用卤虫Artemia salina L评价杀虫活性

农 药AgrochemicAls第50卷第4期2011年4月Vol. 50, No. 4Apr. 2011用卤虫 (Artemia salina L.)评价杀虫活性王再强1，周 红1，韩 俊2，何月秋1，录丽平1(1.云南农业大学 农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室， 昆明 650201；2.文山师范高等专科学校， 云南 文山 663000)摘要：目的 以卤虫 (Artemia salina L.)为模式生物对化合物的药理活性进行初步评价。 对 10种不同作用机制的14种杀虫剂进行了生物筛选试验。 结果 14种供试杀虫剂中有 13种对卤虫有显著的毒杀效果， 作用于以 氨基丁 酸 为 神 经 递 质 传 导 系 统 的 化 合 物 及 蜕 皮 激 素 类 似 物 效 果 最 为 显 著 。 结论用 卤 虫 筛 选 杀 虫 剂 活 性 的 方 法 简便， 对多种作用机制的杀虫剂灵敏。 关键词： 卤虫； 模式生物； 杀虫活性； 评价中图分类号： TQ450.2 文献标志码： A 文章编号： 1006-0413(2011)04-0261-02Evaluate Insecticidal Activity Using Artemia salina L.WANG Zai-qiang1, ZHOU Hong1, HAN Jun2, HE Yue-qiu1, LU Li-ping1(1.The ministry of education Key laboratory for Agricultural Biodiversity and Pest management, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, china; 2.Wenshan Teachers college, Wenshan 663000, Yunnan, china)Abstract: Aims Artemia salina l. is general used for preliminary assessment of pharmacological activity. however, it is necessary to evaluate the suitability of A. salina l. before it is used as a model material for screening insecticidal activity. here, 14 insecticides with 10 different action mechanisms were selected to evaluate insecticidal activity against A. salina l. used as a model material. Results 13 insecticides significantly killed A. salina l., moulting hormone agonist and compound stimulating gABA release were the most active. Conclusions A. salina l. is a suitable organism to evaluate insecticidal activity and the method is simple having good sensitivity to many insecticides with different action mechanisms.Key words: Artemia salina l.; a model organism; insecticidal activity; evaluation杀 虫 先 导 化 合 物 的 发 现 变 得 越 来 越 困 难 ， 新 的 生 物活 性 物 质 的 发 现 主 要 取 决 于 新 的 筛 选 模 型 及 新 的 筛 选 材料1。 以 害 虫 作 为 供 试 生 物 的 普 通 筛 选 方 法 效 率 较 低 ， 且标 准 试 虫 不 易 饲 养 。 以 生 物 细 胞 、 酶 及 神 经 培 养 物 为 供 试材 料 的 高 通 量 筛 选 方 法 虽 然 能 在 短 时 间 内 筛 选 大 量 化 合物 ， 但 应 用 活 体 生 物 进 行 复 筛 时 往 往 不 表 现 活 性2。 活 体筛 选 模 型 由 于 靶 点 广 泛 ， 能 够 客 观 地 反 映 药 物 与 机 体 作 用的 关 系 ， 有 利 于 活 性 物 质 检 出 等 优 点 ， 具 有 重 要 的 使 用 价值3。 卤 虫 (Artemia salina L.)又 名 盐 水 丰 年 虫 ， 属 甲 壳 纲 、 鳃足 亚 纲 、 无 甲 目 、 盐 水 丰 年 虫 科 、 卤 虫 属 ， 虫 卵 经 处 理 后 ， 可保 存 23年 ， 因 实 验 需 求 随 用 随 孵 ， 十 分 方 便4， 本 文 报 道了以卤虫为供试生物筛选杀虫剂的方法。 1 材料与方法1.1 供试材料渤 海 湾 品 系 卤 虫 卵 ， 购 自 江 苏 省 银 宝 盐 业 有 限 公 司 射阳 盐 场 。 试 验 前 24 h于 2830 在 培 养 液 (卵 2 g， NaHCO32.4 g， 海 盐 79.2 g， 蒸 馏 水 2400 mL， pH值 88.5)中 通 气孵 化 幼 虫 。 供 试 杀 虫 剂 (均 购 自 国 内 )的 种 类 及 分 类 见表 1。 收稿日期： 2010-10-15， 修返日期： 2010-12-16基金项目： 科技部国际合作项目 (2009DFA32360)； 国家自然科学基金项目 (30660007)； 云南省教育厅科学研究基金项目 (08C0083)； 昆明市校企合作项目(09H130301)作者简介： 王再强 (1972 )， 男 (壮族 )， 云南人， 讲师， 博士研究生， 主要从事生物农药研究。 E-mail： 。 通讯作者： 何月秋 (1956 )， 男， 湖北人， 教授， 博士研究生， 主要从事植物病害生防制剂研究。 Tel： E-mail： 。 表 1 供试杀虫剂及分类序号 通用名 制剂 化合物结构类型 作用机制1 甲氨基阿维菌素 (abamectin aminomethyl) 1%乳油 (EC) 大环内酯类 刺激释放 -氨基丁酸52 多杀霉素 (spinosad) 25%悬浮剂 (SE) 大环内酯类 烟碱型乙酰胆碱受体激活剂63 灭蝇胺 (cyromazine) 75%可湿性粉剂 (WP) 三嗪类 几丁质合成抑制剂4 丁醚脲 (diafenthiuron) 50%悬浮剂 (SE) 硫脲类 几丁质合成抑制剂5 氟虫腈 (fipronil) 5%悬浮剂 (SE) 吡唑类 R-氨基丁酸受体抑制剂76 乐果 (dimethoate) 97%标准样品 (pesticide standard) 有机磷类 乙酰胆碱酯酶抑制剂7 甲胺磷 (methamidophos) 99.3%标准样品 (pesticide standard) 有机磷类 乙酰胆 碱酯酶抑制剂科研与开发262第50卷农 药 AgrochemicAls1.2 试验方法采 用 滴 板 法 测 定 杀 虫 剂 对 卤 虫 的 杀 虫 活 性 ， 即 往 点滴 板 小 孔 中 加 入 有 10只 初 孵 卤 虫 的 培 养 液 0.1 mL。 在 处理 中 加 入 不 同 质 量 浓 度 药 液 0.1 mL， 构 建 杀 虫 剂 的 质 量浓 度 梯 度 ， 以 蒸 馏 水 为 对 照 。 随 后 ， 点 滴 板 以 保 鲜 膜 覆 盖 ，放 入 28 培 养 箱 中 培 养 。 48 h后 ， 在 双 目 立 体 显 微 镜 下 检查死亡率， 试验设 4次重复， 死亡率用 Abbott公式校正10， 用DPS统计软件求 LC P曲线及 LC50值。 2 结果与分析14种 供 试 杀 虫 剂 中 有 13种 对 卤 虫 有 显 著 的 毒 杀 效 果(见 表 2)， 其 中 作 用 于 氨 基 丁 酸 为 神 经 递 质 的 传 导 系 统 的化 合 物 及 蜕 皮 激 素 类 似 物 效 果 最 为 显 著 ， 甲 氨 基 阿 维 菌 素 的LC50值 低 至 0.9 mg/L， 虫 酰 肼 LC50值 为 5.3 mg/L。 烟 碱 型 乙 酰胆 碱 受 体 抑 制 剂 活 性 也 很 高 ， LC50值 在 121.920.5 mg/L之间 。 作 用 于 神 经 元 轴 突 上 ， 影 响 Na+离 子 通 道 透 性 的 拟除 虫 菊 酯 类 化 合 物 也 有 较 好 的 效 果 ， 溴 氰 菊 酯 LC50值 为432.6 g/L， 乙 酰 胆 碱 酯 酶 抑 制 剂 、 几 丁 质 合 成 抑 制 剂 的LC50值 集 中 在 50010 000 mg/L之 间 ， 而 烟 碱 型 乙 酰 胆碱 受 体 激 活 剂 的 效 果 稍 差 ， 但 多 杀 霉 素 的 LC50值 也 小 于20 000 mg/L。 拒 食 剂 印 楝 素 对 卤 虫 没 有 明 显 毒 杀 作 用 ， 药剂质量浓度与试虫死亡率之间没有相关性。 表 2 14种杀虫剂对卤虫的毒力杀 虫 剂回 归 方 程 LC50值 / 95%置 信 限相 关 系 数 (y=) (mgL-1) (r2)甲 氨 基 阿 维 菌 素 8.2939+1.0896x 0.9 0.71.2 0.9977多 杀 霉 素 4.5769+0.3753x 13413.3 2405.474796.4 0.9636灭 蝇 胺 4.7226+0.3397x 6558 1873.022958.7 0.9677丁 醚 脲 4.9669+0.4915x 1167.7 927.21470.7 0.9981氟 虫 腈 6.7620+1.1679x 31 2.0472.3 0.9242乐 果 3.8006+1.9798x 4034.9 3001.65423.8 0.9703甲 胺 磷 4.7318+0.5946x 2825 169.847002.7 0.9504灭 多 威 5.0662+0.4647x 720.5 226.71946.5 0.9658炔 螨 特 6.0286+0.7676x 45.7 20.999.7 0.9644虫 酰 肼 6.1049+0.4856x 5.3 2.014.3 0.9802溴 氰 菊 酯 5.2785+0.7654x 432.6 115.4954.1 0.9636吡 虫 啉 5.9903+1.0835x 121.9 57.7257.5 0.9723烟 碱 7.8105+1.6649x 20.5 12.134.7 0.9803印 楝 素 3.8407+0.0949x 98267670 0.02.08 10620.2955由 此 看 来 ： 以 卤 虫 作 为 模 式 生 物 进 行 杀 虫 剂 筛 选 是 可行 的 ， 其 对 作 用 于 氨 基 丁 酸 为 神 经 递质 的 传 导 系 统 的 化合 物 及 蜕 皮 激 素 类 似 物 十 分 敏 感 ， 对 于 作 用 靶 标 为 乙 酰 胆碱 酯 酶 、 烟 碱 型 乙 酰 胆 碱 受 体 、 Na+离 子 通 道 的 化 合 物 及 几丁 质 合 成 抑 制 剂 也 表 现 出 较 高 的 敏 感 性 。 根 据 以 上 结 果 ， 可采 用 质 量 浓 度 为 20 000 mg/L、 死 亡 率 达 50%作 为 出 线 标 准 。 3 讨论国 外 最 早 提 出 采 用 卤 虫 作 为 供 试 生 物 进 行 生 物 测 定始 于 Michael等11、 Vanhaecke等12对 方 法 进 行 了 改 进 ， 随 后研 究 者 以 卤 虫 为 供 试 生 物 进 行 了 大 量 研 究 工 作13-15， 主 要集 中 在 环 境 中 化 合 物 毒 性 的 生 物 监 测16-17、 生 物 代 谢 物 新医 药 活 性 成 分 筛 选13-15， 环 境 毒 性 评 价18-19及 杀 虫 剂 筛 选3的 研 究 ， 但 以 卤 虫 作 为 一 种 杀 虫 剂 筛 选 模 型 的 评 价 却 鲜 见报 道 。 本 文 的 研 究 结 果 表 明 ： 卤 虫 不 仅 对 传 统 的 毒 性 较 大的 化 合 物 敏 感 ， 而 且 对 吡 虫 啉 、 虫 酰 肼 等 低 毒 且 具 有 独 特作 用 机 制 的 化 合 物 也 十 分 敏 感 ， 可 用 于 有 潜 在 活 性 的 先 导化合物的筛选。 Barahona等20认 为 孵 化 72 h的 幼 虫 比 24、 48 h的 幼虫 对 氨 基 甲 酸 酯 类 杀 虫 剂 更 为 敏 感 ， 试 验 结 果 中 甲 胺磷 的 LC50值 与 Venkateswara等18试 验 结 果 相 近 ， 而 大 于马 英 杰 等21的 试 验 结 果 ， 这 可 能 是 试 验 采 用 不 同 发 育 期的幼虫所致。 由于卤虫孵化后约 20 h会发生第 1次蜕皮， 蜕皮 激 素 类 似 物 虫 酰 肼 可 能 是 干 扰 了 无 节 幼 虫 的 正 常 蜕 皮 而表 现 出 较 高 的 杀 虫 活 性 。 培 养 液 中 氧 含 量会 影 响 无 节 幼 虫的 自 然 存 活 率 ， 采 用 点 滴 板 法 所 需 培 养 液 较 少 ， 与 空 气 的 氧交 换 较 好 ， 自 然 死 亡 率 低 于 5%， 符 合 生 物 测 定 要 求 。 本 研 究 只 做 了 部 分 工 作 ， 要 建 立 一 套 规 范 的 操 作 程序 ， 还 需 要 使 用 更 多 的 杀 虫 剂 品 种 进 行 试 验 ， 研 究 不 同 发育 期 的 卤 虫 对 不 同 杀 虫 剂 的 敏 感 性 ， 同 时 要 研 究 各 种 农 药溶剂和助剂对卤虫的影响。 参考文献：1 曾 文 兵 , 王 锦 , 段 学 辉 . 从 链 霉 菌 中 发 现 新 抗 生 素 的 趋 势 分 析 J. 江西科学 , 2004(4): 293-300.2 GIACOMOTTO J, SEGALAT L. 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Journal of Neurochemistry, 1980, 34(2): 351-358.续表 1序号 通用名 制剂 化合物结构类型 作用机制8 灭多威 (methomyl) 90%可溶粉剂 (SP) 氨基甲酸酯类 乙酰胆碱酯酶抑制剂9 炔螨特 (propargite) 57%乳油 (EC) 亚硫酸酯类 未知10 虫酰肼 (tebufenozide) 24%悬浮剂 (SE) 有机氮类 蜕皮激素类似物11 溴氰菊酯 (deltamethrin) 2.5%乳油 (EC) 拟除虫菊酯类 影响 Na+离子通道透性812 吡虫啉 (imidacloprid) 97.3%原药 (TC) 烟碱类 烟碱型乙酰胆碱受体抑制剂13 烟碱 (nicotine) 70%原药 (TC) 烟碱类 烟碱型乙酰胆碱受体抑制剂14 印楝素 (azadirachtin) 98%原药 (TC) 植物源 拒食剂9(下转第275页)第4期275田 海， 等： 10%啶虫脒哒螨灵水乳剂的高效液相色谱分析由 此 可 见 ： 此 方 法 回 收 率 较 高 ， 可 以 准 确 分 析 制 剂 中啶虫脒和哒螨灵的质量分数。 2.4 检测波长的选择在 紫 外 可 见 波 长 200400 nm范 围 内 对 啶 虫 脒 、 哒 螨灵 标 准 溶 液 分 别 进 行 紫 外 扫 描 ， 在 波 长 为 248 nm时 啶 虫脒 和 哒 螨 灵 均 有 较 强 的 吸 收 峰 ， 同 时 杂 质 响 应 值 小 ， 流动 相 无 吸 收 ， 根 据 啶 虫 脒 、 哒 螨 灵 对 紫 外 波 长 反 应 灵 敏度 的 大 小 ， 综 合 考 虑 多 种 因 素 ， 最 终 选 定 248 nm作 为 检测 波 长 。 2.5 流动相的选择分 别 选 择 乙 腈 、 甲 醇 、 水 及 甲 醇 、 水 的 不 同 比 例 作 为 流动 相 对 试 剂 进 行 分 离 检 测 ， 结 果 发 现 甲 醇 、 水 作 为 流 动 相 ，啶 虫 脒 、 哒 螨 灵 及 杂 质 的 分 离 情 况 最 好 ， 峰 形 尖 锐 ， 保 留 时间 适 中 。 根 据 啶 虫 脒 和 哒 螨 灵 及 未 知 物 在 选 择 波 长 的 分离 状 况 及 分 离 时 间 ， 综 合 以 上 因 素 ， 最 终 选 定 甲 醇 、 水 作 为流动相， 体积比为 80 20。 3 结论本 文 提 出 的 10%啶 虫 脒null哒 螨 灵 水 乳 剂 中 有 效 成 分 质量 分 数 的 分 析 方 法 ， 线 性 关 系 好 ， 在 选 定 的 实 验 条 件 下 ， 方法 重 现 性 好 ， 具有 较 高 的 准 确 度 和 精 密 度 ， 操 作 简 便 、 快 速 ，是该制剂有效成分含量测定的一种可行的分析方法。 参考文献：1 陆 阳 , 陶 京 朝 , 周 志 莲 . 啶 虫 脒 的 合 成 技 术 J. 化 工 中 间 体 , 2010(5): 37-41.2 唐 振 华 . 新 烟 碱 类 杀 虫 剂 的 结 构 与 活 性 及 其 药 效 集 团 J. 现 代农药 , 2002(1): 4-6.3 刘浩强 , 李鸿筠 , 冉春 , 等 . 啶虫脒 5种常用剂型对柑桔蚜虫类害虫的田间药效评价 J. 中国南方果树 , 2010, 39(4): 40-41.4 任 敬 爱 . 几 种 杂 环 杀 虫 剂 的 市 场 及 合 成 状 况 J. 化 工 文 摘 , 2002(7): 61-63.5 张 海 滨 , 杜 辉 . 浅 议 杀 虫 剂 啶 虫 脒 在 我 国 的 发 展 J. 浙 江 化 工 , 2004(7): 30-31.6 刘新刚 , 董丰收 , 杨爽 . 啶虫脒在苹果和土壤中的残留及消解动态 J. 农药 , 2006, 45(10): 694-695.7 农 药 编 辑 部 . 国 外 农 药 新 品 种 J. 农 药 , 1991, 30(5): 37-38, 46.8 邬 元 娟 , 陈 子 雷 , 岳 辉 . 气 相 色 谱 法 测 定 黄 瓜 中 哒 螨 灵 残 留量 J. 农药 , 2008, 47(5): 363-364.9 李 蓓 , 杨 仁 斌 , 佘 佳 荣 . 哒 螨 灵 的 残 留 分 析 方 法 研 究 进 展 J. 农业环境科学学报 , 2007, 26(增刊 ): 662-663.10 张 中 社 , 赵 俊 侠 . 9.5%高 渗 哒 螨 灵 EC防 治 苹 果 红 蜘 蛛 试 验 J. 陕西农业科学 , 2009, 55(3): 35-37.11 宫亚军 , 石宝才 , 路虹 . 哒螨灵和克螨特对蔬菜红蜘蛛的毒力测定 J. 北方园艺 , 2008(3): 217-218.12 袁 贵 明 , 黄 水 金 , 张 华 满 . 5%哒 螨 灵 微 乳 剂 防 治 柑 桔 红 蜘 蛛 应用研究 J. 江西农业学报 , 2008, 20(3): 50-51.责任编辑：李新6 GAO J R, DEACUTIS J M, SCOTT J G. 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