课件：猪伪狂犬病.ppt

武汉科前动物生物制品有限责任公司 华中农业大学动物医学院传染病室,猪伪狂犬病 徐高原 博士 猪场动力网 顾问,一、发生与危害 二、流行现状 三、主要临床症状 四、主要病理变化 五、病原学与流行病学 六、诊断方法及应用 七、防治,猪伪狂犬病 （Porine pseudorabies PR）, 猪场动力网,伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PrV)引起的多种家畜和野生动物的急性传染病。 该病在猪呈爆发性流行，引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、增长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。 在除猪外其它动物呈散发形式，但往往呈致死性感染。,一、发生与危害（1）, 猪场动力网,我国上世纪90年代，许多规模化猪场发生严重的流产、死胎、新生仔猪大量死亡，有的猪场一个产仔季节死亡仔猪达6000多头，死亡数百头至数千头的猪场几乎是常事。 伪狂犬病毒是属于高度潜伏感染的病毒，而且这种潜伏感染随时都有可能被机体内外和环境变化的应激因素刺激而引起疾病爆发。,一、发生与危害（2）, 猪场动力网,现阶段，主要表现为散发和局部爆发。 少量的死胎、弱仔等母猪的繁殖障碍 公猪的精液质量下降 仔猪的顽固性腹泻 与猪瘟、猪圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病等混合感染，导致严重的PRDC爆发，造成饲料报酬低，给养猪业造成巨大的经济损失。,二、流行现状, 猪场动力网,三、主要临床症状,妊娠母猪流产，产死胎和木乃伊胎，以产死胎为主。 新生仔猪大量死亡、日龄以内仔猪死亡率为100% 。 断奶仔猪发病死亡，发病率20-40%，死亡率10-20%，主要表现为神经症状、拉稀、呕吐等。, 猪场动力网,母猪不发情、返情、屡不孕等。 公猪不育、发生睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力。 育肥猪表现为慢性呼吸道症状、增重迟缓、饲料报酬降低、推迟上市的时间, 猪场动力网,猪伪狂犬病临床症状（1）,猪伪狂犬病：死胎, 猪场动力网,猪伪狂犬病临床症状（2）,新生仔猪死亡 左：1日龄仔猪死亡 右：3日龄仔猪死亡, 猪场动力网,上：新生仔猪死亡时 尖叫、四肢作划 水状 下：新生仔猪腹泻、 死亡, 猪场动力网,猪伪狂犬病临床症状（4）,病猪站立不稳、行动摇摆、四肢张开 病猪出现神经症状：作划水运动或圆圈运动, 猪场动力网,猪伪狂犬病临床症状（5）,病猪出现神经症状并有转圈现象, 猪场动力网,四、主要病理变化,脑膜充血，出血和水肿 扁桃体、肝和脾脏常可见散在的白色坏死点 肺可见水肿，同时有小叶性间质性肺炎 流产胎儿脑可见出血点，肾和心肌出血，肝和脾脏有白色坏死点 组织变化主要表现在神经系统呈弥漫性非化脓性脑膜炎, 猪场动力网,猪伪狂犬病病理变化（1）,脑组织充血、出血, 猪场动力网,猪伪狂犬病病理变化（2）,脑组织充血、出血 肝脏白色坏死灶 肾脏针尖状出血点, 猪场动力网,猪伪狂犬病病理变化（3）,肾脏散在针尖状出血点,脾脏有散在黄白色坏死结节。, 猪场动力网,肺脏呈现淤箅及轻微水肿，散在分布有点状出血与黄白色坏死灶。,猪伪狂犬病病理变化（4）,肺脏散在分布点状、片状出血。,猪伪狂犬病病理变化（5）,肺的白色坏死灶,肺脏白色坏死灶, 猪场动力网,五、病原学与流行病学,伪狂犬病毒属于疱疹病毒科，目前已完成全基因组测序，多种与毒力和免疫原性相关的基因均已被定位，如TK、gG、gE、gB、gC、gD、gI等，其中TK为该病毒主要的毒力基因。, 猪场动力网,对我国20多个省市伪狂犬病的流行情况进行了调查，发现猪场阳性率高达80%，猪群阳性率为60%左右。, 猪场动力网,应用PCR技术作猪伪狂犬病病原学调查,样 品 数 量 阳 性 率 阴 性 率 死亡仔猪 3140 1520（48.4%） 1620（51.6%） 活猪鼻拭子 1600 350（21.9%） 1250（78.1%） 猪 场 24 15（62.5%） 9（37.5%）, 猪场动力网,伪狂犬病毒潜伏感染的特性 是造成该病难以诊断和根除的原因,潜伏感染：病毒感染，动物耐过后，病毒生存于动物的神经组织（三叉神经）中，不能检测到病毒粒子，只检测出核酸。当机体抵抗力下降，病毒产生并活跃，到生殖系统或其它系统，产生临床可见的症状。, 猪场动力网,当猪处于潜伏感染状态,野毒感染抗体检测为阴性 鼻拭子PCR扩增结果为阴性 应激(寒冷）与免疫抑制疾病的出现，增加伪狂犬病发生的机率。 免疫抑制疾病：蓝耳病（破坏巨噬细胞）、圆环病毒、黄曲霉素中毒；猪瘟？,活体检测困难, 猪场动力网,病原学诊断 病毒分离鉴定 PCR 核酸探针 动物接种试验,六、诊断方法及应用, 猪场动力网,ELISA抗体检测试剂盒和乳胶凝集试验抗体检测试剂盒 进行抗体检测采血时应对猪群分组 母猪：后备母猪；1-2胎；3-4胎；5-6胎；7-8胎；8胎已上 仔猪：1-3周龄仔猪；4-8周龄仔猪； 9-14周龄仔猪；15-18周龄仔猪； 19周龄以上 定期进行抗体水平监测，根据实际情况调整免疫程序,血清学诊断, 猪场动力网,七、防治,主动免疫 疫苗的种类与选择 - 灭活疫苗 - 弱毒疫苗 - 基因缺失疫苗 免疫程序 - 灭活疫苗 - 弱毒疫苗, 猪场动力网,被动免疫 高免血清 康复母猪血清 对象：珍贵种猪和仔猪 其它防制措施 灭鼠 严格控制犬、猫、鸟类和其它禽类进入猪场 严格控制人员来往 定期消毒 血清学监测, 猪场动力网,伪狂犬病的免疫保护机制（1）,中和抗体：Idexx gB-ELISA 抗体效价之间的关系 母源抗体在血清中的半衰期为21天 中和抗体（高免血清）的治疗作用 中和抗体的作用 阻止临床症状的出现，减轻临床严重程度，降低猪群死亡率 不能阻止新病毒在感染部位的增殖，但阻止扩散 不能消灭体内潜伏感染的病毒, 猪场动力网,伪狂犬病的免疫保护机制（2）,细胞免疫：记忆性辅助性T细胞产生白细胞介素2（IL2）和-干扰素，后者限制病毒的增殖。IL2和-干扰素共同激活自然杀伤细胞成为淋巴细胞激活的杀伤细胞（LAK），LAK细胞在感染性病毒粒子产生之前杀死病毒感染细胞，阻止病毒排出。, 猪场动力网,灭活疫苗：在体外培养病毒强毒株，用甲醛等灭活病毒制成疫苗。 弱毒疫苗：通过非猪源细胞或鸡胚传代致弱，或在突变剂的作用下获得。Bartha株、BC株、BUK株、MK-21株、MK-35株、ALFORT-26株及NIA-4株等。 基因缺失疫苗： 第一代基因缺失疫苗:TK基因缺失。 第二代基因缺失疫苗: TK-/gG-、TK-/gE-、TK-/gC- 第三代基因缺失疫苗:多价基因工程疫苗,猪伪狂犬病疫苗的发展, 猪场动力网,伪狂犬病疫苗种类和特点,PrV Ea 株全病毒灭活疫苗： 19952000年，在基因缺失疫苗没有商业化之前使用，安全。 基因缺失灭活疫苗： 不排毒，在根除计划最后阶段时使用。 灭活疫苗肌肉注射，能刺激产生IgM, IgG1,IgG2,但不能产生IgA.,Bartha株,1、为牛源毒株，对猪的免疫原性相对较差 2、未缺失TK，对猪仍有残余的毒性 这也是目前一些猪场母猪免疫后，大量的繁殖障碍没有发生，但是仍有弱仔比例偏高的原因。, 猪场动力网,HB-98的特点,1、毒株来源于猪：其它毒株来源于牛羊，针对性强 2、安全性高：因为缺失了主要的毒力基因TK基因； 3、对以腹泻为主要表现的伪狂犬病：启动局部免疫，阻断野毒的感染 4、诱导猪产生干扰素，具有非特异性免疫增强作用 5、能用gE-ELISA或gG-ELISA鉴别诊断方法,缺失了gG基因：伪狂犬病毒编码的gG蛋白是一种趋化因子结合蛋白，由于gG与机体本身的趋化因子结合，使趋化因子不能发挥功能，导致机体不易或难以识别侵入的病毒。将gG缺失后消除了与机体本身的趋化因子结合的可能，游离的趋化因子能迅速识别病毒，不仅提高了疫苗的免疫原性，而且很快产生抗体，从而达到治疗效果。,HB-98可用于紧急预防接种的机理, 猪场动力网,PRV突变株激活天然免疫反应的差异,对多株PRV基因缺失毒株进行了初步检测，发现不同毒株诱导干扰素、干扰素等天然免疫因子的能力存在较大差别，gG的缺失能显著增强天然免疫应答，gG、gE双缺失突变株(HB-98)诱导天然免疫的能力最强。,伪狂犬病活疫苗对妊娠母猪的安全性试验, 猪场动力网,不同品牌的伪狂犬病活疫苗免疫效果的比较,2006年12月北京兽医总站在北京地区的几个大猪场进行了相关实验，试验方案及结果如下：,3个猪场各选择120头6070日龄猪，分为4个组，免疫前检测猪群的伪狂犬病以及其它疾病抗体； 分别用4个公司疫苗，按照说明书使用； 免疫后20天采血，分离血清； 用国外某公司的伪狂犬病抗体水平检测试剂盒、鉴别疫苗免疫动物和野毒感染试剂盒进行检测； 根据免疫动物抗体阳转率和抗体水平，评价疫苗的免疫效果。,实验方案, 猪场动力网,昌平猪场免疫后伪狂犬病抗体水平（PrV gB-ELISA） 随机抽检样本检测结果,在gB-ELISA中，OD值0.60为伪狂犬病抗体阴性；如低于0.60，表明为抗体阳性。OD值越低，表明抗体水平越高。如表中所示，效果高低依次为科前公司、进口疫苗2 、国产疫苗1和进口疫苗1。,如何正确使用疫苗？,注射 还是 滴鼻？ 注射接种会被母源抗体中和，降低效价； 不提倡在哺乳阶段（21日龄以内）注射；45日龄左右注射 正确：滴鼻免疫不受母源抗体的干扰 误区：不同基因缺失疫苗在同一猪场使用，会发生病毒重组。 只有两种病毒大剂量进入同一细胞时才发生； 仅发生在实验室研究 野外条件下不可能发生：不可能同时给一头猪同时打两种疫苗, 猪场动力网,根除计划的技术基础,1、基因缺失疫苗（gE或gG基因缺失) 2、鉴别诊断方法 血清学鉴别诊断：gE（gG)-ELISA（科前公司，Idexx），gE(gG)-乳胶凝集试验（科前公司） 病原学鉴别诊断：鉴别诊断 gE-PCR, 猪场动力网,根除计划的采样要求,血清样品 每半年进行一次血清学检测，抽样比例58% 建议全群检测：gE阳性猪比例下降到20%，将血清学gE阳性猪与阴性猪分开饲养 后备猪建立时：全部检测 流产胎儿样本 鉴别gE-PCR,一些国家的根除计划方案,美国 分为5个阶段，即以血清学调查为主的准备阶段、控制、扑杀阶段、监测、消灭等阶段（Thawley D G and Morrison R, 1989）。,具体方案,1.1 检测与淘汰 A不免疫，只检测并淘汰阳性猪。 只适用于种猪的PRV阳性率低于20%。 B、免疫后，检测和淘汰 1.2 隔离后代 1.3 全部淘汰，重新引种 推荐用于在高感染率的地区，并易于取得成功。 A.血清学阳性率很高（种猪中高达80%以上） B.传统弱毒疫苗作用不理想。 C. 有多种疾病困扰。 D. 猪群隔离比较困难。, 猪场动力网,根除计划的经济学分析,免疫控制，还是检疫净化 主要是根据野毒感染阳性率来确定 （1）当野毒阳性率低于20或大于50时，野毒感染阳性猪全部淘汰； 当高于2050，采取免疫预防，保持猪群稳定；然后再建立阴性后备猪群。 （2）野毒低于5，一次净化；515