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骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响

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骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响

学校代码10114分类号硕士学位论文骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响研究生王凤娇指导教师马宏专业名称儿科学研究方向小儿肾病学学位类型科学学位所在学院第一临床医学院中国山西二O一三年三月分类号单位代码10114密级学号201010195骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响研究生王凤娇指导教师马宏申请学位门类级别科学学位专业名称儿科学研究方向小儿肾病学所在学院第一临床医学院二O一三年三月学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果1、交回学校授予的学位证书;2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报;3、本文按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的名誉损害,进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名日期年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山西医科大学。保密论文在解密后应遵守此规定论文作者签名日期年月日指导教师签名日期年月日(本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用)目录中文摘要1英文摘要3缩略词表5前言7材料方法10结果16讨论20结论24参考文献25综述27附图40致谢46个人简历47山西医科大学硕士学位论文1骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化的影响摘要目的本实验旨在检测34周龄雄性SD大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO模型)肾组织中Α肌动蛋白(ΑSMA)、E钙黏蛋白(ECAD)、转化生长因子Β1(TGFΒ1)、骨形态发生蛋白7(BMP7)MRNA的表达,从而探讨骨化三醇对UUO大鼠肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的干预效应及相关机制。方法将54只34周龄的雄性SD大鼠随机等分为3组假手术组18只、UUO模型组18只及UUO模型骨化三醇干预组18只,采用单侧输尿管结扎的方法制备大鼠肾间质纤维化模型(UUO模型)。于手术后第1天起,干预组给予骨化三醇01UG/KGD溶于02ML的花生油中灌胃,其余两组均给予等量花生油灌胃。灌胃分别满3天、7天、14天使每组各取6只大鼠并处死,取大鼠肾组织。利用实时荧光定量聚合酶链反应RTPCR法检测各组大鼠肾组织中ΑSMA、ECAD、TGFΒ1、BMP7MRNA表达水平变化。结果1采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型成功,结扎侧肾脏体积明显变大,皮质变薄。2RTPCR法检测各组各时间点肾组织中ΑSMA、ECAD、TGFΒ1、BMP7MRNA表达结果假手术组大鼠肾组织ΑSMA、TGFΒ1MRNA表达表达甚微,ECAD、BMP7MRNA表达非常丰富,各时间点组内差异无统计学意义(P005);随着梗阻时间的延长,UUO模型组大鼠肾组织中ΑSMA、TGFΒ1MRNA表达进行性上调(P001),且较假手术组显著增加(P001),而UUO模型组中ECAD、BMP7MRNA表达进行性下降(P001),且较假手术组明显减弱(P001);与UUO模型组相比,UUO模型骨化三醇干预组各时间点ΑSMA、TGFΒ1MRNA表达明显受抑,差异有统计学意义(P001),但仍显著高于假手术组(P001),而ECAD、BMP7MRNA表达较UUO模型组明显增加,但仍显著低于假手术组(P001)。结论本实验研究进一步说明了UUO模型大鼠肾组织内ΑSMA、ECAD、山西医科大学硕士学位论文2TGFΒ1、BMP7MRNA的表达变化与肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的关系骨化三醇能够在一定程度上抑制UUO模型大鼠肾小管EMT的发生和发展,且这种保护作用至少部分可能是通过上调BMP7MRNA及下调TGFΒ1MRNA的表达来实现的。关键词骨化三醇;肾间质纤维化;肾小管上皮细胞间质转分化;单侧输尿管梗阻;实时荧光定量聚合酶链反应山西医科大学硕士学位论文3INFLUENCEOFCALCITRIOLONTUBULAREPITHELIALMYOFIBROBLASTTRANSDIFFERENTIATIONINUUORATSABSTRACTOBJECTIVETHISISARESEARCHTOINVESTIGATETHEEXPRESSIONTRENDSOFRENALTUBULOINTERSTITIALASMOOTHMUSCLEACTINASMA,ECADHERINECAD,TRANSFORMINGGROWTHFACTORΒ1TGFΒ1ANDBONEMORPHOGENETICPROTEIN7BMP7MRNAOFYOUNGRATSWITHUNILATERALURETERALOBSTRUCTIONUUO,ANDTOEVALUATETHEINFLUENCEANDPOSSIBLEMECHANISMOFCALCITRIOLONTUBULAREPITHELIALMYOFIBROBLASTTRANSDIFFERENTIATIONEMTMETHODSFROM3TO4WEEKSMALESPRAGUEDAWLEYRATSN54WERERANDOMLYDIVIDEDINTOSHAMOPERATEDGROUP,UNILATERALURETERALOBSTRUCTIONGROUPANDUNILATERALURETERALOBSTRUCTIONWITHCALCITRIOLTREATMENTGROUPN18PERGROUPFROMTHEFIRSTDAYOFOPERATION,CALCITRIOLWASADMIMISTRATEDBYGASTRICIRRIGATIONAT01UG/KGBODYWTEVERYDAYANDPEANUTOILINTOTAL02MLFORUNILATERALURETERALOBSTRUCTIONWITHCALCITRIOLTREATMENTGROUP,ANDFORTHEOTHERTWOGROUPSWEREIRRIGATEDGASTRICWITHTHESAMEVOLUMEOFPEANUTOILINANIDENTICALMANNERATTHE3RD,7THAND14THDAYSAFTEREXPERIMENTS,SIXRATSRESPECTIVELYFROMEVERYGROUPWERESACRIFICEDATLAST,ASMA,ECAD,TGFΒ1ANDBMP7MRNAEXPRESSIONSWEREDETERMINEDBYREALTIMEFLUORESCENCEQUANTITATIVEPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCRRESULTSINTHESHAMOPERATEDGROUP,ASMAANDTGFΒ1MRNAHADALMOSTNOEXPRESSIONSATEACHTIMEPOINT,BUTECADANDBMP7MRNAWEREHIGHLYEXPRESSEDTHESEDIFFERENCESBETWEENTHEGROUPSHADNOSTATISTICALSIGNIFICANCEP005;ASTHETIMEGOINGBY,COMPAREDTOSHAMOPERATEDGROUP,ECADANDBMP7MRNA山西医科大学硕士学位论文4EXPRESSIONSINGROUPBWEREINCREASEDSHARPLYP001,BUTWHICHWERERESTRAINEDOBVIOUSLYINGROUPCP001;ONTHECONTRARY,THEEXPRESSIONSOFASMAANDTGFΒ1MRNAINGROUPBWEREREDUCEDP001,BUTWHICHWEREDOWNREGULATEDINGROUPCP001CONCLUSIONTHESTUDYDEMONSTRATEDTHEEXPRESSIONSOFΑSMA、ECAD、TGFΒ1、BMP7MRNACORRELATEDWITHTUBULAREPITHELIALMYOFIBROBLASTTRANSDIFFERENTIATIONEMTANDCALCITRIOLCOULDRESTRAINTHEPROGRESSOFEMTINUUORATS,WHICHMAYBEASSOCIATEDWITHTHEUPREGULATEDEXPRESSIONOFBMP7MRNAANDTHEINCREASEDEXPRESSIONOFTGFΒ1MRNAKEYWORDSCALCITRIOL;RENALINTERSTITIALFIBROSIS;TUBULAREPITHELIALMYOFIBROBLASTTRANSDIFFERENTIATION;UNILATERALURETERALOBSTRUCTION;REALTIMEFLUORESCENCEQUANTITATIVEPOLYMERASECHAINREACTION山西医科大学硕士学位论文5缩略词简表ANGⅡANGIOTENSINⅡ血管紧张素ⅡBMPBONEMORPHOGENETICPROTEIN骨形态发生蛋白CKDCHRONICKIDNEYDISEASE慢性肾脏疾病CTCYCLETHRESHOLD循环阈值ECMEXTRACELLULARMATRIX细胞外基质EMTEPITHELIALMESENCHYMALTRANSITION上皮细胞间质转分化ECADECADHERINE钙粘蛋白FNFIBRONECTIN纤维连接蛋白FSP1FIBROBLASTSPECIFICPROTEIN1成纤维细胞特异性蛋1PTHPARATHYROIDHORMONE甲状旁腺激素RIFRENALINTERSTITIALFIBROSIS肾间质纤维化RTPCRREALTIMEFLUORESCENCEQUANTITATIVEPCR实时荧光定量PCRRASRENINANGIOTENSINSYSTEM肾素血管紧张素系统SMASMOOTHMUSCLEACTIVATINGPROTEIN平滑肌肌动蛋白TNFTUMORNECROSISFACTOR肿瘤坏死因子

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