘤坏死因子TNF.0【、白介素.6IL.6的改变。结果1.喂养第8天,DIO组大鼠的每日食物摄入量高于正常饮食对照组大鼠,且差别有统计学意义PO.05第12天开始直至第36天,DIO组大鼠的每日食物摄入量显著高于正常饮食对照组大鼠,差别有显著统计学意义P0.01。第44天以后正常饮食对照组大鼠的每日食物摄入量开始高于DIO组大鼠第48天以后,正常饮食对照组大鼠的每日食物摄入量高于DIO组大鼠,两组问差别有统计学意义P0.05。喂养第4天直至结束,DIO组大鼠的每天食物能量摄入要显著高于正常饮食对照组大鼠,两组间差异有显著统计学意义PO.01。喂养8周后,DIO组平均体重为456.38419.20g,高于正常饮食对照组平均体重372.10422.47g,两组间比较差异有显著性意义P0.01。2.RealTimePCR方法显示,DIO组大鼠下丘脑组织中的TLR4mRNA表达量0.56±0.16,正常饮食对照组TLR4mRNA表达量O.39±0.10,DIO组高于正常饮食对照组,两组间比较有统计学意义P0.05DIO组大鼠肝脏组织中的TLR4mRNA表达量O.87±O.24,正常饮食对照组TLR4mRNA表达量O。54±0.16,DIO组高于正常饮食对照组,两组间比较有显著统计学意义PO.01。大连医科大学硕士学位论文3.免疫组化染色结果显示DIO组大鼠下丘脑及肝脏细胞胞浆呈黄染,可见棕黄色颗粒,表达呈强阳性饮食对照组呈弱表达。4.DIO组大鼠血清中TNF.Q水平为300.3627.17pg/ml,高于正常饮食对照组大鼠血清中TNF.Q水平164.1530.22pg/ml两组间差异有显著统计学意义PO.01。DIO组大鼠血清中IL.6水平为231.5017.01pg/ml,高于正常饮食对照组大鼠血清中IL.6水平155.3619.63pg/ml两组间差异有显著统计学意义P0.01。结论Toll样受体4在肥胖大鼠下丘脑及肝脏中的表达增多,提示下丘脑及肝脏的炎症反应参与饮食诱导肥胖的发生机制。TNF.a、IL.6在肥胖大鼠血清中表达增多,提示TNF.a、IL.6是参与高脂饮食所致炎症的重要细胞因子。关键词高脂饮食肥胖Toll样受体4肿瘤坏死因子白介素62大连医科大学硕士学位论文ExpressionofTollLikeReceptor4andRelativeInflammatoryFactorsinObeseRatsFedbyHighFatDietObjectiveMasterdegreecandidateCHENYuhanSupervisorProfessorLIUZhengjuanMajorPediatricsAbstractToinvestigatetheexpressionofTolllikereceptor4inhypothalamusandliverofobeseratsfedbyhighfatdietandandthechangeofTNF一0【、IL6inSerum.MethodsThirtySpragueDawleymalerats,4weeksold,weighsabout809,purchasedfromSPFlaboratoryanimalcenterofDalianMedicalUniversity.Theanimalswererandomlydividedintotwogroupshighfatdietgroupn220andnormaldietcontrolgroupn210.Bothgroupsarefedfor8weeks.Toduplicatetheobeseratmodelfedwithhi曲fatdietdiet.inducedobesityrats,DIOgroup.TheTLR4expressionofHypothalamusandliverbyimmunohistochemicalstainingandRealTimePCR.TheanalysisofseruminflammatoryfactorsTNF0【.IL6changesbyELISA.HypothalamusandliverimmunohistochemicalstainingandRealTimePCRofTLR4expression.Results1.ThedallyfoodintakeofDIOgroupfeedingonthe8thdaywashigherthanthecontrolgroup,thedifferencewasstatisticallysignificantP0.05From12daystothe36thday,theDIOgroupdailyfoodintakewassignificantlyhigherthanthecontrolgroupP0.O144dayslater,thedailyfoodintakeofcontrolgroupbeganhigherthanobeserats.48dayslater,thedailyfoodintakeofcontrolgroupwashigherthanobeseratsP0.05.TheenergyintakeofDIOgroupwashigherthanthecontrolgroupthedifferenceoffoodenergyintakebetweentwogroupswassignificantP0.01.After8weeks,theaverageweightofDIOgroup456.38419.20gwashigherthantheaverageweightofnormaldietcontrolgroup372.10士22.47gthedifferencebetweentwogroupswassignificantP0.01.2.Real.TimePCRshowsthefoldofhypothalamusTLR4mRNA0。5640.16inDIOgroupwashigherthanthatincontrolgroupO.3940.10.Thedifferencebetween一.大连医科大学硕士学位论文二二一一twogroupswassignificantP0.05.ThefoldofliverTLR4mRNA0.870.24inDIOgroupwashigherthanthatincontrolgroup0.540.16.Thedifferencebe铆een铆ogroupswassignificantP0.01.3ImmunohistochemicalstainingshowedthatDIOratshypothalamuSandlivercellcytoplasmwasstainedinyellow,andbrowngranulescanbeobservedwhichmdicatedtargetedexpressionwasstronglypositivecontrolgroupexpressedweakly.4ELISAshowsthefoldofTNFc【inDIOgroup300.3627.17pg/mlwashigherthanthatincontrolgroup164.15士30.22pg/m1.ThedifferencebetweentwogroupswassignificantP0.01.ThefoldofIL一6inDIOgroup231.50a17.01pg/mlwashigherthanthatincontrolgroup155.3619.63pg/m1.Thedifferencebe俩eentwogroupswassignificantP0.O1.ConclusionTheincreasedTLR4expressionsinhypothalamusandliverofobeseratindicatedthatinflammatoryresponseinthosetworegionsinvolvedinthemechanismofhighfatdietinducedobesity.TheincreasedTNF。0【andIL一6expressionsinse门m1ofobeseratindicatedthatTNF一0【andIL6wereimportantcytokineinvolvedinthehigh.fatdiet.inducedinflammatioTlKeywordshighfatdietobesityToll.1ikereceptor4TNF.aIL。64

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