胰岛细胞自身抗体的检测及其临床意义PPT演示课件

胰岛细胞自身抗体的检测及其临床意义,.,公司简介,深圳市伯劳特生物制品有限公司是深圳市高新技术企业。公司有多年从事免疫类产品研究的专业人才和丰富临床经验的医学专家。在国内外医学专家的指导下，致力于最新一代诊断试剂的开发经营。,.,概 述,糖尿病 （diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。,.,糖尿病分型诊断的主要依据,(1) 临床资料 ：起病年龄 、种族 、是否需要胰岛素治疗、家族史、起病时的体质指数 ；(2)胰岛自身抗体 ：GADA、ICA、IAA、IA-2(3)HLAII基因型；(4)胰岛功能：如 C肽测定 。 准确的分型是实施预防及治疗的基本前提,.,1型糖尿病,1型糖尿病：自身免疫系统错误地攻击和损伤胰岛细胞，使胰岛素的合成和分泌减少或完全缺乏的自身免疫性疾病诊断依据：空腹胰岛素低于5IU/ml（国际单位），空腹血糖超过6.8mmol/L（毫摩尔)以上,胰岛细胞自身抗体检测阳性,.,1型糖尿病的病因,1、遗传因素（发病基础）2、免疫因素：有胰岛炎存在，且T、B 淋巴细胞浸润现象显著。 3、病毒感染因素：柯萨奇病毒，风疹病毒，巨细胞病毒，腮腺炎病毒等 。4、环境因素：包括婴儿期牛奶喂养、预防接种疫苗、气候、地理、毒素以及应激等，促使1型糖尿病的发病。,.,1型糖尿病的病因,绝大多数1型糖尿病是自身免疫性疾病、遗传因素和环境因素共同参与其发病过程。某些外界因素作用于有遗传易感性的个体，激活了T淋巴细胞介导的一系列自身免疫反应，引起选择性胰岛细胞破坏和功能衰竭，体内胰岛素分泌不足进行性加重，导致糖尿病。,.,1型糖尿病 LADA,成人迟发型（隐匿性）自身免疫性糖尿病（LADA）早期表现为起病缓慢、年龄偏大、无酮症出现和常伴有肥胖，不易与I-DM鉴别，但胰岛细胞自身抗体检测为阳性，表明胰岛细胞功能已发生渐进性破坏，病情缓慢发展，一定时间后发展为I-DM。LADA是1型糖尿病的一个亚型，以在遗传与环境多种因素参与下，胰岛细胞发生缓慢的进行性损伤直至功能衰竭为特征。,.,LADA诊断标准：1、发病年龄302、胰岛细胞自身抗体阳性3、诊断后至少6个月不需要胰岛素治疗 它具有胰岛自身免疫异常，胰岛细胞遭自身免疫破坏，随后可出现细胞功能明显降低，最终口服抗糖尿病药物失效，必须使用胰岛素来控制病情。,1型糖尿病 LADA,.,2型糖尿病,以胰岛素抵抗(体内周围组织对胰岛素的敏感性降低，外周组织如肌肉、脂肪对胰岛素促进葡萄糖的吸收、转化、利用发生了抵抗)为主伴胰岛素分泌不足，导致血糖升高的代谢性疾病。发病因素：遗传、肥胖、年龄和饮食等。诊断依据：空腹胰岛素水平高于5.5IU/ml（国际单位）但同时并存有高血糖，即空腹血糖高于6.8mmol/L（毫摩尔）以上时即可诊断为2型糖尿病。,.,其他特殊类型糖尿病,胰岛B细胞功能缺陷;胰岛素作用的遗传缺陷;胰岛外分泌疾病;内分泌疾病;药物或化学物诱导;感染;免疫介导伴糖尿病的其他遗传综合征;妊娠糖尿病。,.,概 述,1型糖尿病：在无症状期及发病后一定时期中，可检出针对胰岛细胞的自身抗体临床意义较大的为：胰岛细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)确认免疫介导1型糖尿病，主要依赖在糖尿病患者中检出针对胰岛细胞各种抗原的自身免疫抗体,.,概 述,非糖尿病患者胰岛细胞自身抗体阳性可预示以后发展为糖尿病的可能，2型糖尿病阳性患者说明以后可能产生严重的胰岛功能损害，进而转变为1型糖尿病。因此糖尿病自身抗体被认为是2型向1型转化的标志。,.,胰岛细胞抗体(ICA),针对胰岛细胞内所具有的胞质成分的多种抗原的混合抗体它是1型糖尿病预测中应用最早的免疫学标志，在1型糖尿病患者“健康”一级亲属阳性率达到30%,.,胰岛细胞抗体(ICA),ICA阳性预示胰岛细胞的自身免疫损害，ICA阳性与将来成为临床期1型糖尿病有关，高滴度的ICA预测性更强儿童中ICA阳性亦对1型糖尿病有较高的预测率。,.,在新诊断中1型糖尿病中阳性率为60%90%，发病几年前即可阳性，存在时间短，通常在临床起病后2-3年内消失。约10-15%病人持续阳性，往往伴有甲状腺和胃壁细胞自身抗体，同时存在其他自身免疫性内分泌腺病。,胰岛细胞抗体(ICA),.,胰岛素自身抗体(IAA),IAA是一组能与胰岛素结合的抗体。抗胰岛素抗体有两种抗胰岛素自身抗体，属自身免疫抗体使用了外源性胰岛素产生的抗体。IAA不是糖尿病的特异抗体，在胰岛素自身免疫综合征、甲状腺疾病也可出现，甚至不少正常人也为阳性,.,胰岛素自身抗体(IAA),单纯IAA阳性对进展为1型糖尿病的预测价值是较低的，单纯的IAA阳性不能作为1型糖尿病的标志，仅表明有进展为糖尿病的自身免疫倾向。阳性率随年龄的增加而下降，并与HLA基因型有关。据报道，5岁以下儿童新诊断1型糖尿病的病人阳性率为50%,滴度也较高。,.,谷氨酸脱羧酶抗体(GADA),谷氨酸脱羧酶（GAD）是人体正常的蛋白酶，催化谷氨酸转变为-氨基丁酸，参与胰岛细胞合成与分泌胰岛素。在患者出现1型糖尿病临床表现前数年甚至十余年即可出现，是最早出现的自身抗体 。目前认为GAD是破坏胰岛细胞，引起1型糖尿病的关键抗原，并且极可能是1型糖尿病自身免疫的始动靶抗原。,.,GADA可作为1型糖尿病预测的指标，在初发1型糖尿病患者中，GADA的检出率很高，一般为60%80%，最多的可达96%，而2型糖尿病和正常人中的检出率很低(1%2%)国外报道在糖尿病前期个体中有82%的GADA阳性，可作为普查手段，筛查1型糖尿病的高危人群和个体,谷氨酸脱羧酶抗体(GADA),.,谷氨酸脱羧酶抗体(GADA),GADA阳性还可见于僵人综合症、Graves病（毒性弥漫性甲状腺肿 ）及不伴1型糖尿病的多发性自身免疫内分泌腺病型病人它与柯萨奇病毒具有相似氨基酸片段，能特异的与HLA分子结合并被呈递给T淋巴细胞，导致胰岛细胞损伤和1型糖尿病。,.,GADA可作为成人迟发自身免疫性糖尿病(LADA)的预测和早期诊断指标，此类患者常可出现GADA的高水平，并稳定维持与ICA和IAA相比，GADA与LADA关系更密切，可以将LADA与2型糖尿病区别开来，为正确分型提供确切的指标，从而更好地指导治疗。,谷氨酸脱羧酶抗体(GADA),.,蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),蛋白酪氨酸磷酸酶(IA-2)是1型糖尿病重要的胰岛细胞自身抗原，是自身反应性T淋巴细胞的靶分子， IA-2有13个T细胞抗原肽，它的主要抗原肽与麻疹病毒、巨细胞病毒、人轮状病毒等多种病毒以及牛奶、豆类等食物蛋白的氨基酸序列有高度相似性，因此T细胞有可能被上述病毒或食物蛋白激活，触发胰岛细胞自身免疫反应是胰岛细胞破坏。,.,蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),IA-2A对胰岛细胞损害的标志性作用比GADA更具特异性，IA-2A在1型糖尿病初诊后多年仍存在，对1型糖尿病诊断价值较大IA-2A在1型糖尿病患者的一级亲属中抗体阳性预报率较高，可作为1型糖尿病高危人群筛查指标,.,蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),检测IA-2A对于1型糖尿病的诊断与预测有着重要的临床意义。但IA-2A主要与经典的1型糖尿病相关，对LADA的诊断价值远不如GADA，在LADA的诊断中，IA-2A的检测需与其它胰岛细胞自身抗体联合进行。,.,胰岛自身抗体检测的临床意义,指导糖尿病临床分型 预测细胞功能衰竭 在高危人群中筛查1型糖尿病 预测治疗的疗效,.,指导糖尿病临床分型,1型糖尿病的临床表现存在明显的差异经典1型糖尿病常以酮症酸中毒的方式急性起病，以青少年为多数LADA则如同2型糖尿病患者一样缓慢发展，在成年后起病，最初并不依赖胰岛素LADA的诊断依靠胰岛自身抗体的检测,.,血清胰岛自身抗体是胰岛细胞自身免疫破坏的标志至少有一种以上胰岛自身抗体阳性是LADA诊断的重要依据多种抗体联合检测更有助于鉴别LADA和2型糖尿病。,指导糖尿病临床分型,.,指导糖尿病临床分型,联合检测GAD、ICA、IAA及IA-2抗体是预测1型糖尿病最可靠的免疫学标志。98%新诊断的1型糖尿病病人至少一种抗体阳性，80%存在两种以上抗体，而对照人群无一人存在两种以上抗体。,.,指导糖尿病临床分型,为了排除可能的干扰，对于IAA阳性者，还需要注意是否接受过胰岛素治疗，如接受过胰岛素治疗，其疗程必须小于2周。,.,胰岛自身抗体检测的临床意义,指导糖尿病临床分型 预测细胞功能衰竭 在高危人群中筛查1型糖尿病 预测治疗的疗效,.,预测细胞功能衰竭,I-DM的形成一般历经下面四个阶段：遗传易感性+环境因素（病毒、化学 毒性物质和饮食）诱发自身抗体的出现胰岛素分泌逐渐丧失糖尿病,.,血清抗体在预测细胞功能衰竭时， ICA的阳性预测值要高于GADA和IA-2A。在诊断糖尿病后，大多数患者GADA可持续阳性而ICA阳性患者随病程进展可变成ICA阴性，这种阴性亦提示已经出现细胞功能的衰竭。,预测细胞功能衰竭,.,胰岛自身抗体检测的临床意义,指导糖尿病临床分型 预测细胞功能衰竭 在高危人群中筛查1型糖尿病 预测治疗的疗效,.,美国1型糖尿病预防试验(Diabetes prevention trial type1)中，对1型糖尿病患者亲属中的非糖尿病个体进行了ICA、IAA、GADA和IA-2A抗体筛查结果发现5.9%的个体有一种抗体阳性，2.3%有2种以上的抗体阳性,在高危人群中筛查1型糖尿病,.,多种抗体联合筛查敏感性进一步提高在随访中有些最初仅一种抗体阳性者可转变为多种抗体阳性。,在高危人群中筛查1型糖尿病,.,1型糖尿病可能会从胎儿或婴儿时就已经开始，1型糖尿病孕妇在脐带血中可以检测到糖尿病相关的自身抗体，这些抗体可能经过血循环而传递给胎儿，脐带血抗体阳性可能反映胎儿的细胞已经存在自身免疫,在高危人群中筛查1型糖尿病,.,在高危人群中筛查1型糖尿病,抗体阳性孕妇的婴儿发生糖尿病的危险性为2%3%，对于这些特殊群体，进行脐带血糖尿病相关抗体检测可有助于婴幼儿糖尿病的早期发现与干预。,.,胰岛自身抗体检测的临床意义,指导糖尿病临床分型 预测细胞功能衰竭 在高危人群中筛查1型糖尿病 预测治疗的疗效,.,预测治疗的疗效(胰岛移植),部分患者移植后血清GADA和IA-2A抗体水平可升高，原来阴性者可出现阳性，这提示胰岛移植引起了自身抗原再次暴露给免疫系统，诱发自身免疫反应，这部分患者移植成功、不依赖胰岛素的比例较低,.,预测治疗的疗效(胰岛移植),移植前后自身抗体均为阴性的糖尿病患者，移植成功、不依赖胰岛素的比例较高。故GADA和IA-2A抗体可预示胰岛移植后的效果，其中以GADA水平的变化更为重要,.,预测治疗的疗效(干预治疗),1型糖尿病的干预治疗主要是阻断胰岛细胞进行性的自身免疫性破坏，保护残存胰岛细胞，从而延缓病情进展。有资料表明： I-DM患者有剩余细胞功能者，比无剩余细胞功能者在强化胰岛素治疗后血糖控制更好。有多种药物进入研究。目前在临床上可应用免疫抑制剂（如环孢霉素等）,.,预测治疗的疗效(干预治疗),免疫抑制剂环孢霉素可抑制血清ICA、IAA水平，环孢霉素干预治疗后胰岛细胞功能可有所恢复，C肽水平升高，部分患者出现临床缓解（蜜月期）而不需要胰岛素治疗,.,预测治疗的疗效(干预治疗),血清IA-2A状态对预测疗效有较大的价值。IA-2A阴性者C肽水平升高更为明显，临床缓解率更高，复发率（再出现依赖胰岛素）较低。环孢霉素本身对血清IA-2A水平无影响，环孢霉素治疗后血清IA-2A的阳性率以及滴度水平无明显变化。,.,预测治疗的疗效(干预治疗),GADA亦可预示环孢霉素等应用后细胞恢复情况GADA常用于1型糖尿病的免疫预防监测， 1型糖尿病病情好转与血清GADA转阴有相关关系GADA是目前疗效监测的较好指标。,.,小 结,胰岛自身抗体检测有着重要的临床意义，这些自身抗体在1型糖尿病中出现情况、时间和强度并不一致，用于诊断则各抗体的敏感性和特异性均不同。各个自身抗体有其各自的特点和临床价值， 并将随着研究方法的发展发挥越来越多的作用,.,小 结,单一抗体检测结果应用于临床常有较大的局限性。目前国际上逐渐达成一种共识，即联合检测多种抗体可提高1型糖尿病诊断和筛查的敏感性、特异性和准确性，为临床工作提供更多有价值的参考。,.,产品检测原理,将胰腺细胞提取的混合蛋白抗原（含有胰岛素、谷氨酸脱羧酶和胰岛细胞抗原等多种细胞蛋白成份）用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(PAGE)按分子量大小依次分开，再通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种胰岛细胞自身抗原成份。将其放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有自身抗体，将会分别与相应抗原结合，再加入酶联免疫显色试剂，就会在抗原、抗体结合位置出现显色区带，与标准带对照即可判断待测血清中含有何种抗体。,.,.,产品用途,用于糖尿病分型诊断，同时为临床糖尿病治疗、预测和预防提供重要的参考依据。,.,标本要求,静脉取血25ml，置干燥试管待凝固后离心分离血清，如当日不能检测血清标本保存于20 ，严重溶血、有絮状物或霉变的血清标本会影响测试。本检查无任何禁忌症，不需要空腹可随时采血检测。,.,糖尿病自身抗体免疫印迹试剂盒的 操作步骤,实验要准备的材料：蒸馏水若干；1000ul可调加样枪一支、10ul加样枪一支及相应的加样枪吸嘴若干；500ml带盖子有刻度的干净瓶子；摇床一台；废物桶一个等。,.,1 在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按 1：20 的比例稀释成洗涤应用液。 ( 在2-8贮存的浓缩洗涤液会有结晶析出，将整瓶（25ml）浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释至500ml，放入试剂瓶中，标签上注明配制时间，保存于2-8，有效期6个月，如有絮状物或霉变应废弃。)2