野生风兰的药用和营养成分分析

第44卷第2期 2 0 1 7年6月 福 建 林 业 科 技 Jour of Fujian Forestry Sci and Tech V0L 44 No2 Jun，2 0 1 7 dot：1013428jcnki01k201702010 野生风兰的药用和营养成分分析 林立，何月秋，易 军 (宁波城市职业技术学院、宁波市园林植物开发重点实验室，浙江宁波315502) 摘要：为探明风兰的药用和营养成分，对采自奉化和舟山两地的野生风兰叶片中总多糖、总黄酮、总蛋白、9种有机酸和16 种水解氨基酸的含量进行分析。结果表明：风兰叶中总多糖含量不高，奉化、舟山两地样品中含量分别为1713、1621 mgg。；总黄酮含量较高，占到叶片干重的402以上；叶片中含有柠檬酸、苹果酸、草酸、乙酸等有机酸，其中柠檬酸和苹 果酸含量最高，大于080 mgg。，丁二酸含量最低；风兰叶片中总蛋白含量占鲜叶质量的121以上，水解后包含有16 种氨基酸，其中7种为人体必需氨基酸。说明野生风兰植物具有良好的药用和营养开发价值。 关键词：野生风兰；多糖；总黄酮；总蛋白 中图分类号：$68231 文献标识码：A 文章编号：10027351(2017)02005804 Analysis of Medicinal and Nutritional Components in Wild Neofinetia falcata LIN Li，HE Yueqiu，YI Jun (Ningbo City College of Vocaffonal Technology，Ningbo Key Laboratory of Landscape Plant Development，Ningbo 315502，Zhejlang，China) Abstract：In order to know the content of medicinal and nutritional components in Neofinetia falcate，total polysaccharides，total fla vonoids，total protein，9 kinds of organic acids and 16 kinds of amino acids were detected in the leaves of wild Neofinetiafalcate col lected from Fenghua and Zhoushan Island，Zhang ProvinceThe results showed that the content of total polysaccharides were not very high in Neofinetiafalcate leavescontaining about 1713 mggand 1621 mgg一 total polysaccharides in Fenghua and Zhoushan samples，respectivelyTotal flavonoids were abundant，accounted for more than 402of dry leaves weightThere were several kinds of organic acids presented in Neofinetiafalcate leaves，such as citric acid，malic acid，oxalic acid and acetic acid，among which citric acid and matte acid were the two kinds of the highest content of organic acids，more than 080 mggWhile the con tent of succinic acid was the least in Neofinetia falcate leavesThe total protein content accounted for more than 121of the fresh leaves，containing 16 kinds of hydrolyzed amino acids，including seven kinds of essential amino acidsThus，wild Neofinetia faleate is valuable for pharmaceutical and nutritional development Keywords：Neofinetia falcate；polysaccharides；total flavonoids；total protein 风兰(Neofinetlafalcate)为兰科(Orchidaceae)风兰属(Neofinetla)植物，在我国主要分布于浙江、福建、 江西、四川等地，韩国、日本也有分布，多生长于海拔达1520 1q1的山地林中树干上 。风兰株型小巧，株高 8 10 ClTI，叶片秀美，呈圆状镰刀形，总状花序具白花25朵，味芳香，观赏价值极高。据中华本草记 载，风兰还可用于治疗肺热咳嗽、咽喉疼痛、疝气等症。浙江奉化地区也常以风兰叶片为跌打损伤外敷药 材，效果良好。因此，风兰也是一种具有药用开发价值的兰科植物。 目前，有关兰科植物药用、营养成分的研究报导很多，涉及兰科20多个属的植物，其中一些药用价值 较高的属，如石斛属(Dendrobium)、白芨属(Bletilla)、唇兰属(Anoectochilus)等的研究已较为深人 。 神农本草经和本草纲目拾遗记载了石斛属中铁皮石斛(Dofficinale)、串珠石斛兰(Dfalconeri)、反瓣 石斛(Dellipsophylllzm)等多种植物的药用保健功效。高培元等 检测了海南野生石斛中必需微量元素与 必需氨基酸的含量。鲍素华等 研究表明不同相对分子质量铁皮石斛多糖均有抗氧化作用。Tanagorn meatar等 对反瓣石斛药理成分的研究表明该植物中含有抑癌成分。白芨属植物白芨(Bstrlata)的根提 收稿日期：20160919；修回日期：20161028 基金项目：宁波市科技富民项目(2015C10004)；宁波市园林植物开发重点实验室项目(2014A22008) 第一作者简介：林立(1985一)，男，浙江丽水人，宁波城市职业技术学院助理实验师，在读博士，从事植物分子生物学研 究。Email：linli851111126com。 第2期 林立，等：野生风兰的药用和营养成分分析 取物可以作为一种抗炎、止血的药物 。 。开唇兰属植物金线莲(Aroxburghii)的水溶物具有较好的降血糖 功效 。Sharma等 研究表明，用乙醇提取贝母兰(Coelogyne cristata)得到的贝母兰素具有增加卵巢切 除小鼠骨骼密度的作用。然而，目前国内外有关风兰中所含化学成分的研究还未见报道。目前，已发现具 有药用和营养价值的兰科植物中以附生兰类居多 。风兰为一种典型的附生兰科植物，其部分药用功效 已被证实 ，但风兰中有药用、营养价值的化学成分及其含量仍不得而知。本研究对采集于浙江奉化的 野生风兰叶片中多种有机成分进行检测与分析，以期为该植物今后的药用、营养价值的开发提供参考。 1材料与方法 11材料与试剂 野生风兰植物材料于2016年4 月采自浙江省的奉化榆林村和舟山岛两地。16种氨基酸混合标 准品(美国Sigma公司)；9种有机酸标准品(美国Sigma公司)；芦丁标准品(上海阿拉丁生化科技股份有 限公司)；乙腈、甲醇为色谱纯级。 12仪器与设备 K9840自动凯氏定氮仪(济南海能仪器股份有限公司)；SH220石墨消解仪(济南海能仪器股份有限 公司)；UHPLC 3000液相色谱(美国热电公司)。 13试验方法 131 干物率测定称取10 g左右风兰新鲜叶片(m )，104 oC杀青20 min后放至80烘箱中至恒重， 准确称取干燥后叶片质量(m：)，计算干物率=m m X 100。 132多糖含量测定叶片多糖含量按NYT 1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定 方法测定，重 复3次。制作的葡萄糖标准曲线方程为：Y=00083x一00014，R =09992。 133 总黄酮含量测定叶片总黄酮含量利用NaN0 一Alcl。法 进行测定，同一条件进行3次试验， 取平均值。 134 9种有机酸含量测定利用UHPLC 3000液相色谱进行检测，色谱柱为Thermo C18柱(250 mm 46 mm，5 m)，以甲醇：10 mmolL 磷酸氢二钾(pH=255)=1：99(vv)为流动相，流速05 mL min，检测波长210 nm，柱温3O，进样量为1O 。以9种标准品成分进样，获得UHPLC标准品色谱 图(图1)，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制 标准曲线并建立线性回归方程。 准确称取鲜叶样品05 g，加5 mL pH 25磷酸 缓冲液，密封，超声振荡30 min，取适量过045 m 滤膜后在相同的检测条件下进行样品成分检测，并 根据标准曲线求得9种有机酸含量。 135 总蛋白及16种水解氨基酸含量测定 准确 40 60 80 100 120 】40 l60 蹦间rain 称取鲜叶样品20 g，按GB 50095_一2O10食品中蛋 1为草酸；2为酒石酸；3为苹果酸；4为乳酸；5为乙酸； 白质的测定 方法测定总蛋白含量。 6为马来酸；7为柠檬酸；8为富马酸；9为丁二酸 水解氨基酸含量利用UHPLC 3000液相色谱进 图1 9种有机酸标样的HPLC图 行检测，色谱柱为Thermo C18柱(250 1Tlln46 mm，5 m)，流动相A为01 toolL 醋酸钠溶液一乙腈 (vv=93：7)，流动相B为乙腈一水(vv=8：2)。设定检测波长254 nm，柱温40。梯度洗脱程序：014 min，10085，A；1429 min，8566，A；2930 min，660，A；3037 min，0，A；37371 min，0一100，A；37145 min，100，A。流速为300 IxLmin，进样量10 L。以各标准品成分峰 面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线并建立线性回归方程。 取新鲜样品2 g于20 mL的水解管中，加6 molL 盐酸溶液16 mL，真空脱气30 min，充氮封管，110 下水解24 h，取出冷却后转移至50 mL容量瓶中并定容。准确取水解液1 mL于小瓶中，真空中脱酸抽 干，加水1 mL后抽干，重复1次后准确加入002 molL 的盐酸溶液1 mL，充分溶解。 福建林业科技 第44卷 取上述溶液500 IxL，置于5 mL塑料离心管中，加入1 molL 三乙胺乙腈溶液250 IzL，混匀后加入 01 molL-1异硫氰酸苯酯乙腈溶液25 L，混匀后室温放置1 h，加正己烷2 mL，剧烈振摇，放置10 min， 取下层溶液用022 m的水相滤膜过滤后上机分析。 2结果与分析 21风兰叶片干物率 试验结果表明，风兰叶片中含有较多的水分，奉化、舟山采集的风兰叶片干物率分别为4145、 3877。 22风兰叶片中多糖含量 对风兰叶片中总多糖含量进行测定，结果表明奉化、舟山两地风兰干燥叶片中多糖含量分别为 l713、l621 mgg一。 23风兰叶片中总黄酮含量 超声辅助提取法是一种较为有效、损失较少的植物总黄酮提取方法。本试验通过超声辅助法提取得 到奉化、舟山两地风兰干叶中总黄酮含量分别为415、402，都高于另外2种兰科植物马鞭石斛 (0452)ElS、青天葵(114) ，表明风兰叶片中总黄酮含量较高。 24风兰叶片中9种有机酸含量 通过UHPLC法对风兰中可能存在的9种有机酸含量进行检测，结果表明有7种有机酸存在于风兰叶 片中(表1)。相比而言，奉化分布的风兰叶片中有机酸含量相对较高，但两地差异不大。其中，含量最高 的为柠檬酸，在奉化、舟山两地风兰叶片中含量分别达9820、890545 mgkg一；其次为苹果酸，在奉化、舟 山风兰中含量分别为5560、511845 mgkg。此外，草酸、乙酸也是风兰叶片中含量较高的有机酸种类； 富马酸、马来酸、丁二酸在风兰叶片中含量较少。 表1两地风兰样品中9种有机酸含量比较 mgkg 25风兰叶片中总蛋白含量 研究结果表明，风兰叶片中总蛋白含量较丰富，奉化、舟山样品中含量分别为126、121。对叶 片中总蛋白成分进行水解，并通过UHPLC法共测得了16种水解氨基酸(表2)。两地风兰叶片中蛋白水 解后得到的各种氨基酸含量都比较接近。其中含量较高的有天冬氨酸和亮氨酸，在叶片中的含量都在 080 mgg 以上；蛋氨酸含量最少，在奉化、舟山样品中分别只有006、010 mgg；其余13种氨基酸 含量相近。水解得到的l6种氨基酸中有7种为人体必需氨基酸。 表2两地风兰样品中16种氨基酸含量比较 mgg 3讨论 附生兰为药用保健兰科植物中的主要类型，共有70余属，500余种，但目前有关化学成分研究的报道 仅有l7个属 。风兰属有2个种，即风兰和短距风兰( richardsiana)，目前还未见该属植物化学成分的 研究报道。在东亚地区，风兰历来被视作观赏兰中的珍品，在日本、韩国已形成相当大的产业，培育出上百 个园艺品种，俗称“富贵兰”。风兰不仅具有很高的观赏价值，其药用价值也已有记载，但目前仍缺乏该植 第2期 林立，等：野生风兰的药用和营养成分分析 61 物中化学成分的数据信息。本研究测定了奉化、舟山岛两地野生风兰中的多种有机成分，多糖测定结果表 明风兰叶片中多糖含量不高，在奉化、舟山两地样品中含量分别为1713、1621 mgg。风兰叶片中柠 檬酸、苹果酸等有机酸含量丰富，其中柠檬酸具有很好的抗菌作用 ，苹果酸对于机体抗菌、抗疲劳、抗氧 化方面都有较好的功效 。此外，风兰叶片中的总黄酮含量也很丰富，占到叶片干重的402以上， 远高于兰科的马鞭石斛(0452)E xs J、青天葵(114)El6等植物，与提取植物性黄酮常用的药用植物银 杏(Ginkgo biloba)叶片中总黄酮含量188_20 相比也更高。许多研究都表明了植物性黄酮具有显著的 抗菌、抗氧化等多种功效 卜23，可能正是由于总黄酮、柠檬酸、苹果酸等成分含量较高，使风兰叶片具有治 疗肺热咳嗽、咽喉疼痛、跌打损伤等方面的药用功效。植物黄酮成分包含许多种类，有关风兰叶片中包含 的不同黄酮成分及其含量等信息仍待后续深人研究。 为进一步研究风兰的营养价值，对两地采集的风兰叶片中蛋白质含量及水解后氨基酸种类和含量也 进行分析。植物性蛋白质是一种重要的营养成分，可满足人们对于蛋白质和氨基酸的需求。本研究结果 表明，新鲜风兰叶片中总蛋白含量达121以上，水解后产生16种氨基酸，其中有7种人体必需氨基酸， 表明风兰叶片也具有一定的营养开发价值。 参考文献： 1中国科学院中国植物志编辑委员会中国植物志：第19卷M北京：科学出版社，1999：381382 2鞠建华，刘东，杨峻山兰科植物化学成分研究进展J国外医药：植物药分册，2000，15(3)：95104 3董海玲两种珍稀濒危兰科药用植物的化学成分研究D北京：北京协和医院，2010 4高培元，李妮亚，王紫海南野生石斛中必需微量元素与必需氨基酸的分析J中国野生植物资源，2004(4)：5658 5鲍素华，查学强，郝杰，等不同分子量铁皮石斛多糖体外抗氧化活性研究J食品科学，2009，30(21)：123127 6Tanagornmeatar K，Chaotham C，Sritularak B，et aL Cytotoxic and antimetastatic activities of phenolic compounds from Dendrobi am ellipsophyllumJAnticancer Res，2014，34(11)：65736579 7Wang W，Meng HCytotoxic，antiinflammatory and hemostatic spirostanesteroidal saponins from the ethanol extract of the roots of Bletilla striataJFitoterapia，2015(101)：1218 8陈卓，黄自强金线莲降血糖作用的初步研究J福建医药杂志，2000，22(1)：201208 9Sharma C，Mansoori MN，Dixit M，et a1Ethanolic extract of Coelogyne 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