黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分的液相色谱―质谱联合检测

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分 的液相色谱质谱联合检测 摘要：目的 探讨黄芩甲醛提取 物中主要的抗氧化成分。方法 把黄芩 甲醇提取物与二苯基二苯基三硝基苯肼 （DPPH）自由基相互反应，随之采用 高效液相色谱-质谱联合检测提取物中 的抗氧化成分，从而确定黄芩甲醇提取 物中包含的抗氧化成分。结果 黄芩甲 醛对 DPPH 自由基有较强的清除作用， 高效液相色谱分析结果可知，黄芩甲醛 提取物中包含汉黄芩苷、千层纸素 A、 黄芩苷、千层纸素 A-7-O-B-D 葡萄糖醛 酸苷 4 种较强的抗氧化活性成分。结论 使用高效液相色谱-质谱联合检测法能 快速筛选黄芩甲醛提取物中的抗氧化成 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 分，这种检测方法快速、方便，从而检 测黄芩甲醛提取物抗氧化成分为千层纸 素、葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩苷。 中国论文网 /1/view-12856984.htm 关键词：黄芩甲醇提取物；抗氧 化活性成分；液相色谱-质谱联合检测 心脑血管等疾病的发生与发展与 人体过量自由基存在密切关系，自由基 不只会损伤组织器官，也影响细胞的正 常功能，从而引发各类疾病的发生。因 化合物合成的抗氧化剂存在一定的毒副 作用，因此，在天然物中寻找抗氧化活 性尤为重要。黄芩属于唇形科植物，主 要用来治疗黄疸、高热烦渴、胎动不安 等疾病1。因此，研究黄芩甲醇中的抗 氧化成分尤为重要，文中使用液相色谱 -质谱联合检测法对黄芩甲醇中的抗氧 化成分展开研究，以此筛选其主要抗氧 化成分。 1 资料与方法 1.1 实验仪器与材料 本次研究使 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 用 2695HPLC-DAD 液相色谱仪、美国 某公司生产的 LTQ-XL 电喷雾质谱仪， 配设相应的电喷雾源。 1.2 制备样品 在 1 g 黄芩中添加 50 ml 甲醇，超声提取时间为 30 min， 进行抽滤后把滤液采用 0.45 滤膜过滤 后待用。二苯基三硝基苯肼（DPPH） 采用甲醛稀释至 5 mol/L 当做贮备液使 用。在 40 黄芩甲醛提取物内添加 10 DPPH贮备液，混合均匀后，在室温避 光反应 30 min 后直接采用 HPLC-MS 分 析。空白对照组 DPPH采用等体积甲醛 替代。 1.3 设定色谱-质谱条件 高效液 相色谱流动相 A 设计为 0.5%醋酸溶液， 流动相 B 表示甲醛。梯度洗脱设计如下： 030min，30%80%B，3040 min，80%B。流速设定为 1mL/min。ESI 源属于负离子模式，喷 雾电压控制为-3.5kV，柱温为 40。 2 结果 2.1 分析具体筛选结果 比较实现 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 组和空白对照组液相色谱分析结果发现， 实验组没有反应的 DPPH在 38 min 时 得到分离，表示 DPPH过量。如果实验 组化合物与空白对照组比较峰面积明显 减少，表示这种化合物能够与 DPPH反 应，表示其具有良好的抗氧化活性。化 合物 16 峰面积均有一定程度减少， 表示上述几种化合物均与 DPPH发生反 应，表明其具有相的抗氧化活性。 抗氧化活性组成成分与 DPPH进 行反应后，其抗氧化活性增强，与 DPPH结合能力也有所增强，表示这种 化合物反应程度越大，反应后峰面积减 少程度更大。 黄芩甲醛提取物中 6 种化合物与 DPPH 相结合强度如表 1。由上表可知， 化合物 1、2、3/6 与 DPPH 有相应的结 合，表示上述 4 种化合物具有一定的抗 氧化活性。其结合强度越大，表示抗氧 化活性更强。这 4 中化合物抗氧化活性 排列顺序为：化合物 6213。 2.2 鉴定化合物的抗氧化活性 由 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 表 2 可知，化合物 1 负离子扫描 m/z446M-H-峰，分析离子丧失 1 分子 葡萄糖醛酸，获得 m/z269 个碎片离子， 对该碎片离子展开三级质谱分析，获得 M/Z241，225，197，167 碎片离子，与 相关文献相结合判定这种化合物为黄芩 苷。以此研究类似，化合物 2、3、6 分 别为千层纸素、葡萄糖醛酸；汉黄芩苷； 千层纸素。 3 讨论 目前，自由基得到广泛应用，但 其氧化反应会导致食物腐烂、细胞衰老、 引发各类疾病，抗氧化剂除了人工合成 以外，也可由中草药物中提取获得，也 能在一定程度上降低人工合成抗氧化剂 引发的毒副作用2。目前，从天然提取 物中筛选抗氧化剂最常用的方法是分离、 纯化，随之对其活性展开评价。这种方 法不单费时费力，进行提取时也会出现 降解，直接影响结果的准确性3。高效 液相色谱-质谱联用抗氧化无活性成分 筛选法能够成功筛选大量抗氧化活性成 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 分，对鉴别其结构具有重要意义。黄芩 是临床常见的药材之一，该药物具有清 热燥湿、止血安胎、解毒的功效4。同 时，这种药物拥有良好的抗氧化能力， 其抗氧化活性成分极易溶于醇类黄酮类 化合物中，并对上述化合物总抗氧化能 力进行分析和鉴定5。 本次研究表明，黄芩甲醇提取物 能有效清除 DPPH 自由基，并展现剂量 与效应之间的关系。基于相同浓度下， 黄芩甲醇提取物添加 DPPH 自由基后， 部分色谱峰面积有所下降，说明这些峰 所对应的化合物与 DPPH 自由基发生化 学反应并生成新化合物，致使其峰面积 出现下降或消失。根据电喷雾质谱分析 数据可知，黄芩甲醛提取物中抗氧化成 分包括汉黄芩苷、黄芩苷、千层纸素 A-7-O-B-D 葡萄糖醛酸苷、千层纸素 A。虽然黄芩甲醛抗氧化成分存在一定 差异，但不同溶解剂溶解性存在差异6， 因此，需选用现代分析法深入研究其抗 氧化活性成分，为更好地开发黄芩资源 -精选财经经济类资料- -最新财