毛叶枣炭疽菌部分生物学特性研究

1994-2016 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 毛 叶 枣 炭 疽 菌 部 分 生 物 学 特 性 研 究王 兰 1 ,赵 更 峰 1 ,邵 强 1 ,何 月 秋 2(1 河 南 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 ,河 南 新 乡 453007 ; 2 云 南 农 业 大 学 植 物 病 理 实 验 室 )摘 要 :毛 叶 枣 炭 疽 病 病 原 菌 Colletot richum coccodes ( Wallr. ) Hughes 在 25 30 ,p H 5 6时 最 适 宜 生 长 ; PDA、 PSA 培 养 基 最 适 宜 病 原 菌 丝 生 长 ,而 OMA 培 养 基 最 适 宜 病 原 菌 产 孢 ;麦 芽 糖 是 病 菌 生 长 的 最 适 碳 源 ,蛋 白 胨 是 最 佳 氮 源 ;光 照 对 病 菌 的 生 长 无 明 显 的 影 响 。关 键 词 :毛 叶 枣 ;炭 疽 病 菌 ;生 物 学 特 性中 图 分 类 号 :S436. 65 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :1004 - 3268 (2004) 12 - 0064 - 03Studies on the Some Biological Propertiesof the Pathogen of Indian J ujube AnthracnoseWAN G Lan1 ,ZHAO Geng2feng1 ,SHAO Qiang1 ,HE Yue2qiu2(1 Life Sciences College of Henan Normoral University ,Xinxiang 453007 ,China ;2 Key Phytopathology Laboratory of Yunnan Agricultural University)Abstract : It was identified that Colletot richum coccodes was the pathogen of Indian jujube an2thracnose. The optimal of temperature and p H value for the pathogen growth was 25 - 30 . and5 - 6 vesp. PDA and PSA were the optimal mediums for the mycelial growth , but OMA was theoptimal medium for the pathogen sporulation. Maltose was the best of carbon sources and peptonewas the best of nitrogen source. Light period did not affect the pathogens on mycelial growth.Key words : Indian jujube ;Anthracnose ;Biological properties毛 叶 枣 ( Zizyphus m auritians Lan. ) ,俗 称 台湾 青 枣 ,又 名 印 度 枣 、 滇 刺 枣 、 缅 枣 、 西 西 果 等 ,为鼠 李 科 ( Rhamnaceae) 枣 属 ( Zizyphus Mill) 植 物 ,是 一 种 新 兴 的 热 带 、 亚 热 带 常 绿 小 乔 木 水 果 ,在 我国 主 要 分 布 于 广 东 、 广 西 、 云 南 、 海 南 、 台 湾 和 福 建东 南 部 等 省 区 1 。 毛 叶 枣 具 有 适 应 性 强 、 速 生 、快 长 、 耐 旱 、 早 产 、 丰 产 等 优 点 ,果 实 为 核 果 ,圆 球形 、 椭 圆 形 或 橄 榄 形 ,绿 色 、 淡 绿 色 或 金 黄 色 ,其 品质 香 甜 清 脆 无 酸 味 ,肉 质 细 嫩 、 多 汁 、 富 含 多 种 维生 素 ,营 养 价 值 高 ;并 且 采 果 期 长 ,成 熟 上 市 时 正值 水 果 淡 季 ,市 场 价 格 好 ,因 此 ,是 一 种 具 有 较 高开 发 价 值 的 热 带 珍 稀 水 果 。 目 前 ,毛 叶 枣 的 主 要病 害 有 炭 疽 病 、 疫 病 、 白 粉 病 、 黑 斑 病 、 根 腐 病等 2 。 炭 疽 病 是 毛 叶 枣 发 生 非 常 普 遍 的 一 种 病害 ,主 要 危 害 果 实 ,病 斑 初 期 为 褐 色 小 点 ,后 扩 展为 圆 形 或 近 圆 形 凹 陷 的 病 斑 ,病 斑 下 的 果 肉 淡 褐色 、 软 腐 ,常 达 果 实 的 中 心 部 ;随 着 时 间 的 延 长 在病 斑 中 央 出 现 浅 褐 色 至 品 红 色 的 脓 状 物 ,即 分 生孢 子 。 炭 疽 病 在 整 个 生 长 季 节 都 可 发 生 ,特 别 是在 贮 藏 期 对 果 实 危 害 更 为 严 重 ,病 果 率 达 到 10 % 20 % ,更 为 严 重 可 达 到 50 %以 上 3 。随 着 近 年 来 大 面 积 集 约 化 栽 培 种 植 ,炭 疽 病的 危 害 日 益 严 重 。 而 对 毛 叶 枣 炭 疽 病 病 原 菌 Colletot richum coccodes ( Wallr. ) Hughes 4 的分 类 、 鉴 定 尚 没 有 统 一 的 认 识 ,因 此 ,研 究 毛 叶 枣炭 疽 菌 的 生 物 学 特 性 ,对 进 一 步 深 入 认 识 毛 叶 枣收 稿 日 期 :2004 - 05 - 17基 金 项 目 :云 南 省 自 然 科 学 基 金 项 目 (2002C0043M)作 者 简 介 :王 兰 (1974 - ) ,女 ,河 南 南 阳 人 ,助 教 ,硕 士 ,主 要 从 事 分 子 植 物 病 理 学 研 究 。46河 南 农 业 科 学 1994-2016 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 炭 疽 病 的 危 害 和 推 断 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 田 间 的 发 生消 长 规 律 及 作 出 相 应 的 防 治 策 略 有 重 要 指 导 意义 。1 材 料 与 方 法依 据 可 赫 氏 法 则 ,按 常 规 真 菌 分 离 方 法 ,得 到菌 株 并 进 行 单 孢 分 离 。 将 纯 化 的 菌 株 移 至 PDA(马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 ) 平 板 上 28 下 进 行培 养 。 每 次 试 验 均 将 菌 株 移 在 PDA 平 板 上 复 壮培 养 3 d ,用 直 径 6 mm 的 打 孔 器 打 取 菌 落 边 缘 的菌 丝 块 移 植 至 新 的 PDA 平 板 中 央 (营 养 条 件 试 验中 移 植 于 不 同 培 养 基 中 ) ,根 据 不 同 要 求 进 行 处理 。 每 个 处 理 移 植 4 皿 ,均 设 3 个 重 复 ,每 24 h 测量 菌 落 生 长 直 径 ,运 用 SAS 统 计 软 件 进 行 分 析 ,统 计 各 个 处 理 间 的 差 异 显 著 性 。1. 1 温 度将 移 植 有 菌 丝 块 的 PDA 平 板 置 于 15 、 20 、 25 、 30 、 35 、 40 的 恒 温 培 养 箱 中 培养 。1. 2 营 养 条 件供 试 培 养 基 有 PDA (马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养基 ) 、 PSA (马 铃 薯 蔗 糖 琼 脂 培 养 基 ) 、 OMA (燕 麦片 培 养 基 ) 、 CMA (玉 米 粉 培 养 基 ) 、 Czapek 培 养基 。 将 菌 丝 块 移 入 不 同 培 养 基 的 平 板 中 ,于 28 下 培 养 。1. 3 p H 值用 1 mol/ L HCl 和 1 mol/ L NaOH 将 PDA 培养 基 调 配 成 5 个 不 同 p H 值 :5 ,6 ,7 ,8 ,9 ,在 28 下 培 养 和 观 察 。 由 于 当 p H 值 低 于 4 时 , PDA 培养 基 不 能 凝 固 ,所 以 p H 值 测 试 范 围 为 5 9。1. 4 碳 、 氮 源用 Czapek 培 养 基 作 基 础 培 养 基 ,分 别 用 等 量的 葡 萄 糖 、 麦 芽 糖 、 木 糖 、 D - 半 乳 糖 、 甘 露 醇 5 种碳 源 置 换 其 中 的 蔗 糖 ,配 制 成 不 同 碳 源 培 养 基 ,同时 做 无 碳 对 照 ;氮 源 的 利 用 测 定 同 样 用 Czapek 培养 基 作 基 础 培 养 基 ,分 别 用 等 量 的 硫 酸 铵 、 磷 酸 二氢 铵 、 蛋 白 胨 、 脲 、 苯 丙 氨 酸 5 种 氮 源 置 换 其 中 的硝 酸 钠 ,配 置 不 同 的 氮 源 培 养 基 ,同 时 做 无 氮 对照 。 将 菌 丝 块 移 入 上 述 不 同 培 养 基 的 平 板 中 央 ,于 28 下 培 养 。1. 5 光 照将 菌 丝 块 移 入 PDA 平 板 中 央 ,分 别 置 于 完 全黑 暗 、 连 续 荧 光 (20W 日 光 灯 ,距 培 养 物 15 cm) 、每 天 12 h 黑 暗 与 12 h 日 光 灯 (20W 日 光 灯 ,距 培养 物 15 cm)交 替 处 理 ,共 3 种 处 理 ,于 28 下 培养 。2 结 果 与 分 析2. 1 温 度 对 病 原 菌 生 长 的 影 响从 表 1 可 以 看 出 ,炭 疽 菌 在 15 35 都 能 生长 ,适 宜 生 长 温 度 为 25 30 ,最 适 为 30 ;该菌 在 40 条 件 下 不 能 生 长 ,将 其 移 植 到 25 条件 下 又 能 生 长 ,说 明 40 为 该 菌 的 最 高 生 长 温度 。表 1 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 不 同 温 度 下 的 菌 落 直 径 (96h)温 度( )菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 0115 1. 89 e E20 3. 61 c C25 5. 20 b B30 5. 74 a A35 2. 76 d D40 0. 60 f F2. 2 营 养 条 件 对 病 原 菌 生 长 的 影 响毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 PSA、 PDA 培 养 基 上 生 长 最好 ;在 CMA 和 OMA 培 养 基 上 生 长 稍 差 。 尽 管 在OMA 培 养 基 上 菌 丝 生 长 稀 疏 和 较 慢 些 ,但 第 5 天时 ,平 板 上 便 产 生 出 大 量 粉 红 色 的 分 生 孢 子 堆 ;而在 CMA 培 养 基 上 至 第 10 天 时 ,才 看 到 粉 红 色 的分 生 孢 子 堆 ,在 PDA 和 PSA 培 养 基 上 ,只 有 刮 去气 生 菌 丝 后 ,才 可 见 到 大 量 的 分 生 孢 子 堆 。表 2 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 不 同 培 养 基 上 的 菌 落 直 径 (72h)培 养 基 菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 01PDA 4. 82 a APSA 4. 91 a AOMA 4. 13 b BCMA 4. 35 b BCzapek 3. 61 c C2. 3 不 同 p H 值 对 病 原 菌 生 长 的 影 响从 表 3 可 知 ,炭 疽 菌 在 p H 值 5 9 范 围 内 均能 生 长 ,最 适 p H 为 5 ;可 见 弱 酸 性 环 境 有 利 于 病菌 生 长 。2. 4 不 同 碳 、 氮 源 对 病 原 菌 生 长 的 影 响从 表 4 可 以 看 出 ,炭 疽 菌 在 没 有 糖 的 Czapek562004 年 第 12 期 1994-2016 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 培 养 基 上 不 能 生 长 ,说 明 其 是 糖 依 赖 型 的 。 在 含有 麦 芽 糖 和 木 糖 的 Czapek 培 养 基 上 生 长 最 好 、 葡萄 糖 次 之 、 D - 半 乳 糖 和 甘 露 糖 再 次 之 ,而 以 常 用于 培 养 基 的 成 分 蔗 糖 生 长 较 差 。 氮 源 以 蛋 白 胨 为最 适 ,在 无 外 来 氮 源 的 Czapek 培 养 基 上 可 以 较 快地 生 长 ,尽 管 炭 疽 菌 在 无 外 源 氮 的 Czapek 培 养 基上 可 以 生 长 ,但 它 的 菌 丝 极 其 稀 疏 ,从 培 养 皿 的 背面 很 难 看 出 ,菌 丝 也 较 细 。表 3 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 不 同 p H 值 下 的 菌 落 直 径 (72h)p H 菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 015 6. 27 a A6 5. 66 b B7 5. 21 c C8 4. 47 d D9 4. 31 e D表 4 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 不 同 碳 、 氮 源 下 的 菌 落 直 径 (72h)碳 源 菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 01氮 源 菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 01蔗 糖 2. 89 d D 硝 酸 钠 3. 65 e E葡 萄 糖 4. 71 b B 磷 酸 二 氢 铵 3. 69 e E麦 芽 糖 5. 20 a A 脲 4. 22 d DD - 半 乳 糖 3. 83 c C 蛋 白 胨 5. 72 a A甘 露 糖 3. 81 c C 苯 丙 氨 酸 4. 29 d D木 糖 5. 06 a A 硫 酸 铵 4. 99 b B无 糖 0. 60 e E 无 氮 4. 58 c C2. 5 不 同 光 源 对 病 菌 生 长 的 影 响从 表 5 可 以 看 出 ,3 种 不 同 光 照 时 间 处 理 的毛 叶 枣 炭 疽 菌 均 能 很 好 生 长 ,对 光 照 无 明 显 特 别要 求 。表 5 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 不 同 光 照 下 的 菌 落 直 径 (72h)光 源 菌 落 直 径(cm)显 著 性0. 05 0. 01荧 光 灯 24 h 4. 50 b B黑 暗 24 h 4. 77 a A光 / 暗 12 h 交 替 4. 81 a A3 结 论 与 讨 论1) 毛 叶 枣 炭 疽 菌 在 15 35 下 均 能 生 长 ,但 以 30 时 生 长 速 度 最 快 ,这 与 田 间 的 发 病 时 期相 吻 合 。 炭 疽 病 在 气 温 较 低 的 前 期 ,发 病 较 少 ,随着 气 温 的 升 高 ,发 病 程 度 逐 渐 加 重 (贮 藏 期 发 病 较重 的 另 一 个 原 因 是 果 实 成 熟 ,抗 性 降 低 ,果 实 上 已有 病 菌 侵 入 而 潜 伏 了 下 来 ) 。2) PDA、 PSA 虽 然 最 有 利 于 菌 丝 的 生 长 ,但从 产 孢 的 角 度 出 发 ,OMA 培 养 基 有 利 于 毛 叶 枣炭 疽 菌 产 孢 ,这 与 其 他 许 多 植 物 病 原 真 菌 的 产 孢特 性 相 似 。 这 一 结 果 对 开 展 病 害 接 种 有 实 用 价值 。3) 病 菌 在 酸 性 条 件 下 生 长 较 快 ,由 于 琼 脂 在p H 为 4 时