实验室生物安全与消毒灭菌

实验室生物安全 与消毒灭菌 河北医科大学第三医院 张进贵 根据： l WHO 实验室生物安全手册 第三版， 2004 l 中华人民共和国国务院令第 424号 病原微生 物实验室生物安全管理条例 l GB 19781-2005 医学实验室 安全要求 l GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求 根据： 卫生部第 45号令 可感染人类的高致病性病原微生物菌 （毒）种或样本运输管理规定 2006年 2月 1日起施行 卫生部制定 人间传染的病原微生物名录 2006年 1月 11日发布 根据： WS/T 2012-04-05 发布 医疗机构消 毒 技术规范 2012-08-01实施 WS/T 2012-04-05 发布 医院空气净 化 管理规范 2012-08-01实施 一 . 实验室生物安全 安全管理体系文件 1. 实验室安全管理的方针和目标 2. 安全安全 管理手册 3. 程序文件 4. 说明及说明及 操作规程 5. 安全手册 6. 记录 7. 标识系统 实验室安全管理的方针 . 实验室遵守国家以及地方相 关法规和标准的承诺 . 实验室遵守良好职业规范、 安全管理体系的承诺 . 实验室安全管理的宗旨 实验室安全管理的目标： . 应包括实验室的工作范围 、 对管理活 动和技术活动制定的安全指标， 应明 确、并进行考核 。 . 应在风险评估的基础上确定安全管理 目 标，根据实验室活动的复杂性和风险 程 度定期评审安全管理目标和制定监督 检 查计划 。 . 组织结构 . 人员岗位及职责 . 安全及安保要求 . 安全管理体系 . 体系文件架构 . 规定管理人员的权限和责任 . 以国家标准为依据，适用时，应得到相关 主 管部门的批准。 安全管理手册 安全手册 （一） （ 不限于以下内容） 紧急电话、联系人； 实验室平面图、紧急出口、撤离路线； 实验室标识系统； 生物危险； 化学品安全； 辐射； 机械安全； 安全手册 （二） （ 不限于以下内容） 机械安全； 电气安全； 低温 、高热； 消防； 个体防护； 危险废物的处理和处置； 事件、事故处理的规定和程序； 从工作区撤离的规定和程序。 安全手册应简明、易懂、易读、 实验室管理层应至少每年对安全手册 评审和更新 安全要求不能低于国 家和地方的相关规定 及标准的要求 安全及安保要求安全及安保要求 A . 理解两个概念的差异理解两个概念的差异 . 实验室生物安全实验室生物安全 . 实验室生物安全保障实验室生物安全保障 b. 中度危险性物品，应采用达到中水平消毒以上效 果的消毒方法 ; c. 低度危险性物品，宜采用低水平消毒方法，或做 清洁处理；遇有病原微生物污染时，针对所污染 病原微生物的种类选择有效的消毒方法 ; 消毒、灭菌方法的选择原则 （二） 2. 根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒或 灭菌方法 : 1. a. 对受到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和 经血 2. 传播病原体（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒 、艾 3. 滋病病毒等）污染的物品，应采用高水平消 毒或 4. 灭菌； b. 对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原 体等病原微生物污染的物品，应采用中水平以上 的消毒方法； 消毒、灭菌方法的选择原则 （二） c. 对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品， 应采用达到中水平或低水平的消毒方法； d. 杀灭被有机物保护的微生物时，应加大消毒 剂的使用剂量和（或）延长消毒时间； e. 消毒物品上微生物污染特别严重时，应加大 消毒剂的使用量和（或）延长消毒时间； 消毒、灭菌方法的选择原则 （三）3. 根据消毒物品的性质选择消毒或灭菌方法： 1. a. 耐热、耐湿的器械、器具和物品，应首选压 力蒸 2. 汽灭菌；耐热的油剂类和干粉类应采用干热灭 菌； b. 不耐热、不耐湿的物品，宜采用低温灭菌方法如 环氧乙烷灭菌、过氧化氢低温等离子体灭菌或低 温甲醛蒸汽灭菌等； c. 物体表面消毒，宜考虑表面性质，光滑表面宜选 择合适的消毒剂擦拭或紫外线消毒器近距离照射； 多孔材料表面宜采用浸泡或喷雾消毒法； 常用消毒与灭菌方法 皮肤与黏膜的消毒方法 1. 皮肤的消毒方法 ： （一） a. 用浸有碘伏消毒液原液的无菌棉球或其他替代物品 局部擦拭 2遍，作用时间遵循产品的使用说明。 b. 使用碘酊原液直接涂擦皮肤表面 2遍以上，作用时间 1min3min,待稍干后再用 70%80% 乙醇（体 积 分 数）脱碘。 c. 使用有效含量 2g/L氯己定 -乙醇 （ 70% ，体积分数） 溶液局部擦拭 23遍，作用 时间 遵循产品的使用说明。 d. 使用 70%80% 乙醇（体 积 分数）乙醇溶液擦拭消毒 2遍，作用 3min e. 使用复方季 铵盐 消毒 剂 原液皮肤擦拭消毒，作用 时间 3min5min 。 1. 皮肤的消毒方法： （二） 病原微生物污染皮肤的消毒： a. 彻底冲洗。 b. 采用碘伏原液擦拭作用 3min5min，或用乙 醇、异丙醇与 氯 己定配置制成的 消毒液等擦 拭消毒，作用 3min5min。 2. 黏膜的消毒方法 （一） a. 使用含有效碘 1000mg/L2000mg/L的碘伏擦 拭，作用到规定时间。 b. 使用有效含量 2g/L氯己定 -乙醇 （ 70% ， 体 积分数）溶液局部擦拭 23遍，作用时间遵循 产品的使用说明。 c. 使用复方季 铵盐 消毒 剂 原液皮肤擦拭消毒， 作用 时间 3min5min 。 擦拭消毒方法： 2. 黏膜的消毒方法 （二） a. 使用含有效碘 500mg/L的消毒液冲洗，作用到 规定时间。 b. 使用有效含量 2g/L氯己定水溶液冲洗或漱 洗， 至冲洗液或 漱洗液变清为止。 c. 采用 3% （ 30g/L) 过 氧化 氢 冲洗 伤 口、口腔 含漱，作用到 规 定 时间 。 冲洗消毒方法： 3. 地面和物体表面的清洁与消毒 a. 地面无明显污染时，采用湿式清洁。当地面受到血液、 体液等明显污染时，先用吸湿材料去除可见的污染物， 再清洁和消毒。 b. 物体表面的清洁与消毒：室内用品如桌子、椅子、凳子 等无明显污染时，采用湿式清洁，当受到明显污染时， 先用吸湿材料去除可见的污染物，然后再清洁和消毒 。 c. 感染高风险的部门其地面与物体表面应保持清洁干燥， 每天进行消毒，遇明显污染随时去污、清洁与消毒。地 面消毒采用 400mg/L700mg/L有效氯的含氯消毒液擦拭 ，作用 30min,物体表面消毒方法同地面或采用 1000mg/L2000mg/L季铵盐类消毒液擦拭。 4. 清洁用品的消毒 a. 擦拭布巾：清洗干净，在 250mg/L有效氯消毒 剂（或其他有效消毒剂）中浸泡 30min，冲净消 毒液，干燥备用 。 b. 地巾：清洗干净，在 500mg/L有效氯消毒剂中 浸泡 30min，冲净消毒液，干燥备用 。 c. 擦拭布巾、地巾应分区使用。 压力蒸汽灭菌方法 适用于耐热、耐湿器械、器具和物品的灭菌。 下排气压力蒸汽灭菌还适用于液体的灭菌；快速 压力蒸汽灭菌适用于裸露的耐热、耐湿器械、器 具和物品的灭菌，压力蒸汽灭菌不适用于油类和 粉剂的灭菌。 1.干热灭菌方法 适用范围： 适用于耐热、不耐湿、蒸汽或气体不能穿透物品 的灭菌，如玻璃、金属等医疗用品和油类、粉剂 等制品的灭菌。 灭菌方法： 采用干热灭菌器进行灭菌。灭菌参数一般为 150 , 150min;160 ,120min;170 ,60min; 180 ,30min; 2.环氧乙烷气体灭菌 适用范围： 适用于不耐热、不耐湿的器械和物品的灭菌，如 电子仪器、纸质制品、化纤制品、塑料制品、陶 瓷及金属制品等诊疗用品。不适用于食品、液 体、油脂类、粉剂类等灭菌。 灭菌方法： 采用 100%纯环氧乙烷或环氧乙烷和二氧化碳混合 气体，不应使用氟利昂。 除金属和玻璃材质外的灭菌物品，灭菌后解析时 间一般为 50 , 12h;60 ,8h； 180 ,30min; 3.过氧化氢低温等离子体灭菌 适用范围： 适用于不耐热、不耐湿的器械的灭菌，如电子仪 器、光学仪器等器械的灭菌。不适用于布类、纸类、 水、油类、粉剂等材质的灭菌。 灭菌方法： 应在专用的过氧化氢低温等离子体灭菌器内进行，一 次灭菌过程包含若干个循环周期，每个周期包括抽真 空、过氧化氢注入、扩散、等离子化、通风五个步 骤。 4.低温甲醛蒸汽灭菌 适用范围： 适用于不耐湿、热的器械、器具和物品的灭菌，如电 子仪器、光学仪器、官腔器械、玻璃器皿、合成材料 物品等。 灭菌方法： 根据低温甲醛蒸汽灭菌器的要求，采用 2% 复方甲醛溶 液或福尔马林溶液（ 35% 40% 甲醛）进行灭菌，每 个循环的 2% 复方甲醛溶液或福尔马林溶液（ 35% 40% 甲醛）用量根据装载量不同而异。 灭菌参数：温度 55 80 ， 灭菌维持时间为 30min 60min。 5.紫外线消毒 适用范围： 适用于室内空气和物体表面的消毒。 紫外线消毒灯要求： 电压： 220V，相对湿度 60% 、温度 20 时，辐射的 253.7nm紫外线强度（使用中的强度）应不低于 70uW/cm 2。 使用方法：在室内无人状态下，采用悬吊式或移动式 直接照射消毒。灯管距地面 1.8m 2.2m。数量为平均 1.5W/m 3，照射时间 30min. 6.紫外线消毒的效果监测 A.紫外线灯辐照度值的测定 B.生物监测法 C.C. 紫外线强度照射指示卡监测 法 .紫外线辐照计测定法： 监测方法： 开启紫外线灯 5min后 ，将测定波长为 253.7nm紫外线辐 照计探头置于被检紫外灯下垂直距离 1m的中央处，特 殊紫外线灯在推荐使用的距离处测定，待仪表稳定后， 所示数据即为该紫外线灯的辐照度值。 .生物监测法： 空气消毒的效果监测，按 A.6的要求执行。 .浮游菌空气采样器法。（净化空气） .普通营养琼脂平皿沉降法。 . 紫外线强度照射仪指示卡监测法： 监测方法： 开启 紫外线灯 5min后 ，将紫外灯下垂直距离 1m处， 有图案一面朝上，照射 1min， 紫外线照射后，观察 指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较，读出照 射强度。 结果判定： 普通 30W 直管型紫外线灯，新灯管的辐照强度应符 合 GB 19258要求；使用中紫外线灯辐照强度 70W/cm 2为合格； 30W 高强度紫外线新灯的 辐 照 强度 180W/cm 2为合格。 7.臭 氧 适用范围： 适用于无人状态下实验室的空气和物体表面的消毒。 使用方法： 1.空气消毒：在封闭空间内，无人状态下，采用 20mg/m3浓度的臭氧，作用 30min，对自然菌的杀灭 率达到 90% 以上。消毒后应开窗通风 30min，人员 方可进入室内。 2.物体表面消毒：在密闭空间内，相对湿度 70% ， 采用 60mg/m3浓度的臭氧，作用 60min 120min 。 注：有人情况下，室内空气允许臭氧浓度为 0.16mg/m3. 8.戊二醛 适用范围： 适用于不耐热器械、器具与物品的浸泡消毒与灭菌。 使用方法： 将洗净的器械、器具与物品放入 2% 的碱性戊二醛溶液 中完全浸没，并应去除物体表面的气泡，容器加盖。 温度 20 25 ，消毒作用到产品使用说明的规定时 间，灭菌作用 10h， 无菌方式取出后用无菌水反复冲洗 干净，再用无菌纱布等擦干后使用。其他戊二醛制剂 的用法遵循卫生行政部门或国家相关规定进行。 注意事项：戊二醛对人有毒性，应在通风良好的环境中使用， 不慎接触，应立即清水连续冲洗干净，必要时就医。 9.邻苯二甲醛 适用范围： 适用于不耐热器械、器具与物品的浸泡消毒。 使用方法： 将待消毒的器械、器具与物品完全淹没于含量为 5.5g/L PH为 7.08.0、温度 20 25 的邻苯二甲醛溶 液中浸泡，消毒容器加盖，作用 5min 12min 。 注意事项： a. 使用时应通风，直接接触会引起眼睛、皮肤、消化 道、呼吸黏膜损伤，会导致着色，处理时应谨慎、戴 手套；溅入眼内应及时用水冲洗，必要时就诊。 b. 消毒液 连续 使用 应 14d 。 10.过氧化物类 （一） 过氧乙酸 适用范围： 适用于耐腐蚀物品、环境、室内空气等的消毒。 消毒方法： 1.浸泡法 ：将待消毒的物品浸没于装有过氧乙酸的容 器中，加盖。对一般物体表面，用 0.1% 0.2% （ 1000mg/L 2000mg/L)过 氧乙酸溶液浸泡 30min。对 耐腐蚀器械的高水平消毒，采用 0.5% （ 5000mg/L)过 氧乙酸冲洗作用 10min,用无菌方法取出后采用无菌水 冲洗干净，无菌巾擦干后使用。 2.擦拭法： 大件物品或其他不能浸泡的物品用擦拭法消 毒，消毒使用浓度和作用时间同浸泡法。 10.过氧化物类 （二） 过氧乙酸 消毒方法： 3.喷洒法 ：用于环境消毒时，用 0.2% 0.4% （ 2000mg/L 4000mg/L)过 氧乙酸溶液 喷 洒，作用 时间 30min 60min 。 4.喷雾法 ：使用 15%过氧乙酸 （ 7mL/m3)加热蒸发，相对 湿度 60% 80% ，室温熏蒸 2h。 注意事项： a.稀释液应现用现配，使用时限 24h。 b.使用前应测定有效含量，原液浓度低于 12% 不应使用。 c.本品有很强的腐蚀性，及使用符合要求的水冲洗干净。 d.空气熏蒸消毒时，室内不应有人。 10.过氧化物类 （三） 过氧化氢 适用范围： 适用于外科伤口、皮肤黏膜冲洗消毒、室内空气的消毒。 消毒方法： 1.伤口、皮肤黏膜消毒：采用 3% （ 30g/L)过氧化氢冲洗、 擦拭。作用 3min 5min 。 2.室内空气消毒：使用气溶胶喷雾器，采用 3% （ 30g/L) 过 氧化 氢 溶液按照 20mL/m3 30mL/m3的用量 喷雾 消毒， 作用 时间 60min 。 注意事 项 ： a.过 氧化 氢应 避光、避 热 。室温下 储 存。 b.过 氧化 氢对 金属有腐 蚀 性， 对织 物有漂白作用。 c. 谨 防 溅 入眼内或皮肤粘膜上， 溅 上即使用清水冲洗。 10.过氧化物类 （四） 二氧化氯 适用范围： 适用于物品、环境、物体表面及空气的消毒。 消毒方法： 1. 浸泡法：将待消毒物品没于装有二 氧化氯溶液 的容器中、加盖。对细菌繁殖体污染物品的消 毒，用 100mg/L 250mg/L二 氧化氯溶液浸泡 30min；对肝炎病毒和结核分枝杆菌污染物品 的消毒，用 500mg/L二 氧化氯溶液浸泡 30min； 10.过氧化物类 （四）二氧化氯 1. 2. 擦拭法： 大件物品或其他不能用浸泡法 消毒 2. 的物品用擦拭法消毒， 消毒使用的浓度和 作用 3. 的时间同浸泡法。 10.过氧化物类 （四）二氧化氯 3. 喷洒法：对细菌繁殖体污染的表面，用 500mg/L 二氧化氯均匀喷洒， 作用 时间 30min；对肝炎 病 毒和结核杆菌污染的表面， 用 1000mg/L二氧化 氯均匀喷洒， 作用 时间 60min 。 4. 室内空气消毒：使用气溶胶 喷雾 器，采用 500mg/L二氧化氯溶液按照 20mL/m3 30mL/m3 的用量 喷雾 消毒，作用 时间 30min 60min ;或 采用二氧化氯（ 10mL/m3 20mL/m3）加热蒸 发或加激活剂熏蒸消毒。 10.过氧化物类 （四） 二氧化氯 消毒方法： 注意事项： a. 稀释液应现用现配，使用时限 24h。 b. 对碳钢、铝有中度腐蚀性，对铜、不锈钢有轻 度腐蚀性。金属制品经二氧化氯消毒后，应及 时用符合要求得水冲洗干净、干燥。 c. 置于干燥、通风处保存。 11.含氯消毒剂适用范围： 适用于物品、物体表面、分泌物、排泄物等的消毒。 使用方法： 1. 浸泡法： 将待消毒的物品浸没于装有含氯消毒剂溶 液的 容器中，加盖。对细菌繁殖体污染物品的消毒，用含有 效氯 500mg/L的消毒液浸泡 10min，对经血传播病原 1. 体、分支杆菌、细菌芽孢污染物品的消毒，用含 有效氯 2. 2000mg/L 5000mg/L消毒液，浸泡 30min 。 2. 擦拭法： 大件物品或其他不能用浸泡法消毒的物品用 擦 拭法消毒，消毒所用的浓度和作用时间同浸泡法 。 11.含氯消毒剂 （一） 使用方法： 3. 喷洒法：对一般污染的物品表面，用含有效氯 400mg/L 700mg/L的消毒液均匀喷洒，作用 10min 30min； 对 经血传播病原体、结核杆菌等污染表面的消毒，用含有 效氯 2000mg/L 的消毒液均匀 喷 洒，作用 60min ，喷 洒后有强烈的刺激性气味，人员应离开现场。 4. 干粉消毒法：对分泌物、排泄物的消毒，用含氯消毒剂 干粉加入排泄物中，使有效氯含量达到 10000mg/L，搅 拌后作用 2h；对医院污水的消毒，用干粉按有效氯 50mg/L用量加入污水中，搅拌均匀，作用 2h后排放 。 11.含氯消毒剂 （二）注意事项： 1. a. 粉剂应于阴凉处避光、防潮、密封保存。水 剂 2. 应于阴凉处避光、密闭保存。使用液应现用现 3. 配，使用时限 24h。 b. 未加防锈剂的含氯消毒剂对金属有腐蚀性，不 应用于金属器械的消毒。加防锈剂的含氯消毒 剂对金属器械消毒后，应用无菌蒸馏水冲洗干 净，干燥后使用。 1. c. 对织物有腐蚀和漂白作用，不应用于有色织 物 2. 的消毒。 12.醇类消毒剂 （一） （含乙醇、异丙醇、正丙醇，或两种成分的复方制剂 ） 适用范围： 适用于手、皮肤、物体表面及诊疗器具的消毒。 使用方法： 1.手消毒：使用符合国家规定的含醇类手消毒剂，手 消毒方法遵循 WS/T 313 的要求。 2.皮肤消毒：使用 70% 80% （体积比）乙醇溶液擦 拭皮肤 2遍，作用 3min。 12.醇类消毒剂 （二） 3.物体表面消毒：使用 70% 80% （体积比）乙醇溶 液擦拭物体表面 2遍，作用 3min。 4.医疗器具消毒：将待消毒的物品浸没于装有 70% 80% （体积比）乙醇溶液中消毒 30min，加盖；或 进行表面擦拭消毒。 注意事项： a.醇类易燃，不应有明火。 b.不用于被血、脓、粪便等有机物严重污染表面的消毒 。 c.用后应盖紧，密闭，置于阴凉处保存。 d.醇类过敏者慎用。 13.含碘类消毒剂 （一）一 .碘 伏 适用范围： 适用于手、皮肤、黏膜及伤口的消毒。 消毒方法： 1. 擦拭法： 用浸有碘伏消毒液原液的无菌棉球或其他 替代 物品擦拭被消毒部位。皮肤消毒用碘伏原液局部擦拭 2 遍，作用时间遵循产品的使用说明。 2. 冲洗法： 用含有效碘 500mg/L