201306017-枇杷叶的研究进展1

枇 杷 叶 的 研 究 进 展 柯仲成 朱志平 徐志远 胡善庆 黄竹胜 方超 (黄山学院化学化工学院制药工程教研室 黄山 245041) 摘要:本文介绍枇杷叶的研究进展,综述了枇杷叶的化学成分以及药理活性的研究.目前已经从枇杷 叶中分离得到挥发油、三萜类、倍半萜类、黄酮类等多种化合物，其生理活性具有抗炎止咳、降 血糖、抗肿瘤、抗氧化和保肝等作用。 关键词：枇杷叶，化学成分，药理作用，提取工艺。 The research progress of loquat leaf KE Zhong-cheng ZHU Zhi-ping XU Zhi-yuan HU Shan-qing HUANG Zhu-Sheng FANG Chao （College of chemistry and chemical engineering，Huangshan University，Huangshan 245041，China） Abstract: This paper introduces the research progress of loquat leaf, loquat leaf, the paper summarized the research on chemical constituents and pharmacological activities. Now has been isolated from loquat leaf volatile oils, triterpene, sesquiterpenoids, flavonoids and other compounds, its physiological activity has anti-inflammatory cough, fall blood sugar, antitumor, antioxidation, and protecting liver, etc. Key words: Loquat leaf,chemical composition, pharmacological action,extraction technology. 枇杷叶为蔷薇科植物枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl. 的干燥叶。在我国分布广泛，主 要分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、四川、云南等地。枇杷叶是一味常用中药。味 苦，微辛，性微寒。枇杷叶归肺、胃经、清肺止咳、降逆止呕，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、 胃热呕逆、烦热口渴。目前已经从枇杷叶中分离到挥发油、三萜类、倍半萜类、多酚、黄酮类等 成分，其药理作用主要集中于在三萜酸的抗炎止咳、降血糖、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等方面。 现对近年枇杷叶的化学成分、药理作用和质量控制的研究，进行综述。 1枇杷叶化学成分 作者介绍：柯仲成（1981） ，男，安徽歙县人，现为黄山学院讲师，硕士学位，主要从事中药新剂型的研究。 2 基金项目：国家级大学生创新训练计划项目(201210375034) 1.1 挥发油 枇杷叶挥发油的主要成分为橙花叔醇和金合欢醇，还有醇蒎烯、莰烯、月桂烯，对聚伞花素 芳樟醇及其氧化物等。王义潮，巩江等采用水蒸气蒸馏法得到挥发油 ,运用 GC-MS 技术,结合计 算机检索对其具体化学成分进行分析和鉴定,用峰面积归一化法计算各个组分的相对含量。结果， 已经鉴定组分共 47 个,占流出组分总量的 86.33%。含量较高的组分有 - 倍半水芹烯(4.14% )、异 桉叶油(5.07% )、环己酮(5.25% )、顺-3-己烯-1- 醇(5.30% )、香叶烯 D(5.35% )、10,10-二甲基-2,6 二(亚甲基 )-双环 7.2.0十一烷(7.95% )、水杨酸甲酯(11.72% )等。得出了 GC-MS 法分析、鉴定枇 杷叶挥发油化学成分,技术简单易行,操作简便,为枇杷叶的深入开发提供了基础科学信息。倪敏， 凌雪峰等采用水蒸气蒸馏法提取枇杷果实中的挥发油，利用气相色谱- 质谱联用技术对挥发油化 学成分进行分析，从挥发油中鉴定出 25 种化合物，占挥发油总量的 95.41%，挥发油以酸、酯、 醛为主，其中含量较高的成分为棕榈酸、油酸、亚油酸、糠醛、油酸乙酯、十八碳-9，12- 二烯酸 乙酯、巴西酸亚乙酯、棕榈酸乙酯、7-十八碳烯酸甲酯、十七烷、亚油酸甲酯。 1.2 三萜酸类 枇杷叶中的三萜酸类化合物有十几种，是枇杷叶的主要有效成分。以乌苏烷型和齐墩果烷型 五环三萜酸类为多。鞠建华 2等从枇杷叶的正丁醇萃取物中分离得到 6 个三萜酸化合物，分别鉴 定为齐墩果酸，2 羟基齐墩果酸，乌苏酸，2 羟基乌苏酸，坡模酸和蔷薇酸，其中坡模酸是首次 从该植物中分了得到的。吕寒等 3从枇杷叶中分离得到多个三萜酸类化合物，经鉴定分别为白桦 脂酸甲酯、2-羟基齐墩果酸甲酯、科罗索酸甲酯、科罗索酸、委陵菜酸、蔷薇酸等化学成分。 1.3 黄酮类化合物 枇杷叶中富含黄酮成分，黄酮类物质是色原烷或色原酮的衍生物，是以 -苯基苯并吡喃酮为 主体的一系列物质的总称，其主要类型有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、双黄酮和异黄酮。黄酮类化 合物苷元主要为多酚，糖苷由 1-3 单糖组成，常见的为葡萄糖、鼠李糖、半乳、阿拉伯糖，连接 位置多为 3 位。此外，还发现有乙酰化黄酮苷存在。川原信夫等 4用二氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇 依次提取枇杷叶，乙酸乙酯组分经各种色谱分离、纯化，确定了 3 种化合物的结构，分别为山奈 酚-3OL-（2，4- 二 E P - 香豆酰）鼠李糖苷、山奈酚 3 O L (2，4- 二 Z P 香豆酰）鼠李糖苷、山奈酚 3 O L (2，4 二 E 阿魏酰）鼠李糖苷。酮 类化合物具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血脂等多种生物活性。其中，最主要的生物活性是黄 3 酮类化合物的抗氧化作用，即减少自由基的产生和消除自由基。 2. 药理作用 枇杷叶主要表现在总三萜酸的药理活性作用，其中乌苏酸、齐墩果酸的药理作用不断被发现 且研究逐渐深入，引起了广泛关注。 2.1 抗炎和止咳作用 王立为等 5采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、二氧化硫引起小鼠咳嗽和枸椽酸喷雾致豚鼠咳嗽模 型，观察枇杷叶不同分离部分及单体成分的抗炎及止咳作用，结果表明枇杷苷、乌索酸和总三萜 酸是枇杷叶抗炎、止咳作用的主要成分。 葛金芳 6用枇杷叶三萜酸（50、150、450）mg/kg 灌胃给药，可显著降低慢性支气管炎 （CB）大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数以及中性粒细胞和肺泡巨噬细胞比例的上升；可使 CB 大鼠支气管黏膜炎症浸润程度明显减轻；可使支气管内分泌物明显减少，支气管粘膜上皮细胞 脱落明显减轻，可抑制支气管粘膜上皮细胞增生，使支气管内径、通气量增大。显示枇杷叶三萜 酸对慢性支气管炎症有一定的改善作用，其对 CB 的治疗作用可能与其平衡细胞因子产生、调节 机体免疫功能有关。 谢强敏等 7用枸椽酸引咳法和辣椒素引咳法观察枇杷膏对豚鼠和小鼠的镇咳作用，用小鼠气 道酚红排泄发和蛙上腭纤毛运动法观察枇杷膏的祛痰作用。结果表明：枇杷膏 2.5g/kg 和 7.5g/kg 能明显减少枸椽酸引起的豚鼠咳嗽次数，6.6g/kg 和 13.2g/kg 能明显减少辣椒素引起的小鼠咳嗽次 数。枇杷膏 6.6g/kg 和 13.2g/kg 能明显增加小鼠气道酚红排泄量，增加蛙上腭纤毛运动，说明枇杷 膏具有良好的镇咳和祛痰作用。 钱萍萍等 8用枇杷叶水煮液与生理盐水对照，发现枇杷叶水煮液对浓氨水致咳小鼠有明显的 止咳、祛痰作用，还发现成年的枇杷叶比幼年的枇杷叶止咳、祛痰效果要明显，同时证实枇杷叶 在对止咳、祛痰作用上，灌胃要比腹腔注射效果好。 2.2 降血糖作用 De Tommasi 等 9研究发现从枇杷叶三萜酸可能通过刺激胰腺 B 细胞，增强胰岛素的释放水平， 从而对糖尿病小鼠有明显的降血糖作用，但是对四氧嘧啶性高血糖大鼠没有明显的降低血糖作用。 樱又康秀 10研究枇杷叶提取物与番薯并用的降糖作用，用小鼠做动物实验，结果表明枇杷叶 提取物与番薯并用能缩短至产生作用的时间，并可增强降血糖作用。 4 2.3 抗肿瘤作用 Hideyuki11等报道，从枇杷叶中分离得到的 megastigmane glycosides 和三萜酸类化合物对 佛波醋（TPA）诱导的 Raji 细胞 EB 病毒早期抗原表达及致癌剂亚硝酸盐具有明显的抑制作用。 Kobayashi12等以口腔癌细胞为对象进行了试验，结果枇杷叶中三萜酸类化合物具有较强的抗癌 活性，且无显著的细胞毒性，是决定体外抗氧化能力和抗肿瘤活性的主要因素。枇杷叶中的乌苏 酸具有广泛的生物学效应，其突出作用为抗肿瘤，它对多种致癌、促癌物有抵抗作用，且对多种 恶性肿瘤细胞有明显细胞毒作用和诱导分化作用及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重视， 有望成为低毒有效的新型抗癌药。 2.4 抗氧化作用 实验证明，枇杷叶提取物具有很强的抗氧化活性，可以明显减少 DPPH 自由基转化的作用， 对小鼠肝脏匀浆在 37下暴露于空气中，使用丙二酰硫脲引起的脂质过氧化反应有明显的抗氧化 作用。枇杷叶中的黄酮类化合物和绿源酸对采用二氯荧光素法引起的氧自由基有显著的抑制作用 13。 Kwon HJ 报道，批把叶中的甲基氯原酸是重要的抗氧化剂，可以抑制 Nfkappa B（核转录因 子）在氧化还原反应下被激活，从而减少 Nfkappa B 的依赖基因的表达，有助于抑制炎症的发生 抗突变的作用 14。 2.5 抗病毒、抑菌作用 Shoko Taniguchi 等 15研究表明。枇杷叶中的 2,19-二羟基-3-O-乌索酸具有抗 HIV 活性，从 中提取的三萜酸类成分对 EBV-EA 病毒也显示活性。肖新生等 16通过研究发现枇杷叶提取物对于 金黄色葡萄球菌的抑菌效果最佳，其次是大肠杆菌，最后是枯草芽孢杆菌。此外，枇杷叶的醋酸 乙酯提取物对白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、福式痢疾杆菌等有抑制作用。 3主要成分的提取工艺 3.1 枇杷叶中三萜酸的提取 目前，对三萜酸的提取分离方法主要有溶剂提取法、超声波提取法、活性炭脱色法、柱层析 法、结晶法、重结晶法等。 陈龙胜 17等研究了枇杷叶中治疗 O 型糖尿病有效成分科罗索酸的最佳提取工艺。以科罗索酸 提取率为指标，通过正交试验考察了枇杷叶中 4 种三萜酸提取效果的影响因素，其最佳提取条件： 温度 80e，提取时间 310h 提取溶剂为 80%乙醇溶液，料液比 1:14（g:mL） ，分两次提取，科罗索 酸的提取率为 0.1984%。 5 邹盛勤等 18将干燥后的枇杷叶 1000g 粉碎成粗粉（20 目） ，用 7 倍量 90%乙醇回流提取两次， 每次 1h，合并提取液，过滤，减压回收乙醇得浸膏，以水降洗涤后，加除杂剂处理两次，过滤， 用乙醇溶解，调节 PH，加活性炭脱色，过滤除杂后，在调节 PH，凝析分离、纯化精制，80烘 24h，得无色针状结晶乌索酸。 相延英等 19研究表明，枇杷叶中熊果酸的最佳提取条件为 6 倍量 95%乙醇超声提取 3 次，每 次 30min，回收乙醇，浸膏分别用石油醚、1%氢氧化钠溶液和水洗至洗出液无色，再用无水乙醇 加热溶解，加活性炭回流脱色 15min，过滤，用热乙醇反复洗涤残渣，冷却，静置，得白色片状 结晶，用热甲醇重结晶得到熊果酸。 3.2 枇杷叶中总黄酮的提取 林启训 20选用枇杷叶为实验材料，通过单因素试验和优化试验，建立枇杷叶水提液中黄酮类 化合物浓度随水的 PH 值、水提温度和水提时间变化的多元回归变量方程，得到枇杷叶水提液中 黄酮类化合物浓度最高的优化因素水平组合，即水的 pH 值 8.0、水提温度 100、水提时间 105min。可得水提液的黄酮类化合物浓度 0.979g/mL。 黄锁义等 21取新鲜枇杷叶，烘干，粉碎。称取枇杷叶粉末约 6g，加 80mL95%乙醇，超声波 提取 2.5h，抽滤。滤渣再加 80mL95%乙醇，超声提取 2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇 至滤液仅剩 57mL 为止，放置 100mL 容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度,得提取液。 4质量控制指标 鞠建华等 2对枇杷叶进行了药效作用的物质基础研究，指出三萜酸类化合物是与其抗炎、止 咳功能相吻合的主要活性成分，其中含量较高的乌苏酸可作为评价枇杷叶药材质量的指标性成分。 罗晓清等 22以甲醇1% 醋酸溶液（88:12 ）为流动相，检测波长为 215nm，反相高效液相色谱法 测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量，结果熊果酸含量为 12.27mg/g，齐墩果酸含量为 3.94mg/g。唐丽琴等 23用以甲醇水冰醋酸（94:60:1.2 ）为流动相，能较好地将枇杷叶中齐墩 果酸与熊果酸分离。邹盛勤等 24建立了 HPLC 测定乌索酸含量的方法。色谱柱为 Symmetry Shicld RP18，流动相为甲醇- 水（88:12 ） ，流速为 1mL/min，检测波长 210nm，柱温 250，乌索酸在 44g-220g 范围内线性关系良好（r=0.9992） ，平均回收率为 99.32%（RSD 为 0.70%） 。鞠建华 等 25也建立了乌索酸的含量测定方法。该方法用 Novapak-C18（3.9mm150mm,4m）色谱柱，流 动相为乙晴：甲醇：水：醋酸胺（60:14:28:0.6） ，流速为 1mL/min,检测波长为 215nm,乌索酸在 4.22g-9.85g 范围内呈良好线性关系，平均回收率为 100.03%，RSD 为 0.02%， 。 6 5结语 目前对枇杷叶的化学成分及药理研究较为深入，枇杷叶的医疗保健用途正不断扩大，枇杷叶 的主要化学成分具有止咳、祛痰、抗肿瘤等多种药理活性，对肺热咳喘和肾小球肾炎、过敏性紫 癜、荨麻疹、湿疹及高血糖等病症具有较好疗效。鉴于枇杷叶制剂在临床应用中具有高效、低毒 的作用特点，对其活性成分、作用机理及其药理作用的研究已引起人们的广泛关注，值得广大医 药科技工作者进行深入研究。 参 考 文 献 ： 1王义潮，巩江，等.枇杷叶挥发油气相色谱-质谱研究J，安徽农业科学，2011,39（5）： 2637-2638. 倪敏，凌雪峰，等。枇杷果实挥发油中的化学成分J,光谱实验室，2013,30（4）： 2鞠建华,周亮,林耕,等.枇杷叶中三萜酸类成分及其抗炎、镇咳活性研究J,中国药学杂志, 2003,38(10):753. 3吕寒.枇杷叶中三萜类化学成分的研究J,中药材,2008,31(9):1351. 4川原信夫日本.枇杷叶成分的研究J,国外医学中医中药分册,2003,25(5):316. 5王立为,刘新民,余世春,等.枇杷叶抗炎和止咳作用研究J,中草药,2004,35(2):174-176. 6葛金芳.枇杷叶三萜酸的抗炎免疫作用及对慢性支气管炎的治疗作用与机制研究D，合肥：安 徽医科大学,2004. 7谢强敏,沈文会,吴希美,等.良园枇杷膏对咳嗽反射和纤毛运动的作用J,浙江大学学报（医学 报）,2002,31(2):131-134 8钱萍萍，田菊雯.枇杷叶对小鼠的止咳、祛痰作用J，现代中西医结合杂志，2004,13（5）： 580. 9De Tommasi,N,De Simone,F,Cirino,G,et al Hypoglycemic effects of sesquiterpene glycosides and polyhyroxylated triterpenoids of Erioborrya JaponicaJ，Planta Med,1991,57(5):414 10孙彦.生物分离工程M，2 版，北京：化学工业出版社，2005:56-82. 11 Ito Hideyuki ,E,Li,SH,et al Antitumor activity of compounds isolated from leaves of Eriobotrya J,J,Agric Food Chem,2002,50(8):2400. 7 12 Ito H,Kobayashi E,Takamatsu Y,et al Poiyphenols from Eriobotrya japonica and their cytotoxicity against hum an oral tumor cell linesJ,Chem Pham Bull,2000,48(5):687. 13Jung HA,Park JC,Chung HY,et al Antioxidant flavonoids and chlorogenic acid from the leaves of Eriobotrya japonicaJ,Arch Pham Res,999,22(2):213. 14Kwon HJ,Kang MJ,Kim HJ,et al Inhibition of NfkappaB bymethyl chlorogenate from Eriobotrya japonica