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文档简介

Chromatography 中南民族大学 色谱法 内容 原理和基础 气相色谱2 1 液相色谱3 简 介 第一 节 一、色 谱 法的 发 展史 1. 最早 创 立色 谱 法的是俄国植物学家 Tswett 1906年他 为 了分离植物色素,将植物 绿 叶 的石油 醚 提取液倒入装有碳酸 钙 粉末的玻 璃管中,并用石油 醚 自上而下淋洗,由于不 同的色素在碳酸 钙颗 粒表面的吸附力不同 ,随着淋洗的 进 行,不同色素向下移 动 的 速度不同,形成一圈圈不同 颜 色的色 带 , 使各色素成分得到了分离。他将 这 种分离方 法命名 为 色 谱 法( chromatography)。 一、色 谱 法的 发 展史 2. 在 Tswett提出色 谱 概念后的 20多年里没有人关注 这 一 伟 大的 发 明。 直到 1931年德国的 Kuhn和 Lederer才重复了 Tswett的某些 实验 ,用 氧化 铝 和碳酸 钙 分离了 -, -,和 -胡 萝 卜素,此后用 这 种方法分 离了 60多种 这类 色素。 3. Martin和 Synge在 1940年提出液液分配色 谱 法( Liquid Liquid Partition Chromatography),即固定相是吸附在硅胶上的水,流 动 相是某种有机溶 剂 。 1941年 Martin和 Syngee提出用气体代替液体作 流 动 相的可能性, 11年之后 James和 Martin发 表了从理 论 到 实 践比 较 完整的气液色 谱 方法( Gas Liquid Chromatography),因而 获 得了 1952年的 诺贝 尔 化学 奖 。 4. 1957年 Golay开 创 了开管柱气相色 谱 法( Open Tubular Column Chromatography) 5. 1956年 Van Deemter等在前人研究的基 础 上 发 展了描述色 谱过 程的 速率理 论 一、色 谱 法的 发 展史 6. 1944年 Consden等就 发 展了 纸 色 谱 , 1949年 Macllean 等在氧化 铝 中加入淀粉粘合 剂 制作薄 层 板使薄 层 色 谱 法 ( TLC )得以 实际应 用; 7. 60年代末把高 压泵 和化学 键 合固定相用于液相色 谱 ,出 现 了高效液相色 谱 ( HPLC); 8. 80年代初毛 细 管超 临 界流体色 谱 ( SFC)得到 发 展,但 在 90年代后未得到 较 广泛的 应 用; 9. 在 80年代初由 Jorgenson等集前人 经验 而 发 展起来的毛 细 管 电 泳 (CE),在 90年代得到广泛的 发 展和 应 用。同 时 集 HPLC和 CZE优 点的毛 细 管 电 色 谱 在 90年代后期受到 重 视 。 色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作 年代 获奖学科 获奖研究工作 1937 化学 类胡萝卜素化学,维生素 A和 B 1938 化学 类胡萝卜素化学 1939 化学 聚甲烯和高萜烯化学 1950 生理学、医学 性激素化学及其分离、肾皮素化学及其分离 1951 化学 超铀元素的发现 1955 化学 脑下腺激素的研究和第一次合成聚肽激素 1958 化学 胰岛素的结构 1961 化学 光合作用时发生的化学反应的确认 1970 生理学、医学 关于神经元触处迁移物质的研究 1970 化学 糖核苷酸的发现及其在生物合成碳水化合物中的作用 1972 化学 核糖核酸化学酶结构的研究 1972 生理学、医学 抗体结构的研究 色 谱 法在分析化学中的地位和作用 年代 1945 1955 1965 1975 1985 1995 仪 器分析方法 光 谱 法 14.3 26.3 28.7 29.7 30.0 30 色 谱 法 1.4 2.3 12.0 26.7 35.0 36 电 化学法 4.4 6.2 10.2 13.5 15.0 16 放射分析法 1.0 2.0 6.5 13.8 17.0 18 经 典分析法 比色法 23.0 20.0 15.2 9.2 2 滴定法 25.6 22.0 12.6 5.1 1 重量法 8.5 6.5 3.6 2.0 ? 不同年代各种分析方法所占的比例 二、色 谱 法的特点 色 谱 法是以其高超的分离能力 为 特点,它的分离效率 远 远 高于其它分离技 术 如蒸 馏 、萃取、离心等方法。 优 点 分离效率高:可以分离复 杂 混合物,有机同系物、异构体、手性 异构体。 灵敏度高:可以 检测 出 g.g-1(10-6)级 甚至 ng.g-1(10-9)级 的物 质 量 。 分析速度快:一般在几分 钟 或几十分 钟 内可以完成一个 试样 的分 析。 应 用范 围 广: 气相色 谱 :沸点低于 400 的各种有机或无机 试样 的分析。 液相色 谱 :高沸点、 热 不 稳 定、生物 试样 的分离分析。 u不足之 处 : 被分离 组 分的定性 较为 困 难 。 三、色 谱 法的分 类 三、色 谱 法分 类 按流 动 相和固定相的状 态 分 类 三、色 谱 法分 类 按分离机理分 类 吸附色吸附色 谱谱 法法 :吸附能力:吸附能力 强强 弱弱 分配色分配色 谱谱 法法 :溶解度不同:溶解度不同 离子交离子交 换换 色色 谱谱 法法 :离子交:离子交 换剂换剂 (固定相)上的(固定相)上的 亲亲 和力大小不同和力大小不同 尺寸排阻色尺寸排阻色 谱谱 法法 :多孔固定相中的:多孔固定相中的 选择选择 渗透渗透 亲亲 和色和色 谱谱 法法 :与固定相(固定化分子)的高:与固定相(固定化分子)的高 专专 属性属性 亲亲 和力和力 三、色 谱 法分 类 按固定相的外形分 类 柱色柱色 谱谱 : 固定相装于柱内固定相装于柱内 平板色平板色 谱谱 : 固定相呈平板状固定相呈平板状 薄薄 层层 色色 谱谱 纸纸 色色 谱谱 色 谱 流出曲 线 及 术语 第二 节 色 谱 的信号和曲 线 色 谱 是一种分离技 术 色 谱 的信号都是外加的 检测仪 器 给 出的 信号是和 组 分的 浓 度成正比 色 谱流出曲线及有关 术语 一流出曲线和色谱峰 如果如果 进样进样 量很小,量很小, 浓浓 度很低,在吸附等温度很低,在吸附等温 线线 的的 线线 性范性范 围围 内,色内,色 谱谱 峰如果峰如果 对对 称,可用称,可用 Gauss正正 态态 分布函数表示分布函数表示 : 式中: C 不同 时间 t时 某物 质 的 浓 度, C0 进样浓 度, tr 保留 时间 , 标 准偏差。 二、二、 基基 线线 baseline 是柱中 仅 有流 动 相通 过时 , 检测 器响 应讯 号的 记录 值 。 稳 定 的基 线应该 是一条水平直 线 . 三、峰高 peak height 色 谱 峰 顶 点与基 线 之 间 的垂直距离,以 h 表示。 四、保留四、保留 值值 retention value 1死 时间 dead time, tM 不被固定相吸附或溶解的物 质进 入色 谱 柱时 ,从 进样 到出 现 峰极大 值 所需的 时间 称 为 死 时间 。因 为这 种物 质 不被固定相吸附 或溶解,故其流 动 速度将与流 动 相的流 动 速度相近。 试样 从 进样 开始到柱后出 现 峰极大 点 时 所 经历 的 时间 ,称 为 保留 时间 。它 相 应 于 样 品到达柱末端的 检测 器所需的 时间 2保留 时间 retention time, tR 3 调调 整保留整保留 时间时间 tR 某某 组组 份的保留份的保留 时间时间 扣除死扣除死 时间时间 后称后称 为该为该 组组 份的份的 调调 整保留整保留 时间时间 ,即,即 tR = tR-tM 由于 组 份在色 谱 柱中的保留 时间 tR包含了 组 份 随流 动 相通 过 柱子所需的 时间 和 组 份在固定相中滞 留所需的 时间 ,所以 tR实际 上是 组 份在固定相中 停留的 总时间 保留 时间 可用 时间单 位(如 s)或 距离 单 位(如 cm)表示。 保留 时间 是色 谱 法定性的基本依据,但同一 组 份 的保留 时间 常受到流 动 相流速的影响,因此色 谱 工 作者有 时 用保留体 积 等参数 进 行定性 检 定 4死体死体 积积 VM 指色 谱 柱在填充后,柱管内固定相 颗 粒 间 所剩留的空 间 、色 谱仪 中管路和 连 接 头间 的空 间 以及 检测 器的空 间 的 总 和当 后两 项 很小而可忽略不 计时 ,死体 积 可由 死 时间 与流 动 相体 积 流速 F0( L min) 计 算: VM = tMF0 5保留体 积 VR 指从 进样 开始到被 测组 份在柱后出 现浓 度极大点 时 所通 过 的流 动 相体 积 。保留体 积 与保留 时间 t。的关系如下 : 6 调 整保留体 积 VR 某 组 份的保留体 积 扣除死体 积 后,称 该组 份的 调 整保留体 积 ,即 VR= VR- VM VR = tRF0 7相 对 保留 值 21 或 选择 因子 由于相 对 保留 值 只与柱温及固定相的性 质 有关, 而与柱径、柱 长 、填充情况及流 动 相流速无关,因此 ,它是色 谱 法中,特 别 是气相色 谱 法中,广泛使用的 定性数据 必 须 注意,相 对 保留 值绝对 不是两个 组 份保留 时 间 或保留体 积 之比 . 某 组 份 2的 调 整保留 值 与 组 份 1的 调 整保留 值 之比 ,称 为 相 对 保留 值 : 色 谱 峰的区域 宽 度是 组 份在色 谱 柱中 谱带扩 张 的函数,它反映了色 谱 操作条件的 动 力学因素 度量色 谱 峰区域 宽 度通常有三种方法: 1. 标 准偏差 即 0.607倍峰高 处 色 谱 峰 宽 的 一半 2. 半峰 宽 W1/2 即峰高一半 处对应 的峰 宽 ,它 与 标 准偏差 的关系是: W1/2 = 2.354 五、区域五、区域 宽宽 度度 即色 谱 峰两 侧 拐点上的切 线 在基 线 上的截距, 如 图 中 IJ的距离它与 标 准偏差的 关系是 : 3.基基 线宽线宽 度度 W 从色 谱 流出曲 线 上,得到信息是: ( l)根据色 谱 峰的个数,可以判断 样 品中所合 组 份的最少个数 ( 2)根据色 谱 峰的保留 值 (或位置),可以 进 行定性分析 (3) 根据色 谱 峰下的面 积 或峰高,可以 进 行定 量分析 ( 4)色 谱 峰的保留 值 及其区域 宽 度,是 评 价 色 谱 柱分离效能的依据 ( 5)色 谱 峰两峰 间 的距离,是 评 价固定相 (和 流 动 相 )选择 是否合适的依据 色 谱 法的基本原理 第三 节 基本原理 色 谱 分析的目的是将 样 品中各 组 分彼此分离, 组 分要达到完全分离,两峰 间 的距离必 须 足 够远 , 两峰 间 的距离是由 组 分在两相 间 的分配系数决定 的,即与色 谱过 程的 热 力学性 质 有关。 但是两峰 间虽 有一定距离,如果每个峰都很 宽 , 以致彼此重叠, 还 是不能分开。 这 些峰的 宽 或窄 是由 组 分在色 谱 柱中 传质 和 扩 散行 为 决定的,即 与色 谱过 程的 动 力学性 质 有关。 一、分配系数 K和 分配比 k 1分配系数 K 如前所述,分配色 谱 的分离是基于 样 品 组 分 在固定相和流 动 相之 间 反复多次地分配 过 程,而吸 附色 谱 的分离是基于反复多次地 吸附 -脱附 过 程。 这 种分离 过 程 经 常用 样 品分子在两相 间 的分配来 描述,而描述 这 种分配的参数称 为 分配系数 见 它是 指在一定温度和 压 力下, 组 分在固定相和流 动 相之 间 分配达平衡 时 的 浓 度之比 值 ,即 2.分配比 k 分配比又称 容量因子 ,它是指在一定温 度和 压 力下, 组 分在两相 间 分配达平衡 时 ,分 配在固定相和流 动 相中的 质 量比。即 k值 越大, 说 明 组 分在固定相中的量越多, 相当于柱的容量大,因此又称 分配容量 或 容量因 子 。它是衡量色 谱 柱 对 被分离 组 分保留能力的 重要参数。 k值 也决定于 组 分及固定相 热 力学性 质 。它不 仅 随柱温、柱 压变 化而 变 化,而且 还 与流 动 相及固定相的体 积 有关。 式中 CS, Cm分 别为组 分在固定相和流 动 相的 浓 度; Vm 为 柱中流 动 相的体 积 ,近似等于死体 积 。 Vs为 柱中固定相的 体 积 ,在各种不同的 类 型的色 谱 中有不同的含 义 。例如:在 分配色 谱 中, Vs表示固定液的体 积 ;在尺寸排阻色 谱 中, 则 表示固定相的孔体 积 。 3. 分配系数 K与分配比 k的关系 其中 称 为 相比率,它是反映各种色 谱 柱型特点 的又一个参数。例如, 对 填充柱,其 值 一般 为 6 35; 对 毛 细 管柱,其 值为 60 600。 4分配系数分配系数 K及分配比及分配比 k与与 选择选择 因子因子 a的关系的关系 根据 对 以上公式 处 理, 对 A、 B两 组 分的 选择 因子,可用下式表示 通 过选择 因子 a把 实验测 量 值 k与 热 力学性 质 的分配系数 K直接 联 系起来, a对 固定相的 选择 具 有 实际 意 义 。如果两 组 分的 K或 k值 相等, 则 a =1 ,两个 组 分的色 谱 峰必将重合, 说 明分不开。两 组 分的 K或 k值 相差越大, 则 分离得越好。因此两 组 分具有不同的分配系数是色 谱 分离的先决条件 。 最早由最早由 Martin等人提出塔板理等人提出塔板理 论论 ,把色,把色 谱谱 柱比作一个精柱比作一个精 馏馏 塔,沿用精塔,沿用精 馏馏 塔中塔板的概塔中塔板的概 念来描述念来描述 组组 分在两相分在两相 间间 的分配行的分配行 为为 ,同,同 时时 引引 人理人理 论论 塔板数作塔板数作 为为 衡量柱效率的指衡量柱效率的指 标标 。 二 塔板理 论 ( plate theory) L: 色 谱 柱 长 度 H: 每一 块 塔板的高度 n: 理 论 塔板数 ( i)在柱内一小段 长 度 H内, 组 分可以在两相 间 迅速达 到平衡。 这 一小段柱 长 称 为 理 论 塔板高度 H。 ( ii)以气相色 谱为 例, 载 气 进 入色 谱 柱不是 连续进 行 的,而是脉 动 式,每次 进 气 为 一个塔板体 积 ( Vm)。 ( iii)所有 组 分开始 时 存在于第 0号塔板上,而且 试样 沿 轴 ( 纵 )向 扩 散可忽略。 ( iv)分配系数在所有塔板上是常数,与 组 分在某一塔 板上的量无关。 塔板理 论 根据上述假定,在色 谱 分离 过 程中, 该组 分的分布可 计 算如下: 开始 时 ,若有 单 位 质 量,即 m=1(例 1mg或 1g)的 该组 分加到第 0号塔板上,分配平衡后,由于 k=1,即 ns=nm故 nm=ns=0.5。当一个板体 积 ( lV)的 载 气以脉 动 形式 进 入 0 号板 时 ,就将气相中含有 nm部分 组 分的 载 气 顶 到 1号板上, 此 时 0号板液相(或固相)中 ns部分 组 分及 1号板气相中的 nm 部分 组 分,将各自在两相 间 重新分配。故 0号板上所含 组 分 总 量 为 0.5,其中气液(或气固)两相各 为 0.25而 1号板上所含 总 量同 样为 0.5气液(或气固)相亦各 为 0.25。以后每当一 个新的板体 积载 气以脉 动 式 进 入色 谱 柱 时 ,上述 过 程就重复 一次 (见 下表 )。 按上述分配 过 程 ,随着 脉 动进 入柱中板体 积载 气的 增加, 组 分分布在柱内任一板上的 总 量(气液两相中的 总质 量) ,由塔板理 论 可建流出曲 线 方程 : m为组 分 质 量, VR为 保留体 积 , n为 理 论 塔板数 。 当流 动 相体 积 V=VR 时 , C值 最大,即 理 论 塔板数与色 谱 参数之 间 的关系 为 : tR应 与 W采取一 样 的 单 位,如 时间 或距离 。 从上两式可以看出,色 谱 峰 W越小, n就越 大,而 H就越小,柱效能越高。因此, n和 H是描述 柱效能的指 标 。 通常填充色 谱 柱的 n 103, H 1mm。而毛 细 管柱 n=10510 6, H 0.5mm 由于 死 时间 tM包括在 tR中 ,而 实际 的 tM不参与 柱内分配 ,所 计 算的 n值 尽大 ,H很小 ,但与 实际 柱效 能相差甚 远 。所以 ,提出把 tM扣除 ,采用有效理 论 塔 板数 neff和有效塔板高 Heff评 价柱效能。 塔板塔板 理理 论仅仅论仅仅 是一种是一种 经验经验 理理 论论 ,它能,它能 够够 在在 热热 力学的力学的 观观 点上定量点上定量 说说 明了流出曲明了流出曲 线线 的形状以及提出的形状以及提出 了了 评评 价色价色 谱谱 柱效的参数。但是,它缺乏柱效的参数。但是,它缺乏 动动 力学上方力学上方 面的考面的考 虑虑 。 塔板理论的特点和不足 (1)当色 谱 柱 长 度一定 时 ,塔板数 n 越大 (塔板高度 H 越小 ),被 测组 分在柱内被分配的次数越多,柱效能 则 越高, 所得色 谱 峰越窄。 (2)不同物 质 在同一色 谱 柱上的分配系数不同,用有效塔 板数和有效塔板高度作 为 衡量柱效能的指 标时 , 应 指明 测 定 物 质 。 (3)柱效不能表示被分离 组 分的 实际 分离效果,当两 组 分的分配系数 K相同 时 ,无 论该 色 谱 柱的塔板数多大,都无 法分离。 (4)塔板理 论 无法解 释 同一色 谱 柱在不同的 载 气流速下 柱效不同的 实验结 果,也无法指出影响柱效的因素及提高柱 效的途径。 三、速率理 论 van Deemter方程 H:理论塔板高度, u:载气的线速度 (cm/s) A涡 流 扩 散 项 dp:固定相的平均 颗 粒直径 , :固定相的填充不均匀因子 固定相 颗 粒越小 dp,填充的越均匀, A, H,柱效 n。 表 现 在 涡 流 扩 散所引起的色 谱 峰 变宽现 象减 轻 ,色 谱 峰 较 窄。 速率理 论 B/u 分子 扩 散 项 浓 度梯度造成 g是弯曲因子,反映固定相 颗 粒的几何形状 对 自由分子 扩 散的阻碍情况, Dg为组 分在流 动 相中的 扩 散系数 对 于液相色 谱 , 组 分在流 动 相中 纵 向 扩 散可以忽略。 Cu 传质 阻力 项 包括气相 传质 阻力 项 和液相 传质 阻力 项 C=Cg+Cl 对 于液相色 谱 ,影响柱效的主要因素是 传质 阻力 项 速率理 论 的要点 (1) 组 分分子在柱内运行的多路径与 涡 流 扩 散、 浓 度梯度所造 成的分子 扩 散及 传质 阻力使气液两相 间 的分配平衡不能瞬 间 达 到等因素是造成色 谱 峰 扩 展柱效下降的主要原因。 (2) 通 过选择 适当的固定相粒度、 载 气种 类 、液膜厚度及 载 气 流速可提高柱效。 (3) 速率理 论为 色 谱 分离和操作条件 选择 提供了理 论 指 导 。 阐 明了流速和柱温 对 柱效及分离的影响。 (4) 各种因素相互制 约 ,如 载 气流速增大,分子 扩 散 项 的影响 减小,使柱效提高,但同 时传质 阻力 项 的影响增大,又使柱效 下降;柱温升高,有利于 传质 ,但又加 剧 了分子 扩 散的影响, 选择 最佳条件,才能使柱效达到最高。 分离度( resolution) 分离度又叫分辨率,用 R表 示。它定 义为 相 邻 两 组 分色 谱 峰保留 值 之差与两 组 分色 谱 峰底 宽总 和一半的比 值 。 右 图 中: a 选择 性和柱效都很差 b 选择 性好,但柱效差 c 选择 性好,柱效也高 分离度的意 义 R值 越大,表明相 邻 两 组 分分离越好。一 般 说 ,当 R 1时 ,两 峰有部分重叠; 当 R 1时 ,分离程度 可达 98; 当 R 1.5时 ,分离程 度可达 99 7。通 常用 R=1.5作 为 相 邻 两 组 分已完全分离的 标 志。 基本色 谱 分离方程式 对 于 难 分离的物 质对 ,由于分配比 k差 别 小,可以假 设 根据 可得 在 实际应 用 时 ,用有效塔板数, 分离度和柱效的关系 对 于一定理 论 塔板数的柱子,分离度的平 方和柱 长 成正比。即 虽说 用 较长 的柱可以提高分离度,但延 长 了分析 时间 。因此提高分离度的好方法是 制 备 出一根性能 优 良的柱子,通 过 降低板 高,以提高分离度 分离度与 选择 因子的关系 由基本色 谱 方程式判断,当 a =1时 , R=0 , 这时 ,无 论 怎 样 提高柱效也无法使两 组 分分离。 显 然, a大, 选择 性好。研究 证 明, a的微小 变 化,就能引起分离度的 显 著 变 化。一般通 过 改 变 固定相和流 动 相的 性 质 和 组 成或降低柱温,可有效增大 a值 。 分离度和容量因子 容量因子 Q 当 k10时 , R基本上 变 化不 大。一般取 k在 2-10最宜。 对 于 GC,提高温度,改 变 k 值 ,可以改 进 分离度。 对 于 LC,改 变 流 动 相的 组 成 ,就能有效控制 k值 。 例 题 1 在一定条件下,两个 组 分的 调 整保留 时间 分 别为 85秒和 100秒,要达到完全分离,即 R=1.5。 计 算需要多少 块 有 效塔板。若填充柱的塔板高度 为 0.1 cm,柱 长 是多少? = 100 / 85 = 1.18 n有效 = 16R2 / ( 1) 2 = 161.52 (1.18 / 0.18 ) 2 = 1547( 块 ) L有效 = n有效 H有效 = 15470.1 = 155 cm 即柱 长为 1.55米 时 , 两 组 分可以得到完全分离。 例 题 2 根据 van Deemter方程,推 导 出 A、 B、 C常数表示的最佳 线 速 uopt和最小塔板高 Hmin。 对 上式微分可得: 最佳 线 速 处 : 所以 最小塔板高 为 例 题 3 理 论 塔板数增加一倍,分离度如何 变 化?若分离度要提高 一倍,柱 长 要如何 变 化?分析 时间 将如何 变 化? 所以理 论 塔板数增加一倍,分离度将 变为 1.4倍。 分离度要提高一倍,柱 长 要增加 3倍 同 样 分离 时间 也要提高 3倍。 例 题 4 在一个 3 m长 的色 谱 柱上,分离一个 样 品的 结 果如下: 组 分 1的保留 时间为 14 min, 组 分 2的保留 时间为 17 min(死 时间 和两 组 份的峰底 宽 都 为 1.0 min)。求: (1) 两 组 分的 调 整保留 时间 tr1和 tr2; (2) 用 组 分 2求色 谱 柱的有效塔板数和有效塔板高度; (3) 两 组 分的容量因子 k1 和 k2; (4) 相 对 保留 值 和分离度; (5) 若使两 组 分的分离度 为 1.5, 问 所需要的最短柱 长 是多少? (1) tr1=13.0min; tr2=16.0min (2) neff=16( )2=4096块 ; Heff= =0.73mm (3) k1=13; k1=16 (4) = =1.2; (5) 对 速率理 论 的修正 1961年 Giddings对 Van Deemter方程做了修正 Huber于 1967年又 进 一步把 Giddings方程做了修改 : 1976 年 Horvath 和 Lin 把 Huber 的速率理 论 方程修正 为 : 色 谱 法的定性定量分析 第四 节 一、 色 谱 定性 鉴 定方法 1.利用纯物质定性的方法 利用保留 值 定性 : 通 过对 比 试样 中具有与 纯 物 质 相同 保留 值 的色 谱 峰,来确定 试样 中是否含有 该 物 质 及在色 谱 图 中的位置。不适用于不同 仪 器上 获 得的数据之 间 的 对 比 。 利用加入法定性 : 将 纯 物 质 加入到 试样 中, 观 察各 组 分色 谱 峰的相 对变 化。 2.利用文献保留值定性 利用相 对 保留 值 r21定性 相 对 保留 值 r21仅 与柱温和固定液性 质 有关。 在色 谱 手册中都列有各种物 质 在不同固定液上的 保留数据,可以用来 进 行定性 鉴 定。 3.保留指数 又称 Kovats指数 () ,是一种重 现 性 较 好的定性参数 。 测 定 方法: 将正构 烷烃 作 为标 准, 规 定其保留指数 为 分子中碳原子个数乘以 100(如正己 烷 的保留指数 为 600)。 其它物 质 的保留指数( IX) 是通 过选 定两个相 邻 的正构 烷烃 ,其分 别 具有 Z和 Z 1个碳原子。被 测 物 质 X的 调 整保留 时间应 在相 邻 两个正 构 烷烃 的 调 整保留 值 之 间 如 图 所示 : 保留指数 计 算方法 4.与其他分析仪器联用的定性方法 小型化的台式色 质谱联 用 仪 ( GC-MS; LC-MS) 色 谱 -红 外光 谱仪联 用 仪 ; 组 分的 结 构 鉴 定 Sample Sample 5890 1.0 DEG/MI N HEWLETT PACKARD HEWLET TPACKAR D 5972A Mass Selectiv e Detecto r D C BA A B C D Gas Chromatograph (GC) Mass Spectrometer (MS) Separation Identification B A C D 二、 色 谱 定量分析方法 1. 峰面积的测量 ( 1)峰高 ( h) 乘半峰 宽 ( Y 1/2) 法: 近似将色 谱 峰当作 等腰三角形。此法算出的面 积 是 实际 峰面 积 的 0.94倍: A = 1.064 hY1/2 ( 2)峰高乘平均峰 宽 法: 当峰形不 对 称 时 ,可在峰高 0.15 和 0.85处 分 别测 定峰 宽 ,由下式 计 算峰面 积 : A = h( Y 0.15 + Y 0.85 ) / 2 ( 3)峰高乘保留 时间 法: 在一定操作条件下,同系物的半 峰 宽 与保留 时间 成正比, 对 于 难 于 测 量半峰 宽 的窄峰、重叠 峰(未完全重叠),可用此法 测 定峰面 积 : A = hb

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