从癌症患者身上发现dc细胞经常不正常并且表现出不成熟脊髓细胞的特征

从癌症患者身上发现 DC 细胞经常不正常并且表现出不成熟脊髓细胞的特征，这使得情况 变的更加复杂。来自体循环的 DC 细胞，以及肿瘤内部的 DC 细胞，细胞表面表现出不正 常的低水平 MHC 分子以及共刺激分子的表达。毫不令人惊奇，这些细胞抗原递呈能 力弱，往往表现出免疫抑制的状态而不是免疫刺激作用。患癌症的病人体内，肿瘤诱导的 产物，如细胞因子 IL-10 和 IL-6，血管内皮生长因子（VEGF） ，粒细胞-巨噬细胞集落刺激 因子（GMCSF） ，引起了大部分 DC 细胞的成熟缺陷。 免疫抑制细胞因子的产生 另一条免疫逃避途径由肿瘤抗炎症反应因子的形成而发生。这些细胞因子的抗肿瘤反应作 用是通过直接和和细胞发生作用以及抑制 DC 细胞的功能。癌症患者中 经常会发现血清中的 IL-10 升高。转移性病灶中的肿瘤细胞和转移性淋巴结表达 的现象已经有了详细的记载，Botella-Estrada 发现 IL-10 增高是患有黑素瘤患者 肿瘤发生最终转移的预示。肿瘤诱导的免疫抑制很有可能在患有癌症的动物身上同样存在。 Catchpole 等发现 IL-10 和 TGF- 在患有转移性黑素瘤的狗体内过量表达。有趣的是，在 淋巴节中没有细胞细胞因子诸如 IL-2，IL-4 或者 的表达，这表明肿瘤诱导了 免疫抑制环境的发生。 调节性细胞的诱导 第三个免疫逃避的机制是通过诱导调节性细胞的产生来介导的。这些细胞，最初被命 名为抑制性细胞，是一种独特的细胞亚群，在小鼠和人体内这些细胞的细胞 表面表达 CTLA-4，GITR ，Lag3，并表达细胞内的 Fox P3 转录因子。Treg 直接抑制肿瘤 特异性 CD4+和 CD8+T 的表达，在一些情况也，也由趋化因子 CCL2 吸引到肿瘤部位。 Treg 数量的增加已经在癌症患者中记录到。很多关于人的研究证实在患有乳腺癌、肺癌和 胰腺癌的患者中 Treg 的量有了提高。很多研究表 Treg 表达量的增加和和预后不良有关。 另外，Treg 在转移性淋巴结肿中过表达，并能构成一大部分肿瘤浸润白细胞。 我们实验室的初步工作支持在狗上 Treg 亚群的存在。患癌症的狗比健康的狗能检测到更多 的 Treg。 非特异性肿瘤免疫治疗 特定的疾病感染过程能很好的对恶性肿瘤的治疗产生影响，这个发现一直能追溯到 18 世纪。 1900年初，一个纽约外科医生，William Coley 对帮助理解这些联系起了一定的作用，他发 现一些偶然患有细菌性感染的癌症患者比那些没有感染的患者活的更长。为了支持这个发 现。那个时候的研究转向了那些肺结核病人的低癌症发生率。因此，为了刺激免疫系统， Coley 发明了一种细菌性疫苗，这个疫苗包括灭活的化脓性葡萄球菌和粘质沙雷氏杆菌的 培养物（Coley 毒素） ，用这个来治疗那些不易动手术的患者的肉瘤。尽管有显著的成功 （大约15%的成功率） ，包括完全的和持续的肿瘤缓解，但是这种高失败率和显著的副作用 发生率使者这种方法没有继续下去。不过，Coley 的工作为非特异性调节免疫反应来治疗 肿瘤奠定了基础。 生物应答调节剂 BCG 和小棒状杆菌，卡介苗（BCG） ，一种在20世纪初，刚开始发明了用来治疗肺结核疫 苗，是一株经过修饰的牛分枝杆菌，这是 Coley 工作的延伸并仍然在今天应用。将 BCG 注 入囊瘤中是一种最成功的治疗人表面疱瘤最成功的方法。在这种背景下，BCG 比化学治疗 更有效，尤其是在治疗和预防非扩散性移行细胞癌的复发。尽管对它的抗肿瘤作用的精确 机制和不清楚，BCG 肯定直接和恶性细胞接触，这诱导了炎症细胞因子如 IFN-，IFN- ，和 IL-2 的产生。这个反应吸引和激活了中性粒细胞和 T 淋巴细胞，激活了细胞介导 的对肿瘤细胞的毒性作用以及记忆性 T 细胞，这样能够对疾病复发提供预防。 、尽管 BCG 能够注入到犬的囊瘤中，而且能后在低剂量很好的耐受，不过 BCG 在治疗犬 移行性细胞癌（和人不同，在犬中一般不表现为表面疾病）时还不够有效。Knapp，在一 个关于患有 TCC（异型性细胞癌）的102条狗的综述中写到，在分析疾病的时候，它发现 98%的狗有肿瘤侵入到了囊壁（囊壁靠近或者不靠近器官） 。近来，Knapp 等研究使用了 一种相关的叫做 MCC（分支杆菌细胞壁-DNA 复合物）的混合物。是一种具有诱导 肿瘤细胞凋亡和刺激炎症细胞因子产生的具有生物功能的抗癌症介质，它和的作用 方式是相似的。在体外，MCC 抑制了犬 TCC 细胞增殖，诱导了犬 TCC 细胞的凋亡，然而 矛盾的是，凋亡的诱导可以由加入吡氧噻嗪增强。 一种相似的细菌性产品（来源于小棒状杆菌） ，被证实结合外科手术在治疗人和狗的黑素瘤 具时有抗肿瘤活性。在患有更严重疾病的狗上（二期和三期的口黑瘤） ，结合使用小棒状杆 菌和外科手术狗的存活率比单独使用外科手术的狗提高了。另外一项研究评价了给患有乳 房癌的狗同时病灶内给药小棒状杆菌和 BCG 的情况，证实这提高了狗的存活率。 减毒的沙门氏菌 碱性厌氧菌是一种引人注目的疗法，因为他们能在低氧的实体肿瘤中选择性的生长。来自 沙门氏菌的几株基因上修饰过的菌株（包括 S. Typhimurium 和 S.choleraesuius)通过全身给 药能够特异性的作用于肿瘤。这些细菌然后只能肿瘤细胞内复制，这可以有效的将基因和 其他蛋白递送到肿瘤组织。 除了用于靶向给药，弱毒沙门氏菌还能直接抑制肿瘤生长。在一个患有黑素瘤的小鼠模型 上，一株弱毒鼠伤寒沙门氏菌（VNP20009）选择性的作用于初始肿瘤和转移性病灶，这显 著的降低了肿瘤细胞的生长。抗肿瘤作用的发生被认为有多条机制，包括炎症细胞因子的 产生，如 和和能诱导肿瘤细胞凋亡的毒性蛋白。细菌通过产生致弱的脂多糖 （LPS：一种强效的能增强细胞作用的刺激剂）来刺激先天免疫。 等人最近给患有各种各样恶性肿瘤的狗全身用 VNP20009，并完成了临床一期 评估。在这个研究中，41条狗接受了一周一次或者两周一次静脉注射修饰过的沙门氏菌产 品，并对他们进行急性毒性和肿瘤反应的监测。剂量限制毒性是发烧和呕吐，这发生在剂 量加大实验的给药间隔的后期。在40%的狗的肿瘤细胞内检测到了细菌增殖，大约有 15% 的狗有显著的临床反应（症状完全缓解或者部分症状缓解） 。总之，有37%的狗表现出病 情稳定或者暂时性的治疗反应。考虑到有些狗患有严重的病情，考虑到低毒性发生率，考 虑到高的整体反应率，需要对 VNP2009进行进一步评估。 溶瘤病毒 那些能优先在肿瘤细胞中复制和裂解肿瘤细胞的病毒称为溶六瘤病毒。许多病毒在病毒复 制周期中使用相同的细胞通路，这些通路在癌细胞中经常改变。因为是对肿瘤有选择性， 这些溶瘤病毒提供一个很吸引人的靶向递送基因、药物以及细胞因子到恶性细胞的的途径。 他们同样适用于直接对肿瘤细胞的杀伤作用，以及通过刺激宿主先天性免疫和适应性免疫 来进一步增强抗肿瘤免疫。 一些 RNA 病毒，如呼肠孤病毒，新城疫病毒和水泡性口炎病毒，天性具有肿瘤选择性。另 一些科的病毒，如腺病毒，牛痘苗，单纯疱疹病毒经过基因修饰以后具有优先感染恶性细 胞的特性。对腺病毒早期基因1A （E1A ）和1B （E1B）进行修饰，可是使腺病毒靶向作用 于那些快速分裂的细胞而不能在那些处在正常复制循环的细胞中复制。对那些单纯疱疹病 毒的编码胸腺激酶和核糖核苷酸还原酶的保护性基因进行突变，可以使得单纯疱疹病毒能 够靶向作用恶性细胞，并在其中复制。宿主的胸腺激酶和核糖核苷酸还原酶只在细胞周期 的 G1和 S 期表达（在那些快速增殖的细胞中） ，这样，为了生存，突变单纯疱疹病毒将在 处在快速细胞循环中的细胞中复制。 大部分关于溶瘤病毒的经验来源于各种形式的腺病毒，单纯疱疹病毒，和呼肠孤病毒。在 这些病毒中，腺病毒 Onyx-015取得了最大的成功。在对患有的头颈部鳞状细胞癌的病人的 一期和二期治疗试验中，Onyx-15是直接肿瘤内用药的。并对治疗前后的活组织检查和临 床肿瘤反应进行了评估。最为单一的制剂，Onyx-015并不够有效，只有 20%的肿瘤细胞检 出了病毒复制而且还有14%的病人有作用相反的临床反应。然而，经证实，Onyx-015 结合 化学治疗，有63%的病人有明显的临床反应，有 27%（8个病人）的病人肿瘤完全康复。 Onyx-015已经在严重的胰腺癌，卵巢癌，结肠癌和前列腺癌上做过了第一阶段的实验评估。 几株 HSV-1已经进行了一期实验临床实验评估。给那些患有复发性恶性神经胶质瘤患者趋 向实体性注射突变病毒来治疗。没有发现严重的副作用也没有单纯疱疹病毒脑炎发生，这 证实这个方法是可行的。紧接着的一研究记录到，在好几个病人身上，HSV 在患有严重的 神经胶质瘤病患者的肿瘤细胞内复制，这些肿瘤反应是有放射显影证据的。对犬瘟热病毒 （麻疹病毒属中的一员）进行体外测试，看是否有可能应用来治疗狗的淋巴瘤。犬瘟热病 毒能识别 CD150（CD150是一种细胞膜分子，它能诱导靶细胞凋亡，并在 B 细胞表面过量 表达） 。使用荧光标记的致弱犬瘟热病毒，我们证实，从患有淋巴瘤的犬上分离到的的淋巴 样细胞细胞系和淋巴细胞发生了感染。由于大部分被感染的细胞被杀死了，这表明用犬瘟 热病毒来治疗狗的淋巴瘤是可能的。 超抗原 细菌性超抗原（SAgs） ，如金黄色葡萄球菌肠毒素 A 和（或者） ，能通过促 使 T 细胞受体(TCR)和 MHC 二类分子发生交联来激活 T 细胞。增殖的 T 细胞主要分泌 Th1 细胞因子如 IL-2，TNF- 和 IFN-，SAg 主要激活细胞毒性 T 细胞，并表面在小鼠上具 有诱导肿瘤退化的作用。将 SAg 是何和单克隆抗体融合或者将 SAgs 直接转染肿瘤，SAgs 能够特异性的作用于肿瘤组织。将 SAg 结合免疫刺激因子如 IL-2或者 GM-CSF 共同递送， 能够诱导有效的肿瘤细胞裂解和全身性的抗肿瘤免疫反应。 不幸的是，SAgs 的毒性作用在人身上比在啮齿类动物身上强多了。在人伤，SAgs 能诱导 大量 T 细胞因子的释放，这将诱导毒性休克综合征。基因修饰过的 SAgs 和修饰前相比具 有减弱的结合 MHC 二类分子的能力，具有比修饰前更低的毒力，然而保留了绝大部分激活 细胞的能力。现在基因修饰过的已经在患有更严重癌症的病人身上进行评价了。 第一阶段的试验是在那些非小细胞肺癌患者身上进行的，它的剂量限制性毒性是低血压 （大概有的病人发生了低血压） 。有的病人疾病稳定的进行着，有大概 的病人经历了肿瘤症状的减轻。 在动物肿瘤学上的治疗性潜力是在患有口恶性黑素瘤和软组织肉瘤的的狗身上进 行临床实验评估的。 等人进行了一期和二期的实验，他们给条患有口黑素瘤的狗注射了脂质配合的 质粒 DNA（编码和 GM或者）并检查了他们的临床反应和免疫反应。在 这个研究中，毒性非常小，组织病理检查发现注射这个的肿瘤有显著的 CD4+和 细胞浸润。大概有的狗发生了显著的临床反应（完全或者不完全的缓解） ，存活时间 上，处在疾病三期的狗明显的比那些只接受外科肿瘤切除的狗明显的延长了。 脂质/IL2复合物的有效性同样也在患有软组织肉瘤的狗上进行了评估。 在第一或者第二阶段，将超抗原复合物每周一次注射到肿瘤细胞多达12次。外科手术在治 疗后进行。整体反应率在16条被研究的狗上是 25%（3条完全反应和一条部分反应)。在有 反应的狗上淋巴浆细普弥漫行浸润了肿瘤。然而这个改变在没有应答的狗上并没有观察到。 脂质体包被的胞壁酰三肽 脂质体包被的胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺（L-MTP-）是来源于牛分枝杆菌的短的结构单 位。将细菌细胞壁成分包入到亲脂的脂质体当中，在体外能有使得有效的靶作用于单核细 胞和巨噬细胞。当被吞噬后，炎症细胞因子如 和就产生了， 这导致了单核细胞和巨噬细胞的激活并使他们具有增强的杀肿瘤能力。这个方法的抗肿瘤 效用，尤其是抗移行性疾病的能力已经在二期和三期临床试验中（试验是在患有移行性黑 素瘤，骨肉瘤，肾细胞癌的病人中进行的）很好的记录到了。 在动物药品中，已经在患有各种各样恶性肿瘤的狗和猫上进行了很多临床试验 评估。L-MTP-的促存活作用已经在患有阑尾的狗上清楚的证实。在一个早期的 实验中，随机的对狗进行要么 L-MTP-治疗或者空白对照（截肢） ，那些接受了 L-MTP- 治疗的狗存活了.个月而空白对照的狗只有个月。但是因为的狗在一年只 能死于转移性疾病，随后的研究评价了 L-MTP-PE 结合化学治疗在手术后的作用。随机使 用 L-MTP-PE 和四种剂量的顺氯氨铂（70mg/m2 q 4 周)的狗平均存活时间为14.6个月 （p100000单位 rIL-2)治疗患有结肠腺 癌和黑素瘤的小鼠能够将肺转移性病灶的数量降低80%还多。在一个弥散性白血病模型中， 一天2次给予 IL-2治疗小鼠（在注入赘生性细胞后一周后开始给药五天） ，能够治愈大于50%的 小鼠。 不过不幸的是，在人和小鼠上，IL-2的强烈的抗肿瘤特性和显著的毒性作