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川崎病患儿NKG2D表达变化初探

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川崎病患儿NKG2D表达变化初探

遵义医学院硕学位论文遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确说明并表示了谢意。学位论文作者签名岛女.签字日期Ⅵ刍年岁月细日遵义医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定,即遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文,即遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权,信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位做作者躲瓠.签字日期,侈年r月h日II导师签名/而芬谆签字日期wI年r月如日遵义医学院硕十学位论文缩略词KDMCLSNKCTLCALMCULBP英文全称Kawasakidisease英文缩略词表/中文全称川崎病嘲丽mucocutaneouslymphnodesyndrome皮肤黏膜淋巴结综合征自然杀伤CD8cytotoxiclymphoeytesCD8细胞毒性T淋巴细胞coronaryarterylesion冠脉损伤mononuclearcells单核/巨噬细胞UL16bmdingproteins人巨细胞病毒蛋白ULl6的结合蛋白MICAmajorhistocompatibilitycomplexIMHCI相关分子APCRILTNF.伍mRNAELISAIFN吖TGFpⅣIGAPCRADAPITAMP13KSTAT5chainrelatedmoleculesApolymerasechainreactioninterleukintransforminggrowthfactorpantigenpresentingcellrheumatoidarthritisadaptorproteinactivationmotifsphosphatidylinositol3kinaseIll聚合酶连反应白细胞介素肿瘤坏死因子a信使RNA酶联免疫吸附干扰素r转化生长因子p丙种球蛋白抗原提呈细胞风湿性关节炎转接蛋白免疫受体酪氨酸活化基序磷脂酰肌醇3.激酶信号转导和转录活化遵义医学院硕士学位论文英文缩略词表NFATSYKZAP70H60RaelHCNⅣGPIIDDMSLEoftrauscription5蛋白5nuclearfactorofactivatedTcellsT细胞核因子spleentyrosinekinasechainassociatedproteinof70000ahistocompatibility60retinoicacidearlytranscripthumancytomegalovirusglycosylphosphatidylinositolinsulindependentdiabetessystemiclupuserythematosus脾酪氨酸激酶70000的链相关蛋白次要组织相容性抗原60视黄酸早期转录因子1人类巨细胞病毒糖基磷脂酰肌醇胰岛索依赖性糖尿病系统性红斑狼疮遵义医学院硕士学位论文目录II目录l、论文川崎病患儿NKG2D表达变化初探1英汉缩略词对照表Ⅲ中文摘要1英文摘要2前言4日日舌材料与方法5结果12讨论24结论26参考文献272、综述NKG2D及其配体研究进展.313、致谢494、作者简介50V遵义医学院硕学位论文中文摘要曼皇曼曼曼鼍曼曼曼曼曼皇曼曼曼皇曼曼量曼曼鼍量量曼I|一IIIIIII.}川崎病患儿NKG2D表达变化初探中文摘要目的l观察川崎病1①患儿自然杀伤NK细胞和CDST细胞表面NKG2D表达,探讨导致KD患儿免疫功能紊乱的可能机制。方法我院2011年7月.2012年4月住院急性期KD患几46例,其中冠脉损伤患儿CAL16例,非冠脉损伤患儿CAL。30例,同龄健康对照NC30例。KD患儿分别于静脉丙种球蛋白ⅣIG治疗前后直接取血备检。流式细胞术检测外周血NK细胞、CD8T细胞表面激活性受体NKG2D及抑制性受体NKG2A表达,CDl4单核细胞MC表面NKG2D配体MHCI相关分子AMICA与人巨细胞病毒蛋白ULl6的结合蛋白lULBP.1表达采用实时荧光定量PCRReal.timePCR检测CDl4MCI兰i细胞介素113IL.18、IL.6、肿瘤坏死因子aTNF.amRNA表达酶联免疫吸附ELISA法检测血浆IL.7,IL.12,IL15,干扰素丫IFNw以及转化生长因子13TGF.p等细胞因子浓度。结果1.急性期KD患儿NK细胞及CDST细胞表面NKG2D表达明显低于对照组PO.05。结论KD患儿NK细胞、CD8T淋巴细胞NKG2D表达下调可能是导致KD患儿NK细胞和CDST淋巴细胞杀伤活性下降,MC异常活化,炎症细胞因子高表达的原因之一IL.7、IL.15与IFNy等细胞因子浓度异常参与NKG2D表达下调IVIG可能通过调控儿.7等细胞因子产生间接调节NK细胞与CD8T细胞NKG2D表达.关键词川崎病丙种球蛋白NlG2D炎症因子遵义医学院硕十学位论文英文摘要AberrantlyDecreasedLevelsofNKG2DExpressioninChildrenwithKawasakiDiseaseAbstractobjectiveThestudyisdesignedtoinvestigatethechangesofNKG2DexpressiononCD8TcellsandCD3CD56NKcellsinKawasakidisease1D.Methods46childrenwithKDadmittedtotheShenzhenChildrenHospitalbetweenJune2011andApril2012wereincludedinthestudy.PatientswithKDweredividedintotheCoronaryarterylesionKDCALgroup11_l6andtheKDCALgroupn_30accordingtotheechocardiographicexaminationresults.30agematchedhealthychildrenNcwereenrolledintothisstudy.Bloodsampleswereobtainedbeforetreatmentwith2gkgIdayIintravenousimmunoglobulinIVIGandafterIVIGtreated.NKG2D/NKG2AexpressiononCD3CD56NKcellsandCD8十Tlymphocytes,andNKG2DligandssuchasmajorhistocompatibilitycomplexIchainrelatedmoleculesAMICAandUL16bindingproteinsULBP1expressiononCDl4mononuclearcellsMCWeTanalyzedbyflowcytometryinpatientswithKD.RealtimepolymerasechainreactionPCRWasusedtoevaluatethemRNAlevelsofinterleukinIL一1p,IL6andtumournecrosisfactorTNFainCD14cells.Plasmacytokine【IL7,IL12,IL15,interferonIFN丫andtransforminggrowthfactorTGFfI】concentrationsweremeasuredbyELISA.Results1.ThelevelsofNKG2DonNKcellsandCD8TcellsexpressioninacutephaseofKDweresignificantlylOWerthanthoseinnormalcontrols伊3.0ram,年龄5岁以上者冠脉内径4.0ram,或已发生冠状动脉瘤的患儿。据此,将KD患儿分为冠脉损伤组KD.C』心,n16和非冠脉损伤组KD.CAL。,n30。同年龄健康儿童NC30例,为同时期在儿童保健科体检儿童,其中男16例,女14例,平均年龄2岁1.1岁至4.3岁。所有全血标本取后均立即送检。实验获受试患儿家长知情同意,且通过医院医学伦理委员会批准。1.2主要实验试剂1.2.1流式细胞术标记抗体抗体CD3.FITC同型对照FITCMouseIgGlBeckmanCoulter公司CD8.PC5同型对照PC5MouseIgGlBeckmanCoulter公司CD14.PC5同型对照PC5MouseIgGlBeckmanCoulter公司CD56.PC5同型对照PC5MouseIgGlBeckmanCoulter公司NKG2APE同型对照PEMouseIgGtBeckmanCoulter公司NKG2DPE同型对照PEMouseIgGteBioscience公司MICAPE同型对照FITCMouse培GleBioscience公司ULBP.1.PE同型对照FITCMouselgGleBioscience公司溶血素CBeckmanCoulter公司PBS缓冲液1.2.2淋巴细胞分离液上海索宝来生物公司1.2.3CDl4T细胞免疫磁珠Invitrogen公司1.2.4RNA提取试剂盒lnvitrogen公司5

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