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儿童新诊断的ITP血小板凋亡与Hp感染的关系

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儿童新诊断的ITP血小板凋亡与Hp感染的关系

ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERTHERELATIONSHIPBETWEENCHILDRENNEWLYITPPLATELETAPOPTOSISANDHPINFECTIONBYMANMANZHAISUPERVISORPROF.GUANGYAOSHENGPEDIATRICSTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMAY2013原创性声明本人所呈交的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的,除了文中已经注明引用的内容外,本人的学位论文没有剽窃、抄袭等违反学术道德、学术规范的侵权行为。对本文研究作出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确的方式表明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名引嫩如|≥年弓只LC|日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者程艘艘日期≥D房年占月F印日摘要儿童新诊断的ITP血小板凋亡与HP感染的关系研究生翟慢慢导师盛光耀教授郑州大学第一附属医院儿内科河南郑州450052摘要免疫性血小板减少症IMMUNETHROMBOCYTOPENIA,ITP,是一种儿童最常见的出血性疾病之一,男女发病无差异,春秋季发病率较高。临床上根据病程长短分为三型新诊断的ITPNEWLYITP即诊断之日起,3个月之内;持续性ITPPERSISTENTITP3~12个月;慢性ITPCHRONICITP持续12个月以上。关于ITP的发病机制尚不清楚,目前大都认为与机体的免疫功能紊乱有关。最近尹俊、邬加佳等人研究发现慢性ITP患儿存在着血小板凋亡现象,并且与健康儿童相比,血小板凋亡差异具有统计学意义。JEANNINEWINKLER等人不仅发现ITP患儿存在着血小板凋亡现象,而且发现经丙种球蛋白治疗前后血小板凋亡指标差异具有统计学意义。与此同时YEHJJ等人发现血小板凋亡与幽门螺杆菌HP感染有一定的关系。,细胞凋亡APOPTOSIS又称之为程序性细胞死亡,是指活体内单个细胞或小团细胞的死亡,其死亡细胞的细胞膜和细胞器膜不破裂,不引起死亡细胞的自溶,也不引起急性炎症反应。随着对细胞凋亡的深入研究,人们对血小板凋亡也有了明确的认识,发现运用流式细胞仪检测血小板CASPASE.3活性及磷脂酰丝氨酸PS的位置变化能反映血小板凋亡现象。幽门螺杆菌HP是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的革兰阴性杆菌,主要寄生在胃幽门、胃窦等附近的黏膜上,是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织MAIT淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。儿童是幽门螺杆菌的易感人群。那么儿童新诊断的ITP患者血小板凋亡现象如何,血小板凋亡与HP感染有着怎样的关系,我们就此进行了以下研究。摘要目的1.研究新诊断的ITP患儿血小板凋亡现象。2.研究新诊断的ITP患儿血小板凋亡与HP感染的关系。3.研究新诊断的ITP患儿经皮质醇激素或丙种球蛋白治疗后血小板凋亡现象。方法对2011年9月份至2012年12月份郑州大学第一附属医院及郑州市儿章医院儿科门诊、病房确诊的新诊断的ITP患儿进行C13呼气试验检测,收集C13阳性患儿、C13阴性患儿及同期体检健康儿童各20例。C13阳性组20例,年龄2岁~13岁,其中男孩12例,女孩8例,血小板计数18109~72X109/L;C乃阴性组20例,年龄2岁13岁,其中男孩12例,女孩8例,血小板数18109~72X109/L。健康儿童组20例,年龄2岁~13岁,其中男孩12例,女孩8例,血小板计数100109一300109/L。分别抽取健康儿童、LTP患儿治疗前及治疗2天后静脉血3.6ML,放入含有3.8%柠檬酸钠0.4ML血液与3.8%柠檬酸钠体积比为91抗凝剂的塑料管中。分离血小板,运用流式细胞仪检测、分析、记录血小板凋亡指标CASPASE一3及PS的变化。采用SPSSL6.0统计软件进行统计学分析,以Q0.05作为检验水准。以上ITP诊断均符合2011年美国血液学会制定的诊断标准。所有儿童在采集标本2周前均未进行过抗生素治疗。试验在得到伦理委员会许可并且家属知情同意情况下进行。结果1.健康儿童血小板凋亡现象CASPASE.3活性平均升高1.1%0%.6.9%;PS外翻现象平均增加1.53%0.2%一8.5%。2.新诊断的ITP患JL血D,板凋亡现象C13阳性患儿CASPASE.3活性平均升高28.97%2.4%.69.5%,PS外翻现象平均增加13.45%2.8%.24.7%;C13阴性患儿CASPASE.3活性平均升高28.73%2.0%.68.O%,PS外翻现象平均增加13.50%3.O%.27.0%;C13阳性患儿与C”阴性患儿相比CASPASE.3活性差异无统计学意义P0.983;PS外翻现象差异无统计学意义P0.934。3.新诊断的ITP患儿与健康儿童血小板凋亡指标相比CASPASE.3活性变化T1摘要差异具有统计学意义P0.001;PS外翻变化差异也具有统计学意义P0.001。‘4.HP菌株的分布情况20例HP感染的患儿中,‘I型,CAGA十VACA,高毒力株,11例,占55%;II型,CAGAVACA,低毒力株,3例,占15%;中问型CAGA或VACA,毒力介于两者之间,6例,占30%。5.新诊断的ITP患儿经治疗后血小板凋亡现象C13阳性患儿CASPASE一3活性平均升高8.10%0.9%.32.4%,PS外翻现象平均增加5.84%2.6%.33.0%;C”阴性患儿CASPASE.3活性平均升高7.63%1.0%一30.5%,PS外翻现象平均增加6.70%3.0%.28.7%;C13阳性与C13阴性患儿相比CASPASE.3活性变化差异无统计学意义P0.983,PS外翻现象变化差异无统计学意义P0.663。6.新诊断的ITP患儿治疗前后血小板凋亡现象C”阳性患儿CASPASE.3活性变化差异具有统计学意义P0.01,PS外翻现象变化差异具有统计学意义PO.01;C”阴性患儿CASPASE.3活性变化差异具有统计学意义P0.007,PS外翻现象变化差异具有统计学意义P0.013。结论1.新诊断的ITP患儿存在着明显的血小板凋亡现象,经皮质醇激素或免疫球蛋白治疗后血小板凋亡现象有明显好转;2.对于HP阳性患儿与阴性患儿来说,血小板凋亡差异无统计学意义,不能说明HP感染与血小板凋亡有一定的关系;3.血小板凋亡加快了血小板的清除,这为ITP的发病机制和治疗提供了新的研究方向。关键词儿童;新诊断的免疫性血小板减少症;血小板凋亡;幽门螺杆菌;半胱氨酸蛋白酶3;磷脂酰丝氨酸III丝壁堕THERELATIONSHIPBETWEENCHILDRENNEWLYITPPLATELETAPOPTOSISANDHPINFECTIONPOSTGRADUATEMANMANZHAISUPERVISORPROF.GUANGYAOSHENGDEPARTMENTOFPEDIATRIC,THEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSJSVZHENGZHOU,CHINA,450052ABSTRACT1MMUNETHROMBOCYTOPENIAITPISANAUTOIMMUNEDISORDERBLEEDINGDISEASE,WHICHISCOMMONINCHILDREN.THEINCIDENCEBETWEENMALEANDFEMALEISNOTDLFFERENCEANDTHEREISHIGHERINCIDENCEINSPRINGANDAUTUMN.ACCORDINGTOTHECOU。SEOFDISEASE,ITPBEDEFINEDASNEWLYDIAGNOSEDDIAGNOSISTO3MONTHSL,PERSLS‘EN‘3T012MONTHSFROMDIAGNOSIS,ORCHRONIC1ASTINGFORMORETHAN12MONTHS.THEPATHOGENESISOFITPISUNCLEAR,BUTMOSTPEOPLEDEEMTHATILRELATESWJLH1MMUNEDYSFUNCTIONRECENTLYYINJUNANDWUJIAJIAHADFOUNDTHATTHEREWASNOTONLYPIATELETAPOPTOSISINCHILDRENITPBUTALSOWASSIGNIFICANTLYDJFFERENTWITHHEALCHYCHILDRENJEANNINEWINKLERALSOCONFIRMEDTHATTHEREWASPLATELETAPOPTOSISINCHILDRENM’ANDPLATELETAPOPTOSISSHOWEDDIFFERENCEBEFOREANDAFTERTREATMENT.ANDYEHJJCONCERNEDTHATHELICOBACTERPYLORIHPWASRELATEDWITHPLATELETAPOPTOSIS.AP叩TOSLSLSOKNOWNASPROGRAMMEDCELLDEATH,ISTHEDEATHOFSINGLECELLSORSMAUGROUPSOFCELLSINVIVO.THECELLMEMBRANEANDORGANELLEMEMBRANEARENOTBROKEN】TDOESNO£CAUSEAUTOLYSISOFTHEDEADCELLSANDACUTEINFLAMMATO珂RESPONSE.WITHTHEINDEPTHSTUDYABOUTAPOPTOSIS,THEREISGRADUALLYCLEARUNDERSTANDINGABOUTPLATELETAPOPTOSIS,WEFOUNDTHATTHESEINDEXESCANBEEXPRESSEDTHEELEVATEDOFCASPASE‘3ACTIVITYANDTHESURFACEEXPOSEDOFPHOSPHATIDYLSERINEPSBVFIOWCYTOMETRY.IVABSTRACT~HELICOBACTERPYLORIHPISASINGLEPOLE,MULTIFLAGELLARENDOBTUSEANDSPIRALLVCURVEDGRAMNEGATIVEBACILLI,WHICHMAINLYPARASITICONTHEMUCOSAOFTHEPYLORICAN‘RUMNEARCHRONICACTIVEGASTRITIS.HPISASSOCIATEDWITHPEPTICULCERSANDMUCOSA、1YMPHO砸TISSUEMALTLYMPHOMAANDGASTRICCANCERRISKFACTORS.CHILDRENARETHESUSCEPTLBLEPOPULATIONSOFHELICOBACTERPYLOFI.SO,THEREISPLATELETAPOPTOSISORNOTANDHPINFECTIONCANINDUCEDPLATELETAPOPTOSISORNOTINTHECHILDRENNEWLYITP,WECONDUCTEDTHEFOLLOWINGSTUDY.OBJECTIVE1HOWISTHEPLATELETAPOPTOSISINTHECHILDRENNEWLYITP.2H。WISTHERELATI。NBETWEENHPINFECTIONANDPLATELETAP叩T。SISINTHECHILDRENNEWLYITP.3HOWISTHEPLATELETAPOPTOSISINTHECHILDRENNEWLYITPAFTERTREATMENT.METHODTHE40PATIENTSAND20HEALTHYCHILDRENCAMEFROMTHEPEDIATRICOUTPATIENTANDWARQOFTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYANDZHENGZHOUCHILDRENSHOSPITALACCORDINGTOC13BREATHTEST,THESEPATJENTSWEREDIVIDEDTO20C“’POSLTLVEAND20C13NEGATIVECASES.THE20PATIENTSINCLUDED12BOVSAND891FLS,WHOSEAGEISFROM2TO13YEARSOLDANDPLATELETCOUNTIS18X109/L~72109/L;THE20HEALTHYCHILDRENINCLUDED12BOYSAND8GIRLS,WHOSEAGEISFROM2TO13YEARSOLDANDPLATELETCOUNTISLOOXLOG/L。300X109/L.FIRSTWECOILECTED3.6M1BLOOD士ROMTHE60CASES,THEN,PUTTEDTHEMINTOPLASTICTUBESWHICHCONTAINEDO.4M13.8%SODIUMCLTMTEANTICOAGULANTBLOOD/ANTICOAGULANTIS9/1.THECHANGINGOFCASPASE.3ANDPSCAILBERECORDEDBYFLOWCYTOMETRY.WEUSESPSSL6.0FORSTATISTICALANALYSISANDU2005ASTHELEVELOFINSPECTION.THEDIAGNOSISISINACCORDANCEWITHTHE2011AMERICANSOCIETYOFHEMATOLOGYSTANDARD.ALLCHILDRENHAVENOTBEENTREATEDWITHANTLBLOTLCSLNTWOWEEKSTESTMUSTBEGOTPERMISSIONFROMTHEETHICSCOMMITTEEANDVABSTRACTI沁SUITS1.THEACTIVATEDCASPASE一3WASMEDIAN1.1%F0%.6.9%ANDSURFACEEXPOSEDPSWASMEDIAN1.53%0.2%.8.5%INHEALTHYCHILDREN.2.THEACTIVATEDCASPASE一3WASMEDIAN28.97%2.4%.69.5%、ANDSURFACEEXPOSEDPSWASMEDIAN13.45%2.8%.24.7%INC13_POSITIVEITP.THEACTIVATEDCASPASE3’WASMEDIAN28.73%2.O%.68.0%1ANDSURFACEEXPOSEDPSWASMEDIAN13.50%3.O%一27.0%INC13_NEGATIVEITP.THEDIFFERENCEBETWEENTHETWOCASPASE_3GROUPSWASNOTDIFFERENT俾O.983.THEDIFFERENCEBETWEENTHETWOPSGROUPSWASNOTDIFFERENTP0.934.3.COMPAREDNEWLYDIAGNOSEDITPPATIENTSWITHHEALTHYCHILDREN,THECASPASE3ACTIVITYANDSURFACEEXPOSEDPSWERESIGNIFICANTLYDIFFERENTP0.001.4.HPWASDISTRIBUTEDTO11CAGAVACACASES.3CAGAVACACASESAND6CAGA/VACACASES.5.THEACTIVATEDCASPASE3WASMEDIAN8.10%0.9%一32.4%、ANDSURFACEEXPOSEDPSWASMEDIAN5.84%2.6%一33.O%INC13_POSITIVEITPAFTERTREATMENT.THEACTIVATEDCASPASE‘3WASMEDIAN7.63%1.0%30.5%ANDSURFACE.EXPOSEDPSWASMEDIAN6.70%3.0%28.7%INC13_NEGATIVEITPAFTERTREATMENT.THEDIFFERENCEBETWEENTHETWOCASPASE一3GROUPSWASNOTDIFFERENTFP0.983.THEDIFFERENCEBETWEENTHETWOPSGROUPSWASNOTDIFFERENTP0.663.6.THETWOCASPASE一3GROUPSWASSIGNIFICANTLYDIFFERENTP0.01ANDTHETWOPSGROUPSWASALSOSIGNIFICANTLYDIFFERENTP0.01INC13POSITIVEBEFOREANDAFTERTREATMENT.THETWOCASPASE3GROUPSWASSIGNIFICANTLYDIFFERENTP0.007ANDTHETWOPSGROUPSWASSIGNIFICANTLYDIFFERENTP0.013INC13.NEGATIVEBEFOREANDAFTERTREATMENTCONCLUSION1.THEREISPLATELETAPOPTOSISINCHILDRENNEWLYITP,ANDTHEREISSIGNIFICANTLYDIFFERENTBEFOREANDAFTERTREATMENT;2.INC13POSITIVEANDNEGATIVEPATIENTS,PLATELETAPOPTOSISISNOTDIFFERENT,SOHPINFECTIONISNOTRELATEDWITHPLATELETAPOPTOSIS.V1ABSTRACT3.PLATELETAPOPTOSISMAYACCELERATETHECLEAROFPLATELET,WHICHPROVIDESANEWRESEARCHDIRECTIONFORTHEPATHOGENESISOFITPANDTREATMENT.KEYWORDSCHILDREN;NEWLYIMMUNETHROMBOCYTOPENIA;PLATELETAPOPTOSIS;HELICOBACTERPYLORI;CASPASE一3;PSVII

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