欢迎来到人人文库网! | 帮助中心 人人文库renrendoc.com美如初恋!
人人文库网
首页 人人文库网 > 资源分类 > PDF文档下载

WT1基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究

  • 资源大小:5.34MB        全文页数:54页
  • 资源格式: PDF        下载权限:游客/注册会员/VIP会员    下载费用:260
游客快捷下载 游客一键下载
会员登录下载
下载资源需要260

邮箱/手机号:
您支付成功后,系统会自动为您创建此邮箱/手机号的账号,密码跟您输入的邮箱/手机号一致,以方便您下次登录下载和查看订单。注:支付完成后需要自己下载文件,并不会自动发送文件哦!

支付方式: 微信支付    支付宝   
验证码:   换一换

友情提示
2、本站资源不支持迅雷下载,请使用浏览器直接下载(不支持QQ浏览器)
3、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰   

WT1基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究

WTL基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究中文摘要目的采用实时荧光定量PCRRQ.PCR方法检测WTL基因在急性白血病患JLPB周血和骨髓中的表达,探讨WTL基因在检测微小残留病MINIMALRESIDUALDISEASE,MRD中的价值。方法采用实时荧光定量PCR方法,检测23例初治急性白血病患儿、80例次完全缓解患儿外周血及骨髓中WTL基因的表达水平,以10例非肿瘤患儿为正常对照;流式细胞术检测MRD,并同时观察白血病患儿疾病状态。23例初治急性白血病患儿包括16例急性淋巴细胞白血病ALL及7例急性粒细胞白血病AML,其中初治ALL组于治疗前、治疗第15天、33天及3个月,初治AML组于治疗前、治疗第15天、1个月、3个月分别采集外周血和骨髓标本,检测WTL表达。80例次完全缓解组患儿ALL56例次,AML24例次于治疗第3个月、6个月及12个月分别采集外周血和骨髓检测WTL表达阳性率。结果1、正常对照组儿童外周血及骨髓WTL表达阳性率均为0,初治白血病组患,SLA,B周血及骨髓WTL表达阳性率均为65.2%,初治白血病组外LIIIIIIIIIIIIIIIITILLIY2338662周血及骨髓WTL的表达均明显高于正常对照组PO.001。ALL和AML外周血WTL表达阳性率比较,骨髓WTL表达阳性率比较,差异均无统计学意义P0.533。完全缓解患儿治疗第3个月、6个月外周血及骨髓WTL表达阳性率明显高于第12个月P均O.05。2、初治ALL患儿治疗前、治疗第15天、33天及3个月外周血WTL表达量分别为0.530.14、0.24士0.13、0.180.05、0.15A0.11,各组间差异具有统计学意义F24.68,PO.001;治疗第15天、33天及3个月WTL表达量明显低于治疗前P均O.05,第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义P0.05。初治ALL患儿治疗前、15天、33天及3个月骨髓WTL表达量分别为0.7240.14、0.1640.06、O.12士O.02、O.120.05,各组间差异具有统计学意义F135.27,PO.001,治疗第15天、33天及3个月WTL表达量明显低于治疗前P均O.05治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义PO.05。所有初治ALL患儿皆于33天达完全缓解。3、初治AML患儿治疗前、15天、1个月及3个月外周血WTL表达量分别为0.70A0.07、0.20A0.06、O.18土0.05、0.1540.06,各组间差异具有统计学意义F139.29,PO.001,治疗第15天、33天及3个月WTL表达量明显低于治疗前P均O.05。治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义PO.05。初治AML患儿治疗前、治疗第15天、1个月及3个月患儿骨髓WTL表达量分别为O.8710.04、0.240.05、0.21士0.05、O.18士O.10,各组间差异具有统计学意义F241.29,P0.001,治疗第15天、33天及3个月WTL表达量明显低于治疗前P均O.05。治疗第15天、33天及3个月两两比较,差异均无统计学意义PO.05。全部初治AML患儿皆于12个月内获得完全缓解。4、初治ALL患JLJ,L周血WTL表达量与MRD成正相关,FO.999,PO.001;初治ALL患儿骨髓WTL表达量与MRD成正相关RO.997,PO.001。5、3例复发白血病患儿复发前3个月WTL水平上升。结论1、实时荧光定量PCR方法检测白血病患儿WTL表达简便易行、准确性高、特异性好。2.WTL基因在非肿瘤儿童外周血及骨髓均不表达,而在急性白血病治疗前高表达。3.初治急性白血病患儿诱导缓解化疗后WTL表达水平明显低于初治时。4.WTL阳性率随着治疗时间的延长明显下降。5.ALL患HIL周血及骨髓中WTL表达量与流式细胞仪检测的MRD呈正相关。对急性白血病患.JL,J,B周血及骨髓中WTL基因表达进行定量分析,可用于MRD的监测。硕士研究生尹栓儿科学专业指导教师李学荣副教授【关键词】WTL;急性白血病;微小残留病;实时荧光定量PCRSTUDYOFQUANTIFICATIONOFWTLFORMONITORINGMINIMALRESIDUALDISEASEINCHILDHOODACUTELEUKEMIAABSTRACTOBJECTIVETODETECTTHEEXPRESSIONOFWTLGENEINPERIPHERALBLOODPBANDBONEMARROWBMBYUSINGREALTIMEQUANTITATIVEPCRRQPCR,TOEXPLOREITSVALUEFORMONITORINGMINIMALRESIDUALDISEASEINCHILDRENWITHACUTELEUKEMIA.METHODSWTLGENEWASDETECTEDWITHRQPCRINPBANDBMFROM23DENOVOALCHILDRENAND80CHILDRENWITHCOMPLETEREMISSIONCR,10CASESOFNON.MALIGNANTDISEASEWEREUSEDASCONTROLGROUP.FLOWCYTOMETRYFCMWASUSEDTODETERMINEMRDANDOBSERVETHEDISEASEPROCESSOFALCHILDREN.23CASESWEREPRELIMINARYDIAGNOSISPATIENTS,INCLUDING16ACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAALLAND7ACUTEMYELOIDLEUKEMIAAMLPATIENTS.BMANDPBFROMALLCHILDRENBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHWERECOLLECTED.BMANDPBFROMAMLCHILDRENBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHWERECOLLECTED.COMPLETEREMISSIONGROUPINCLUDING56ALLAND24AMLCASES,BMANDPBONTHETHIRDMONTH、SIXTHMONTHANDTWELFTHMONTHWERECOLLECTED.RESULTS1THEPOSITIVEEXPRESSIONRATEOFWTLWERE0AND65.2%RESPECTIVELYINPBANDBMFROMCONTROLGROUPANDDENOVOALCHILDREN.THEPOSITIVEEXPRESSIONRATEOFWTLGENEINCHILDHOODACUTELEUKEMIAWASHIGHERTHANNORMALCONTROLSPO.OO1.THEREWASNOSTATISTICDIFFERENCEPBCELLSWTLPOSITIVEEXPRESSIONRATEBETWEETALLANDAMLPO.533.THEREWASNOSTATISTICDIFFERENCEBMCELLSWTLPOSITIVEEXPRESSIONRATEBETWEETALLANDAMLPO.533.THEPOSITIVEEXPRESSIONRATEOFWTLGENEONTHETHIRDMONTH、SIXTHMONTHWASHIGHERTHANTWELFTHMONTHINCOMPLETEREMISSIONGROUPPO.05.2WTLGENEEXPRESSIONSHOWED0.530.14、0.240.13、O.18士0.05、O.1540.11INPBCELLSBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHRESPECTIVELYINDENOVOALLCHILDREN,SIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDF24.68,P0.001.THEEXPRESSIONOFWTIGENELEVELSBEFORETREATMENTWASHIGHERTHANTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHINPBPO.05.NOSIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDONTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHINPBPO.05.WTLGENEEXPRESSIONSHOWED0.7240.14、0.1640.06、O.12士O.02、O.12士O.05INBMCELLSBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHRESPECTIVELYINDENOVOALLCHILDREN,SIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDF135.27,P0.001.THEEXPRESSIONOFWTLGENELEVELSBEFORETREATMENTWASHIGHERTHANTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHINBMP0.05.NOSIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDONTHE15THDAY、33THDAYANDTHIRDMONTHINBMPO.05.16DENOVOALLCHILDRENWERECOMPLETEREMISSIONONTHE33THDAY.3WTLGENEEXPRESSIONSHOWED0.700.07、0.200.06、O.180.05、O.150.06INPBCELLSBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHRESPECTIVELYINDENOVOAMLCHILDREN,SIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDF139.29,P0.001.THEEXPRESSIONOFWTLGENELEVELSBEFORETREATMENTWASHIGHERTHANTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHINPBP0.05.NOSIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDONTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHINPBP0.05.WTLGENEEXPRESSIONSHOWED0.870.04、0.2410.05、0.210.05、O.180.10INBMCELLSBEFORETREATMENTANDONTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHRESPECTIVELYINDENOVOAMLCHILDREN,SIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDF241.29,P0.001.THEEXPRESSIONOFWTLGENELEVELSBEFORETREATMENTWASHIGHERTHANTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHINBMP0.05.NOSIGNIFICANTDIFFERENCEWASFOUNDONTHE15THDAY、FIRSTMONTHANDTHIRDMONTHINBMPO.05.7DENOVOAMLCHILDRENWERECOMPLETEREMISSIONONTHEFIRSTMONTH.4MRDWASPOSITIVELYRELATEDTOWT1GENELEVELSINPBRO.999,PO.001.MRDWASPOSITIVELYRELATEDTOWTLGENELEVELSINBMRO.997,P0.001.5WHENTHEPATIENTSWERERELAPSED,THEWTLGENELEVELSINCREASE.CONELUSIONS1THEREALTIMEQUANTITMIVEPCRASSAYHASGOODSENSITIVITY,REPEATABILITYANDSPECIFICITY.2THEREWASNOEXPRESSIONINCHILDRENWITHOUTMALIGNANTDISEASE,BUTTHEEXPRESSIONWASHIGHBEFORETREATMENTINDENOVOALCHILDREN.3THELEVELSOFWT1GENEINCOMPLETEREMISSIONGROUPWERELOWERTHANINDENOVOALCHILDREN.4WITHTHEDEVELOPMENTOFTREATMENT,THEPOSITIVEEXPRESSIONRATEOFWTLWASDECLINEDSIGNIFICANTLY.5MRDWASPOSITIVELYRELATEDTOWT1GENELEVELSINDENOVOALLCHILDREN.MONITORINGWT1WITHRQPCRCANACTASAMETHODTODETECTMINIMALRESIDUALDISEASEINCHILDRENWITHACUTELEUKEMIA.POSTGRADUATESTUDENTYINSHUANPEADIATRIESDIRECTEDBYPROFILIXUERONGKEYWORDSWTL;ACUTELEUKEMIA;MINIMALRESIDUEDISEASE;REALTIMEQUANTITATIVEPCR目录弓I言1第1章材料与方法21.1材料21.1.1研究对象21.1.2实验试剂21.1.3实验仪器31.2WTL定量分析方法41.2.1标本采集与保存41.2.2总RNA的提取41.2.3RNA浓度检测及鉴定”51.2.4EDNA的合成51.2.5PCR反应61.3流式细胞仪MRD检测71.4数据处理71.5统计学处理”8第2章结果”92.1荧光定量PCR方法的准确性和特异性检测92.1.1引物特异性检测92.1.2扩增曲线102.1.3溶解曲线_102.2急性白血病与正常对照组WTL表达阳性率比较112.2.1急性白血病与正常对照组外周血WTL表达阳性率比较112.2.2急性白血病与正常对照组骨髓WTL表达阳性率比较112.3初治ALL与AML患儿WTL表达阳性率比较112.4完全缓解组WTL表达阳性率比较122.4.1ALL完全缓解患儿治疗不同时间外周血WTL表达阳性率比较122.4.2AML完全缓解患儿治疗不同时间外周血WTL表达阳性率比较122.4.3ALL完全缓解患儿治疗不同时间骨髓WTL表达阳性率比较“132.4.4AML完全缓解患儿治疗不同时间骨髓WTL表达阳性率比较132.5初治急性白血病患儿不同时期WTL表达水平比较142.5.1ALL患儿不同时间外周血WTL表达水平比较”142.5.2ALL患儿不同时间骨髓WTL表达水平比较”152.5.3AML患儿不同时间外周血WTL表达水平比较”162.5.4AML患儿不同时间骨髓WTL表达水平比较172.6初治组WTL定量水平与流式细胞术检测MRD相关性182.6.1初治ALL外周血WTL定量水平与流式细胞术检测MRD关系”182.6.2初治ALL骨髓WTL定量水平与流式细胞术检测MRD关系182.7急性自血病治疗疗效观察和复发患儿WTL表达19第3章讨论21结论”23参考文献24

注意事项

本文(WT1基因定量分析在儿童急性白血病MRD检测中的研究)为本站会员(vyyolyg827)主动上传,人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知人人文库网(发送邮件至[email protected]或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!

温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。

关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服客服 - 联系我们

网站客服QQ:2846424093    人人文库上传用户QQ群:460291265   

[email protected] 2016-2018  renrendoc.com 网站版权所有   南天在线技术支持

经营许可证编号:苏ICP备12009002号-5