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高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白ASPA的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用

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高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白ASPA的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用

硕士学位论文论文题目高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用研究生姓名何蓉指导教师姓名肖志辉专业名称儿科学研究方向新生儿论文提交日期2013年3月高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用中文摘要I高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用中文摘要目的1.建立新生大鼠高氧肺损伤的动物模型2.观察与比较高氧性损伤时新生大鼠肺组织的病理组织学改变,以及肺表面活性物质相关蛋白A(pulmonarysurfactantproteinA,SPA)的mRNA及其蛋白的表达变化,从而探讨SPA在新生大鼠高氧肺损伤发生、发展中可能的作用3.探讨吸入性糖皮质激素布地奈德(budesonide,BUD)是否通过调控SPA的表达从而发挥对高氧肺损伤的保护作用,为临床防治高氧肺损伤提供理论依据。方法取108只出生1天内的新生SpragueDawley(SD)大鼠(雌雄不限)随机分成三组即Ⅰ组空气组(对照组),Ⅱ组高氧+生理盐水组(高氧组),Ⅲ组高氧+布地奈德组(干预组),每组36只。Ⅰ组置于空气中将Ⅱ、Ⅲ组实验动物持续暴露于90%~95%氧箱中,直至实验结束。Ⅱ组于每日雾化吸入NS10ml,Ⅲ组每日同一时间点吸入溶解BUD的等量的NS含BUD2mg。设立实验后3、7和14天3个时间观测点,处死动物,行支气管肺泡灌洗,测定灌洗液中蛋白含量取肺组织,计算肺湿/干重比HE染色观察组织病理学变化WestenBlot方法检测SPA蛋白含量、RTPCR方法检测SPAmRNA表达水平。结果1.各组实验动物一般情况Ⅰ组(空气组)中的实验动物在实验期间精神状态佳、活动灵活,进食正常。Ⅱ组(高氧组)中的实验动物逐渐出现症状,表现皮毛无光泽、精神萎靡、活动少,脱氧后烦躁不安,呼吸困难明显,鼻尖发绀,恢复供氧可逐中文摘要高氧肺损伤新生大鼠肺组织中肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)的mRNA和蛋白表达及布地奈德的干预作用II渐缓解Ⅲ组(干预组)中的实验动物情况介于前两者之间。2.肺组织病理切片Ⅰ组(空气组)实验动物肺组织病理切片见肺组织结构规整,无炎症反应,肺泡大小、形态均一Ⅱ组(高氧组)高氧暴露3d后可见肺血管扩张充血,肺泡腔内出现红细胞及炎性细胞,肺间隔断裂,肺泡腔扩大高氧7天时,炎性渗出、肺水肿、肺出血较前更加明显,部分肺间隔增宽变形,肺组织结构紊乱14天时更为明显,肺组织结构紊乱,肺间隔重度增厚,出现明显纤维化改变,肺泡发育受阻,肺泡数量明显减少、大小不一,肺泡腔明显增大,部分肺泡融合,可见肺大泡或肺不张。Ⅲ组(干预组)肺组织形态与结构改变较II组有明显减轻。3.肺组织湿/干重比值(W/D)实验3天、7天时,Ⅱ组(高氧组)实验动物肺组织湿/干重比值(W/D)较Ⅰ组(空气组)增高(P32周新生儿,评估时间生后56d或已出院时,轻度BPD为不需要氧气,中度为仍需氧气且浓度30%,重度为需要氧且浓度≥30%或机械通气2。其病因和发病机制仍不清楚,随着认识提高,目前多数学者认为其本质是在基因易感性的基础上,宫内和出生后的多重打击呼吸机容量伤、氧毒性、肺水肿、脓毒血症等引起促炎抗炎因子的级联反应,对发育不成熟的肺引起损伤,以及损伤后血管化失调和肺组织异常修复3。其中PS缺乏的肺发育不成熟、肺损伤、损伤后异常修复是导致BPD的关键环节。因此,提示我们高氧损伤机制不应局限于氧化应激作用,应进一步大力开展有关肺损伤和发育的关键基因及生物通道的更基础研究。肺表面活性物质pulmonarysurfactant,PS是一种十分重要的生物活性物质,在肺泡的发育和功能完善、改善BPD患儿的病理生理及防治BPD方面具有无可替代的生理作用4,且各种病理因素所导致的肺组织损伤往往都伴有PS的不足。化学结构上,PS属于磷脂蛋白复合物,其主要化学成分包括卵磷脂、磷脂酰甘油、鞘磷脂等,以及少量的蛋白质成分,即4种肺表面活性物质相关蛋白(pulmonarysurfactantprotein,SP)。根据其物理特性可将SP分为两组亲水性SPA和SPD疏水性SPB和SPC。其中SPA是最早被发现且在肺泡Il型上皮细胞typeⅡalveolarepithelialcell,AECII中强烈表达、信号最为丰富的蛋白,它是PS的重要组分之一,约占蛋白

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