解淀粉芽孢杆菌B9601Y2复方油菜种衣剂的研制

云南大学学报 ( 自然科学版 ) ， 2013， 35( 4) : 558 564 DOI: 107540/j ynu20120238Journal of Yunnan University解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 复方油菜种衣剂的研制*董丽萍1，浦恩堂2，吴毅歆3，毛自朝3，何月秋1，3( 1 云南农业大学 植物保护学院 ， 云南 昆明 650201; 2 云南省农业科学院 农业环境资源研究所 ， 云南 昆明 650201;3 云南农业大学 农学与生物技术学院 ， 云南 昆明 650201)摘要 : 研究首次将促生长的解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 作为复方种衣剂的有效成分 ， 引入到含有杀虫剂吡虫啉和杀菌剂多菌灵的种衣剂中 ， 包衣油菜种子 结果表明 ， 丸化种衣剂的促生长和防治蚜虫效果比成膜种衣剂好 通过实验室 、温室 、田间试验过程 ， 从 6 组种衣剂中确定了 2 号丸化种衣剂为最优配方 2 号丸化种衣剂在实验室试验中对油菜种子发芽势没有显著影响 ， 提高种子发芽率 11 64%; 在温室试验中 ， 提高种子发芽率 110%; 在大田试验中 ， 植株苗高和鲜质量较空白对照分别高 1497%和 9946%， 亦比不用 B9601 Y2 菌株配方处理植株苗高和鲜质量分别高 11 08% 和 29 22%; 在播种 80 d 和 90 d 后 ， 防治蚜虫效果仍达 92 0% 和882%， 分别比不用菌剂配方的防效提高 443%和 756% 在复方种衣剂中 ， B9601 Y2 菌株在 6 个月内每粒种子上仍能保持 105cfu 的水平 关键词 : 解淀粉芽孢杆菌 ; 油菜 ; 生物种衣剂 ; 发芽势 ; 发芽率中图分类号 : S 3302; S 37 文献标志码 : A 文章编号 : 0258 7971( 2013) 04 0558 07我国自 1980 年代初开始种衣剂研究 ， 目前已有系列产品大面积推广应用于粮 、棉 、油各类农作物的种子 1， 种衣剂已成为防治农作物病虫害 、提高农作物产量的重要手段 2 3 经过包衣的种子 ，可以防治病虫害 ， 为种子在不良环境条件下提供保护作用 ; 调控作物生长 ， 提高田间出苗率 ， 增强幼苗长势 ， 从而达到增产的效果 4 6 随着生物农药的发展 ， 近年来 ， 人们认识到化学农药和生物农药各具优势 ， 以化学和生物相结合的包衣方法开发与创制新的种衣剂已经成为未来种衣剂发展的趋势 7， 并被列入国家高端研究计划 解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2( 简称 Y2) 是本实验室分离的一株专利菌株 ( 专 利 号 :ZL2003101041956) ， 对水稻稻瘟病菌 、水稻纹枯病菌 、小麦根腐病菌 、马铃薯晚疫病菌等 30 多种重要植物病原真菌有很强的抑制作用 ， 近期的试验研究表明该菌还具有解磷 ， 并能内生于根内等功能 ，而且促进植物生长的作用尤为明显 ， 它能促进金边富贵竹 、中国石竹 、空心菜 、玫瑰等扦插生根 ， 玉米出苗和生长 8 9， 是一株很有开发潜力的生防菌株 10 但到目前为止 ， Y2 的应用方式多为拌种 、浇灌 、浸泡和蘸根 ， 还未以种子包衣方式用于油菜生产 为了充分利用该菌株的促进植物生长的优良特性和为生产服务 ， 本研究探索 Y2 菌剂与化学农药混配作为种衣剂的可行性 1 材料和方法11 主要试验仪器和试剂主要试验仪器 : 电子恒速搅拌器 、恒温恒湿培养箱 、高压蒸汽灭菌锅 、电子天平 、水浴锅 、温度计 、培养皿 主要试剂 : 973% 吡虫啉杀虫剂 ( 天津农药股份有限公司 ) 、98 9% 多菌灵杀菌剂 ( 江苏省江阴市农药二厂有限公司 ) 、生防菌 Y2 菌液 ( 野生型和带有利福平抗性标记菌株 ， 自制 ) ， 成膜剂羧甲基纤维素钠 、防紫外线药剂黄原胶 、防霉剂苯甲酸钠 、* 收稿日期 : 2012 04 30基金项目 : 科技部国际科技合作项目 ( 2009DFA32360) ; 科技部农业成果转化项目 ( 2010GB2F300444) 作者简介 : 董丽萍 ( 1985 ) ， 女 ， 云南人 ， 硕士生 ， 主要从事生物农药研究 E mail: shilindlp163 com通信作者 : 何月秋 ( 1956 ) ， 男 ， 湖北人 ， 教授 ， 主要从事植物病害生物防治研究 E mail: ynfh2007163 com防冻剂甘油 、润湿剂 OP 10、载体硅藻土 、警戒色玫瑰精 油菜种子 ( 品种为 “华油 6 号 ) 、由云南省农科院经作所李根泽研究员惠赠 ， 蚜虫 ( 油菜甘蓝蚜 ， Brevicoryne brassicae) 来自云南农业大学后山农场未用过杀虫剂的油菜植株 12 试验方法121 Y2 菌液的培养 采用液体培养法 ， 野生型和抗性菌株分别接种于 LB 和含 300 g/mL 利福平液体培养基中 ， 于 37 ， 120 r/min 摇床上培养48 h， 芽孢率约 10%122 种衣剂的配制 将化学有效成分吡虫啉 、多菌灵 、助剂 、羧甲基纤维素钠 、黄原胶 、苯甲酸钠 、甘油 、OP 10、硅藻土 、玫瑰精配成一定浓度的水溶液 ， 然后按一定比例混合均匀 ， 在 1 000 r/min 的电子恒速搅拌器下搅拌 5 h， 再加入生防菌 Y2 菌液调菌液浓度为 106 107cfu/mL， 制成 5 种 ( 2号 、3 号 、4 号 、6 号 、8 号 ) 丸化种衣剂和 3 种 ( 1 号 、5 号 、7 号 ) 成膜种衣剂 在以往的试验基础上 ， 设置 1 号 、2 号 、4 号 、5 号 、7 号 、8 号杀虫剂吡虫啉和杀菌剂多菌灵用药量一致 ， 分别为 3 号和 6 号的 2倍用量 123 包衣种子制备 丸化种衣剂按药种质量比15 拌种包衣 ， 并在室温下晾置约 10 min， 待包衣干固后备用 ， 另设不含菌液的种衣剂包衣作为对照 成膜种衣剂按药种质量比 150 包衣 ， 处理方法同丸化种衣剂 12 4 实验室同比发芽试验 在灭菌培养皿( =90 cm) 中放一张圆形滤纸 ， 加 3 mL 无菌水浸湿 ， 将 100 粒包衣种子均匀置于灭菌滤纸上 ， 于 25温箱中培养 ， 24 h 后统计发芽数 每次统计完后 ，分别补充 1 mL 灭菌水保持种子发芽湿度 参照国家种子检验规程 GB/T3543 4， 于 2 d 后测定发芽势 ， 8 d 后测定发芽率 ， 设不包衣的种子为空白对照 12 5 温室出苗率试验 在塑料培养皿 ( = 90cm) 中加半皿沙壤土 ， 用镊子均匀播种 50 粒种子 ，盖一层薄土 ， 用喷壶均匀喷洒适量水 ， 置于温室中培养 ， 每天补充适量水 ， 7 d 后统计出苗数 ， 计算出苗率 126 大田试验 根据实验室同比试验结果 ， 选取最优配方进行大田试验 试验按随机区组设计 ，小区株行距 50 cm， 行长 120 cm， 于 2010 年 12 月22 日播种 100 粒 ， 待齐苗后间苗 ， 60 d 后每个重复随机选取 10 株苗 ， 测量苗高和鲜质量 ; 2011 年 2月 20 日接种蚜虫 ， 3 月 13 日测第 1 次蚜虫量 ; 3 月27 日测第 2 次蚜虫量 ， 计算蚜虫减退率 并设不包衣的种子为空白对照 蚜虫减退率 = ( 对照蚜虫量 处理蚜虫量 ) /对照蚜虫量 100%127 生防菌存活期 将筛选出的最优配方进行生防菌存活期试验 ， 并设仅用 Y2 菌液拌种的种子为对照 ， 对照按照药种比 150 进行拌种 参照细菌的稀释分离法 11把含利福平抗性菌株包好的油菜种子取 10 粒于装有 10 mL 无菌水的血清瓶中 ， 在摇床上震荡摇匀 ( 170 r/min) ， 30 min 后取出按梯度稀释涂布于含有 300g/mL 利福平的平板上 ， 于25 恒温培养箱中倒置培养 24 h 后数菌落数并计算出单粒种子所含菌量 间隔 2、4、6、9 个月取包衣种子用同样的方法计算单粒种子表面所含活菌数 ，分析菌落下降趋势 ， 评估药剂的添加对 Y2 的影响及 Y2 的存活期 128 统计分析 所有试验处理均重复 3 次 全部数据采用 97 版 SAS 软件做多重比较分析 对于发芽势和发芽率经反正弦转换后 ， 再进行统计分析 2 结果与分析21 油菜包衣种子在温箱中的发芽结果 在 25温箱中 ， 种衣剂对油菜种子有明显提高发芽率的作用 ( 表 1) 种衣剂 1 8 号处理的发芽率分别高出空白对照 9 24%、11 64%、9 24%、8 04%、564%、5 28%、8 04% 和 8 40%， 但所有处理的发芽势均低于空白对照 ， 表明这些处理对种子发芽前期有一定影响 3 号发芽势为 72 3%， 发芽率为91%， 低于 2 号发芽势和发芽率 ( 76 3% 和 93%) ，3 号和 2 号剂型一致 ， 区别在于 3 号杀虫剂吡虫啉 、杀菌剂多菌灵用药量是 2 号的一半 ; 同样 6 号发芽势为 690%， 发芽率为 877%， 略低于 4 号发芽势和发芽率 ( 693%和 900%) ， 6 号和 4 号剂型一致 ， 区别在于 6 号杀虫剂吡虫啉 、杀菌剂多菌灵用药量是 4 号的一半 说明 3 号和 6 号用药量不利于油菜种子发芽 ， 其它处理用药量一致 ， 仅是加菌量的不同 4 6 号含 Y2 菌量达到 4 33 107cfu/mL， 发芽率和发芽势相对较低 ， 1 号 、2 号 、3 号含 Y2 菌量为 433 106cfu/mL， 发芽率 、发芽势高于 4 6 号及不含生防菌的 7 号 、8 号处理 ， 说明种衣剂含 Y2 菌量对油菜种子发芽有影响 ， 当浓度偏955第 4 期 董丽萍等 : 解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 复方油菜种衣剂的研制高时种子发芽受抑制 ， 适量浓度有促进作用 为了进一步验证 ， 选取 1 号 、2 号 、3 号和 4 号作为下一步筛选较优配方的方案 ， 7 号 、8 号为不加菌液种衣剂对照 22 油菜包衣种子在温室中的发芽结果 将上述温箱中较好的种衣剂配方用于温室土壤中做出苗试验 ， 结果见表 2 结果表明 ， 所有处理的出苗率均低于在温箱中的发芽率 ， 并极显著地高于空白对照 与温箱试验结果相似 ， 3 号出苗率低于 2 号 ， 仍以 2 号种衣剂的出苗率最高 ， 比 对 照 增 加 了110%， 进一步证明 2 号用药量好于 3 号用药量 7号出苗率略低于其他种衣剂处理 含菌量为 4 33106cfu/mL 的种衣剂 1 号 、2 号 、3 号的出苗率相对高于含菌量为 4 33 107cfu/mL 的 4 号种衣剂和不含菌处理的种衣剂 ， 丸化剂型相对高于成膜剂型 因此 ， 选择相对较好的 2 号丸化种衣剂 、以 4 号丸化种衣剂和 8 号丸化种衣剂作为菌量区别对照进行下一步筛选方案用于大田比较试验 23 种衣剂促生长效果 将 2 号 、4 号 、8 号和空白对照 CK 处理的油菜种子直接播于大田 ， 于出苗后 60 d 测定苗高和称取鲜质量 结果表明 ( 表 3) ， 2号和 8 号处理的苗高和鲜质量均高于空白对照和4 号处理 ， 其中 2 号苗高极显著高于 4 号处理 ， 鲜质量极显著地高于 4 号和空白对照 ， 显著地高于 8号 ， 苗高和鲜质量较空白对照分别高 14 97% 和9946%， 亦比不用 Y2 菌株的 8 号处理分别高1108%和 2922%2 号 、4 号和 8 号的区别在于 8号不含有 Y2 菌株 ， 2 号与 4 号的区别在于 4 号含Y2 菌量高于前者的 10 倍 由此看来 ， Y2 菌株对油菜植株生长有明显影响 ， 高浓度有抑制作用 ， 如 4表 1 不同种衣剂对油菜种子发芽的影响Tab1 Effect of different seed coating agents on canola seed germination种衣剂 剂型 B9601 Y2 菌量 /( cfumL1) 发芽率 /% 发芽势 /%1 成膜 433 106910b AB 711b BC2 丸化 433 106930a A 763a A3 丸化 433 106910b AB 723b B4 丸化 433 107900bc BC 693cde CD5 成膜 433 107880cd BC 680e D6 丸化 433 107877d C 690de CD7 成膜 900bc BC 710bcd BC8 丸化 903b BC 710bc BCCK 833e D 777a A小写字母表示 005 水平的差异显著性 ， 大写字母表示 001 水平的差异显著性 下同 表 2 种衣剂处理的油菜种子在温室的出苗率Tab2 Seedling emergence of coating canola seeds in the greenhouse种衣剂 B9601 Y2 菌量 /( cfumL1) 出苗率 /% 出苗率比对照增加 /%1 433 106830ab AB 1002 433 106840a A 1103 433 106830ab AB 1004 433 107810bc AB 707 800c B 708 810bc AB 80CK 730d C 065 云南大学学报 ( 自然科学版 ) http: / /www yndxxb ynu edu cn 第 35 卷号处理 ; 适宜浓度有极显著地促进生长作用 ， 如 2号处理 8 号处理与 CK 的成分区别在于前者是除了不含有 Y2 菌株外的种子包衣剂 ， 8 号与 CK 对苗高没有显著影响 ， 但 8 号对鲜质量有显著提高 ，这主要是未经包衣 CK 植株有蚜虫为害的缘故 24 种衣剂防治蚜虫效果 于播种后 60 d 接种蚜虫至油菜植株上 ， 等蚜虫繁殖 20 d 和 34 d 后 ， 调查每株蚜虫数量和计算减退率 结果表明 ( 表 4) ， 2号 、4 号 、8 号等 3 个种衣剂均能极显著地减轻蚜虫危害 第 1 次调查 ( 播种后 80 d) ， 3 个种衣剂处理植株的蚜虫减退率分别为 92 0%、90 0%、881%， 2 号显著高于 4 号和 8 号 第 2 次调查 ( 播种后 94d) ， 2 号 、4 号 、8 号处理植株的蚜虫减退率分别为 88 2%、83 3%、82 0%， 较第 1 次调查有所下降 ， 但蚜虫量仍远远低于未包衣种子植株上蚜虫量 从 2 次调查的结果来看 ， 加有 Y2 菌株包衣种子植株上的蚜虫量低于未加 Y2 菌株包衣种子植株上的蚜虫量 ， 特别是 2 号配方效果更为明显 因此 ， 结合对发芽的影响和促生长效果 ， 2 号为优选配方种衣剂 25 Y2 菌株下降趋势 参照细菌的稀释分离法计算 2 号种衣剂和仅用 Y2 菌液拌种的种子单粒种子含菌量 ， 计算 Y2 菌株的存活期 ， 比较所加药剂对生防菌的影响和 Y2 菌株存活期的影响 从表5 可以看出 ， 经 2 号种衣剂包衣的油菜种子单粒种子表面含菌量为 349 105cfu， 随着包衣时间的延长附着于种子表面的 Y2 菌量呈递减趋势 : 在 0 2月内下降了 37%， 2 4 月内基本不变 ， 之后每隔 2个月下降接近 50% 但在 6 个月内单粒种子所含菌量仍保持约 105cfu 水平 ， 到 9 个月时依然达到103cfu 生防菌 对照菌落下降趋势同 2 号种衣剂 ，菌株成活率整体上略高于 2 号种衣剂菌株成活率 ，但数量级下降趋势不变 ， 同一时间梯度比较下降率没有显著差异性 说明化学有效成分吡虫啉 、多菌灵和各种助剂的加入对生防菌 Y2 的存活影响不大 ， 而菌落数下降的主要原因是在摇床上培养 2d时 ， Y2 菌活芽孢率仅为 10% 左右 ， 这一芽孢数正好与 9 个月后检测到菌落数为最初菌量的 1122%和 1032%相符 3 讨 论B9601 Y2 是一株能控制 30 多种病原真菌 ，能在作物体内很好地定殖 ， 特别在促进植株生长作用上尤为明显的解淀粉芽孢杆菌 本试验期望利用它的促生长特点 ， 研究其与广谱的杀真菌剂多菌灵和广谱杀虫剂吡虫啉相容性 ， 实现增产的目的 采用微生物菌株 B9601 Y2 与化学农药及其他助剂混合制备成复方种衣剂 ， 试验中做成了 6 个含有B9601 Y2 的配方 ， 其中成膜剂 2 个 ， 丸化剂 4 个 总体来看 ， 成膜剂的效果低于丸化剂 ， 这可能与成表 3 包衣油菜种子的苗高和鲜质量Tab3 Height and fresh weight of canola seedlings from coated seeds种衣剂 B9601 Y2 菌量 /( cfumL1) 平均苗高 /cm 平均鲜质量 /g2 433 106361a A 2976a A4 433 107278b B 1481c B8 325ab AB 2303b ACK 314ab AB 1492c B表 4 种衣剂包衣种植株上的蚜虫量Tab4 Aphid number on canola plants of the coated seeds种衣剂B9601 Y2 菌量 /( cfumL1)2011 年 3 月 13 号头数 减退率 /%2011 年 3 月 27 号头数 减退率 /%2 433 106530 920a A 5647 882a A4 433 107666 900b AB 4007 833b B8 788 881c B 6083 820c CCK 6616 33863 165第 4 期 董丽萍等 : 解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 复方油菜种衣剂的研制表 5 2 号种衣剂中 B9601 Y2 菌株贮藏后的单粒种子表面菌落数量Tab5 Colony forming unit of B9601 Y2 per canola seed coated by the No2 PSCA after storage贮藏时间 /月2 号种衣剂菌落数 /( cfumL1) 成活率 /%CK( 菌液拌种 )菌落数 /( cfumL1) 成活率 /%0 349 10510000 410 104100002 219 1056275a 260 1046341a4 204 1055845a 247 1046024a6 092 1052636a 110 1042683a9 036 1041032a 046 1031122a膜剂在油菜种子上粘附种衣剂 ， 而丸化种衣剂能够在种子周围形成 “蓄水球囊 ”， 起到 “小水库 ”的作用 ， 满足了包衣种的适宜水分范围 ， 从而提高出苗率 12有关 在丸化剂中 ， 从用药量来看 ， 3 号和 6号用药量低于其它处理 ， 在发芽试验和出苗率试验中总体效果不及含同等菌量的其它处理 ， 原因主要是杀菌剂多菌灵浓度过低 ， 而其它处理药量能够更有效杀灭种子表面的病菌 ， 提高了种子发芽率 ， 油菜种子生活力得到了提高 13 综合比较以 2 号配方最好 ， 在实验室试验中它对种子发芽势没有显著影响 ， 而且发芽率比空白对照提高 11 64%; 大田试验 2 号苗高和鲜质量较空白对照分别高 1497%和 9946%， 亦比不用 B9601 Y2 菌株的 8 号处理分别高 1108% 和 29 22%， 与 B9601 Y2 菌株能够分泌植物生长激素促进植物生长和 B9601 Y2的适宜用量有关 14 因 B9601 Y2 促进油菜种子萌发和植株生长的作用与使用浓度相关 ， 当浓度达到 433 107cfu/mL 时 ， 其促进种子发芽和植株生长的作用低于 433 106cfu/mL 的使用浓度 ， 符合该菌株分泌高剂量生长素的特性 15， 即高浓度抑制生长 ， 低浓度效果差 ， 中浓度最适 2 号配方所选杀虫剂和杀菌剂的用量合适 ， 起主要杀虫作用的吡虫啉为内吸性杀虫剂 ， 持效期较长 ， B9601 Y2 菌株的适量加入促进了油菜的生长 ， 提高了苗的素质 ， 增强了苗的抗虫害能力 经 2号种衣剂包衣后 ， 油菜苗表现出较好的抗蚜性 : 在播种 80d 和 90d 后 ， 防治蚜虫效果仍达 92 0% 和882%， 分别比未用 B9601 Y2 菌剂的 8 号配方防效相对提高 443%和 756%有效成分吡虫啉和多菌灵是国家登记的有较好贮存特性的农药 ， 比较稳定 而 B9601 Y2 是活体生物 ， 首次引入种衣剂 ， 药剂 、环境 、水分 、时间等多方面的因素都会对其产生影响 ， 需要对其做货架期的评价 随着贮藏时间的延长 ， 2 号种衣剂包衣比仅用 B9601 Y2 菌液拌种的种子表面 B9601 Y2 菌体成活率略低 ， 但经过统计分析差别不大 ( 表5) ， 种衣剂中有效成分吡虫啉 、多菌灵和各种助剂的添加对生防菌 B9601 Y2 菌体没有抑制作用 ，可进行混配使用 ; 2 号种衣剂经贮存 9 个月后芽孢率为 10%左右和贮存前芽孢数接近 ， 贮存期的延长对 B9601 Y2 芽孢成活率基本没有影响 ， B9601Y2 菌量下降主要是菌体下降过快所致 因此 ， 在利用该菌株生产复合包衣剂时 ， 应特别注意菌株芽孢量 ， 或者按照不同的使用日期调整包衣用菌量或使用完全为芽孢的菌液 15来定期生产 ， 从而提高成活率和延长货架期 ， 增加其商品性 参考文献 : 1 张颖弢 ， 史名元 ， 梁颖 ， 等 20% 多福油菜种衣剂应用效果研究 J 种子 ， 2004， 23( 6) : 71-72ZHANG Y T， SHI M Y， LIANG Y， et al The applica-tion effects of 20% carbendazimthiram seed coatingagent for rape J Seed， 2004， 23( 6) : 71-72 2 苏前富 ， 李红 ， 张伟 ， 等 种衣剂中不同浓度杀虫剂成分对玉米苗期生长的安全性评价 J 植物保护 ，2011， 37( 1) : 161-163SU Q F， LI H， ZHANG W， et al Evaluation of the safety265 云南大学学报 ( 自然科学版 ) http: / /www yndxxb ynu edu cn 第 35 卷of pesticide concentration in seed coating agents to thegrowth of corn seedlings J Plant Protection， 2011， 37( 1) : 161-163 3 曹德芳 ， 时亚飞 一种新型环保型水稻种衣剂的研制 J 华中师范大学学报 : 自然科学版 ， 2007， 41( 4) :587-591ZENG D F， SHI Y F Study and preparation of a novelenvironmental rice seed coating agent J Journal ofHuazhong University: Nat Sci ， 2007， 41( 4) : 587-591 4 宋文坚 ， 林飞荣 ， 周伟军 种子包衣和烯效唑调控油菜生长的研究 J 浙江农业大学学报 ， 1999， 25( 3) : 333-336SONG W J， LIN F R， ZHOU W J Studies on regulationof seed coating and uniconazole to the growth of rapeplant J Journal of Zhejiang Agricultural University，1999， 25( 3) : 333-336 5 DADLANI M Seed coating to improve stand establish-ment in rice J Seed Sci and Technol， 1992， 20: 307-313 6 邱军 ， 胡晋 ， 宋文坚 ， 等 油菜种衣剂中烯效唑最佳浓度的筛选及包膜后田间效果的研究 J 浙江大学学报 : 农业与生命科学版 ， 2004， 30( 2) : 153-158QIU J， HU J， SONG W J， et al Study on optimal con-centration of uniconazole in rape coating agent and fieldeffect of film coating on rape seed germination and sub-sequent growth of seedlings J Journal of Zhejiang U-niversity: Agric Life Sci， 2004， 30( 2) : 153-158 7 洪华珠 ， 喻子牛 ， 李增智 生物农药 M 武汉 : 华中师范大学出版社 ， 2010HONG H Z， YU Z N， LI Z Z Biological pesticides M Wuhan: Huazhong Normal University Press，2010 8 何凤美 ， 何月秋 ， 唐文华 ， 等 生防菌株 B9601 对促进植物生长作用的研究 J 中国农学通报 ， 2002， 18( 4) : 62-64HE F M， HE Y Q， TANG W H， et al Plant growth promoting effect of a biocontrol Bacillus strain， B9601 J Chinese Agricultural Science Bulletin， 2002， 18( 4) : 62-64 9 刘栓成 ， 杨进成 ， 马丽华 ， 等 解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 提高玉米生长和产量的效应 J 玉米科学 ，2010， 18( 6) : 78-82LIU S C， YANG J C， MA L H， et al Effect of Bacillusamyloliquefaciens B9601 Y2 on growth and yield pro-motion of maize J Journal of Maize Sciences， 2010，18( 6) : 78-82 10 汪澈 ， 何月秋 ， 张永庆 枯草芽孢杆菌 B9601 Y2 抑菌蛋白活性及产生条件的研究 J 植物病理学报 ，2005， 35( 1) : 30-36WANG C， HE Y Q， ZHANG Y Q Antifungal activityand production condition of crude protein by Bacillussubtilis B9601 Y2 J Acta Phytopathologica Sinica，2005， 35( 1) : 30-36 11 李阜棣 ， 胡正嘉 微生物学 M 北京 : 中国农业出版社 ， 2007LI F D， HU Z J Microbiology M Beijing: China Agri-culture Press， 2007 12 黄年生 ， 张洪熙 ， 徐卯林 ， 等 烟草种子丸粒化高吸水种衣剂的研制与应用 J 江苏农业科学 ， 2002，( 5) : 67-69HUANG N S， ZHANG H X， XU M L， et al Develop-ment and application of super water absorbent tobaccopelleted with seed coating agent J Jiangsu Agricultur-al Sciences， 2002( 5) : 67-69 13 刘红敏 ， 周顺玉 油菜病虫害及其无公害综合治理技术 J 安徽农学通报 ， 2010， 16( 11) : 269-270LIU H M， ZHOU S Y Non pollution integrated controltechnology of pests and diseases characterized by rape J Auhui Agricultural Science Bulletin， 2010， 16( 11) : 269-270 14 王志远 生防菌解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 抑菌机制的初步研究 D 昆明 : 云南农业大学 ， 2011WANG Z Y Antimicrobial mechanisms of Bacillusamyloliquefaciens subsp plantarum B9601 Y2 D Kunming: Yunnan Agricultural University， 2011 15 GEORGAKOPOULOS D G， FIDDAMAN P， LEIFERTC， et al Biological control of cucumber and sugar beetdamping off caused by Pythium ultimum with bacteri-al and fungal antagonists J Journal of Applied MicroBiology， 2002， 92: 1 078-1 086365第 4 期 董丽萍等 : 解淀粉芽孢杆菌 B9601 Y2 复方油菜种衣剂的研制Development of a compound canola seed coating agent containingBacillus amyloliquefaciens B9601 Y2DONG Li-ping1， PU En-tang2， WU Yi-xin3， MAO Zi-chao3， HE Yue-qiu1， 3( 1 Faculty of Plant Protection， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201， China;2 Institute of Agricultural Enviro