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文档简介

第 卷守第 期月植 物 病 理 学 报人一人 产卜 卜 雀麦 花 叶 病 毒 核 酸 特 性 的 研 究魏 宁 生 安 德 荣西 北 农 业 大 学 植 保 系联 邦 德 国 生 物 研 究 中 心提 要 对 用 两 相 酚 法 提 取 的 雀 麦 花 叶 病 毒 株 系 和 株 系 的 进 行 了 聚 丙 烯 酞 胺 凝 胶 电 泳 , 其 结 果 进 一 步 证明 是 株 系 中 的 一 个 新 组 份 。 在 昆 诺 妻 进 行 核 酸 侵 染 性 测 定 , 也 再 次 证 明 其 核 酸 的 侵 染 需 要、 乃 。 而 和 对 其 症 状 表 现 也 有 一 定 的 强 作 用 分 别 用 一 一 和人 做 模 板 , 合 成 其 互 补 一 采 用 五 杂 交 分 析 法 分 别 和 株 系 、 株 系 的 组 份进 行 分 子 杂 交 实 验 , 发 现 泣 和 介 的 核 背 酸 序 列 有 同 源 性 这 说 明 、 属 于 的 亚 菜 组 份 而 不是 原 来 推 测 的 卫 星年 等 在 美 国 甚 萨 斯 州 首 次 在 无 芒 雀 麦 。 。 、 , , , 、 上发 现 并 报 道 了 雀 麦 花 叶 病 毒 一 年 。 等 用 聚 丙 烯酞 胺 凝 胶 电 泳 证 明 自 然 的 粒 子 中 有 种 组 份 , 分 别 以 , 、 、 。 三 种情 况 被 包 在 核 蛋 自 外 壳 内 , 并 且 证 明 引 起 的 侵 染 需 要 三 种 、 , 、 、。 作 为 球 状 病 毒 粒 子 的 典 型 代 表 , 比 其 它 病 毒 产 量 高 而 稳 定 , 易 从 植 物 组 织 ,护分 离 提 纯 , 并 且 具 有 多 组 份 的 粒 子 和 多 组 份 的 基 因 组 因 此 对 的 深 入 研究 可 为 病 毒 的 理 化 特 性 、 遗 传 分 析 及 多 分 体 病 毒 的 研 究 提 供 一 个 理 想 的 模 式 。 年 魏 宁 生和 。 比 闹 在 西 德 联 邦 生 物 研 究 中 心 进 行 雀 麦 花 叶 病 毒 德 国 株 系 一 与 英 国 株 系一 病 毒 粒 子 的 比 较 研 究 时 , 发 现 一 中 有 个 组 份 , 比 典 型 株 系一 多 一 个 , 其 分 子 量 为 。 , 欠 , 但 的 属 性 尚 未 能 确 定 。 从 一作 者 分 别 在 西 北 农 业 大 学 植 保 系 病 毒 研 究 室 和 联 邦 德 国 生 物 研 究 中 心 对 一 和一 株 系 的 多 组 份 做 了 进 一 步 的 研 究材 料 和 方 法如 卜一 病 毒 的 提 纯采 用 聚 乙 二 醇 沉 淀 和 差 速 离 心 , , 分 钟 及 遵 。 , , 。 分 钟 的 方 法 分 别 得 到 一和 株 系 病 毒 粒 子 的 精 提 纯 制 备 物 。二 总 核 酸 的 制 备用 一 皂 土 一 酚 法 分 别 从 提 纯 的 一 及 一 株 系 中 提 取 。三 一 及 一 株 系 各 种 组 份 的 制 备用 聚 丙 烯 酞 胶 凝 胶 电 泳 分 离 两 株 系 为 , 凝 胶 浓 度 为 丙 烯 酞 胺 一 双 丙 烯 酞 胺 。 电 泳 缓 冲 液 为缓 冲 液 主 硼 酸 了 , 溶 于 蒸 馏 水 中 , 。 电 泳 后 的 凝 胶 用。 , 醋 酸 固 定 分 钟 , 。 的 甲 基 蓝 或 。 的 甲 苯 胺 蓝 染 色 分 钟 或 秒 , 然 后 用 蒸 馏 水 褪 色 , 观 察、洲植 物 病 理 学 报 阳 卷色 带 , 测 出 两 株 系 各 组 份 迁 移 的 距 离 。用 薄 刀 片 分 另 将 凝 胶 上 的 各 个 色 带 切 下 并 捣 碎 , 用 接 种 缓 冲 液皂 二 , 在 一 下 浸 泡 小 时 , 并 不 停 搅 拌 , 然 后 离 心 , 分 钟 , 分别 得 到 、 、 。 和 各 组 份 的 上 清 浓 。 然 后 用 冰 乙 醇 沉 淀 各 组 份 , 再 离 心, 。 , 分 钟 , 收 集 各 组 份 的 沉 淀 , 然 后 用 蒸 馏 水 悬 浮 , 紫 外 扫 描 测 定 各 组 份 的 浓 度 。四 核 酸 的 俊 染 性 测 定将 上 述 收 集 的 各 组 份 进 行 不 同 组 合 见 表 , 磨 擦 接 种 于 一 叶 期 的 昆 诺 菜口 土 , 每 组 合 接 种 个 叶 片 , 重 复 次 , 在 室 温 一 下 培 育 天 , 并 统 计 枯 斑 数 。五 互 补 杂 交 试 验一 的 制 备 用 低 溶 点 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 分 离 和 制 备 作 为 模 板 的 , 用 脱 氧 核 糖 核 酸 酶裂 解 牛 胸 腺 来 制 备 随 机 引 物 【 。 取 川 溶 化 的 低 溶 性 琼 脂 糖 凝 胶 含 量 为协 , 加 时 随 机 引 物 在 水 浴 中 加 热 分 钟 , 随 后 加 入 以 下 各 化 合 物 时 随 机 引 物 缓 冲液 、 、 、 、 协 酶 抑 制 剂 个 单 位 、反 应 底 物 、 、 及 、 林 一 一 一 ,川 , 最 后 加 人 。 川 个 单 位 禽 类 白 血 病 毒 反 转 录 酶 , 在 保 温 分 钟 , 然 后 加 入协 、 协 , 保 温 分 钟 , 终 止 反 应 并 水 解 模 板 , 加 件和 中 和 上 面 加 入 的 , 使 反 应 液 呈 中 性 。将 上 述 反 应 混 合 液 通 过 预 先 用 、 , 平 衡 过 的柱 , 用 上 述 平 衡 液 洗 脱 次 舟 次 川 。 收 集 每 次 洗 脱 液 , 并 用 液 休 闪 烁 计 数 器 测 , 收 集 第 一 个 放射 峰 。 以 一 “ 做 模 板 合 成 其 的 方 法 均 同 于 上 述 。 制 备 一 一 即 将 两 株系 的 组 份 转 移 到 硝 酸 纤 维 膜 上 首 先 用 琼 脂 糖 凝 胶 和 去 离 子 的 甲 酞 胺 电 泳 分 离 两 株 系 组份 。 电 泳 后 , 在 , 一 , 溶 液 中 通 过 滤 纸 吸 附 将 凝 胶 上 的 各带 转 移 到 预 先 用 平 衡 过 的 硝 酸 膜 上 , , 一 般 需 要 一 小 时 。将 硝 酸 纤 维 膜 烘 干 、 小 时 。 分 子 杂 交 预 先 用 忿 、 、 、。 、 、 及 协 变 性 蛙 鱼 精 子 的 缓 冲 液 对进 行 预 杂 交 ” 小 时 。 在 上 述 预 杂 交 缓 冲 浓 中 加 人 体 积 的 变 性 分 钟 后 ,立 即 在 冰 永 浴 中 冷 却 组 成 杂 交 缓 冲 液 , 和 预 杂 交 后 的 进 行 分 子 杂 交 、 小时 。 杂 交 后 的 洗 脱 和 检 测 分 别 用 。 肠 和 。 。 溶 液 在 室 温 下 洗 脱 分钟 及 在 下 洗 脱 分 钟 。 以 除 去 非 特 异 性 杂 交 休 。 然 后 烘 千 分 钟 , 在 一 下 ,用 放 射 自 显 影 检 查 杂 交 结 果 。月 月 知 日试 验 结 果一 的 组 份一 和 一 株 系 的 同 时 在 凝 胶 板 上 的 电 泳 结 果 表 明 表 株 系 的电 泳 后 为 条 色 带 , 比 典 型 的 株 系 多 一 条 带 , 其 大 小 介 于 与 之 间 , 分 子 量为 , 称 为 。 株 系 的 其 它 条 色 带 , 、 、 、 的 迁 移 率均 与 株 系 相 同 , 说 明 是 一 株 系 中 的 一 个 新 核 酸 组 份 这 一 结 果 在 后 来 进 行 大量 制 备 株 系 和 株 系 的 各 组 份 时 , 无 一 出 现 例 外 ,曰期 魏 宁 生 等 雀 麦 花 叶 病 毒 核 酸 特 性 的 研 究表 一 在 上 的 迁 移 距 离株 系 株 系叫 州 洲 黔 角 川 “ “ 。 “ 。 ” “ “ 。 ” “ 。 】 】 】 。 】 】二 二 里 兰 上 兰 二 二 笠 。 。重 复,二 核 酸 的 傻 染 性 侧 定用 凝 胶 电 泳 制 备 的 各 种 组 份 进 行不 同 组 合 后 接 种 于 昆 诺 黎 上 , 天 后 统 计 枯斑 数 见 表 。 从 表 可 以 看 出 核 酸的 侵 染 需 要 三 个 大 分 子 的 核 酸 组 份 , 、 。 , 缺 乏 的 核 酸 组 合 没 有侵 染 性 和 不 能 决 定 其 核酸 侵 染 性 , 但 其 对 症 状 的 表 现 却 有 加 强 作 用 。此 外 , 也 不 能 单 独 发 生 侵 染表 不 同 组 合 的 侵 染 性 测 定、心 羚 一 一 之 二黔 十 十一 十 一 一注 每 组 份 浓 度 为 卜 加 每 数 据 均 代 表 个 半 叶 的 平 均 枯 斑 数三 分 子 杂 交 试 验凝 胶 电 泳 后 , 两 个 株 系 的 各 组 份 通 过 滤 纸 吸 附 转 移 并 固 定 在 上 , 用分 别 以 一 、 、 、 、 不 为 模 板 反 转 录 合 成 的 进 行杂 交 分 析 , 放 射 性 自 显 影 结 果 见 图 。 以 一 为 模 板 反 转 录 合 成 的 。 和 一、 、 、 、 、 一 各 个 核 酸 组 份 杂 交 后 , 其 和 每 个 核 酸 组 份 包 括 都有 杂 交 反 应 , 说 明 和 、 、 、 中 某 一 组 份 具 有 核 昔 酸 序 列 同 源 性 。 以 为模 板 的 和 株 系 的 、 、 、 各 个 组 份 杂 交 后 , 其 。 仅 和 、 有很 强 的 杂 交 反 应 很 明 显 , 和 具 有 核 昔 酸 序 列 同 源 性 , 证 明 这 一 新 的 核 酸 组份 是 属 于 的 亚 基 因 组 份讨 论本 实 验 采 用 凝 胶 电 泳 对 一 株 系 的 核 酸 进 行 多 次 重 复 试 验 以 后 , 进 一 步 证 实是 一 株 系 中 的 新 组 份 这 一 结 果 和 魏 宁 生 等 的 报 道 一 致 。 核 酸 的 侵 染 性 结果 表 明 , 的 侵 染 需 要 , 、 、 缺 乏 的 。 则 不 能 发 生 侵 染 , 过去 的 研 究 证 明 , 具 有 编 码 外 壳 蛋 白 的 基 因 序 列 。 它 对 侵 染 和 症 状 表 现 起 着 决 定 的 作用 , 而 对 、 的 许 多 研 究 , 尚 未 得 出 一 个 明 确 的 统 一 结 论 。 在 病 毒 的 遗传 , 侵 染 、 繁 殖 、 传 播 等 中 所 起 的 作 用 尚 不 清 薄 , 需 要 进 一 步 研 究 ,、叫植 初 病 理 字 难 , 卷州人 卜 加人图 杂 交 白 显 影 结 果一 各 组 份 和 以 为 模 板 的 杂 交 结 果 ,人 及 和 形 成 杂 交 体 , 它 们 具 有 核 背 酸 序 列 同 源 性一 人 及 一 和 以 一 人 为 模 板 的 杂 交 结 果日月习互 补 杂 交 技 术 的 出 现 和 利 用 , 为 病 毒 的 检 测 、 鉴 定 、 分 类 等 方 面 提 供 了 一 个 强有 力 的 工 具 , 特 别 是 利 用 “ 研 究 多 组 份 基 因 病 毒 中 不 同 组 份 之 间 序 列 同 源 性 方面 , 它 更 具 有 快 速 、 准 确 等 特 点 。 本 文 采 用 随 机 引 物 合 成 的 放 射 性 标 记 。 , 其 一 。 的结 合 率 解 达 肠 。 分 别 用 一 和 为 模 板 合 成 的 和 各 个 核 酸组 份 进 行 分 子 杂 交 , 首 次 证 明 株 系 中 新 核 酸 组 份 属 于 的 亚 基 因 组 份 , 从 而 排除 了 做 为 卫 星 的 可 能 性作 者 在 和 教 授 联 邦 德 国 生 物 研 究 中 心 的 合 作 研 究 中 发 现 , 如 果 将 一包 括 、 、 “ 、 接 种 到 昆 诺 黎 上 , 接 种 后 每 隔 天 对 植 物 组 织 中 的 组 份 进 行 检 测 两相 酚 抽 提 病 毒 后 , 进 行 呱 琼 脂 糖 凝 胶 和 呱 去 离 子 的 甲 酞 胺 电 泳 , 发 现 在 昆诺 蔡 上 消 失 。 然 后 再 将 昆 诺 蔡 上 的 德 国 株 系 转 接 到 大 麦 上 , 则 在 , 周 后 又 逐 渐 出现 , 在 大 约 周 后 , 其 分 子 量 逐 渐 稳 定 为 。 在 对 这 一 重 新 出 的 一 和 原 来 的进 行 杂 交 试 验 表 明 , 它 们 完 全 是 属 于 同 一 种 , 都 是 的 亚 基 因 片段 二 这 一 现 象 可 能 是 由 于 大 麦 组 织 内 某 些 大 分

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