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从蚊子血中检测人 DNA 【摘要】 目的 从叮咬人后的蚊子体内血中得到被叮咬者 的 DNA分型。 方法 Chelex100 法提取叮咬人后的 蚊子血 DNA，PowerPlex 16试剂盒和 Identifiler试 剂盒扩增 DNA。 结果蚊子血中可成功检测出被叮咬人的 DNA基因 型。 结论可从蚊子血中检测到被叮咬人的 DNA数据， 结果稳定性好。两种试剂盒的联合应用，可大大提高检测 的 准确率和可靠性，对实际检案具有很大帮助。 【关键词】蚊子；人；DNA 分型 【中图分类号】199192；(175 【文献标识码】B 【文章编号】10079297(XX)02013802 实践中的法医 DNA检验样品具有多样性、复杂性，且 常为 微量、已部分降解的生物物证，例如蚊子血。本文对 蚊子体内血 进行 DNA检测，成功得到被叮咬者 DNA数据，并进一 步对 DNA 分型结果的可靠性及如何提高检测结果的准确率进行 研究。 材料和方法 一 、样本和试剂 (一)样本 叮咬人血后不久被拍死的蚊子 1只。分别取血痕和混 杂有 蚊子残片的部位，1 名被叮咬志愿者新鲜静脉血作对照。 (二)试剂与仪器 抗人血红蛋白胶体金测试剂条(Eboat Dallas 公司)。 PowerPlex 16 Kit(Promega公司)。AmpFLSTR Identifiler Kit (ABI 公司)。9700 型 PcR仪(ABI 公司)。ABI 3100Gene6cAn alyzer(ABI 公司)。 二、方法 (一)DNA 提取 样本于 500 l纯水中浸泡 30 min，抗人血红蛋白胶体 金测 试剂条检验后，Chdex 一 100法提取 DNA。 (二)PCR 扩增及检测 PowerPlex 16 System 复合扩增试剂盒、AmpFLSTR Identifil er System复合扩增试剂盒分别扩增样本 DNA，反应体 系为 20“l ，ABI 3100 Genetic Analyzer 检测。 表 1 蚊子体内血扩增结果(PowerPx 16 System) * 为一个基因座中，两个等位基因峰高比值 9999。蚊子 DNA不影响检测结果。 DNA 分型结果的准确性很大程度取决于样品中模板 DNA 139 的量和纯度。一般来讲，STR 基因座中由于等位基因属 小片段 400 bp，两个等位基因之间差异扩增不如小卫星 VNTR 显著， 等位基因峰高基本相同。但当模板 DNA极微量、DNA 降 解或有 抑制剂存在时，可能导致某一个等位基因优先扩增， 一个基因座 的两个等位基因峰高会出现不平衡现象。由于现场提 取的蚊子 血一般较微量，同时蚊子体内可产生某些酶类，易引 起 DNA降 解，从而影响 DNA结果。本实验中，在用 PowerPlex 16试剂盒 检测时，蚊子血痕 1在 Penta E、CSF1P0、TPOX 基因 座上，出现 一个基因座中两个等位基因峰高比值50，D16S539 基因座 上出现等位基因 14丢失的现象，易导致错误判型。而 Identifiler 试剂盒则无此类现象。因此我们认为对此类样品必须： 1)重新 扩增；2)另选试剂盒扩增以确定结果是否有可重复性， 提高判型 的准确性。本实验联合应用 identifiler试剂盒对样 品 PCR扩增、 电泳检测后，得到以上几个基因座的正确 DNA分型结 果，提高 了对微量、降解的样品 DNA检测的可靠性。 本实验研究结果表明，通过对案件现场提取的蚊子血 进行 DNA 检测可以得出人 DNA分型结果。为避免模板量微、 降解 引起 DNA分型结果的误判，在实际应用时，应用两个 以上试剂 盒进行扩增，对结果进行综合分析、判断，将大大提 高检测的准 确率。 参