课件：隐球菌临床推广.ppt

天津市一瑞生物工程有限公司,隐球菌抗原检测的临床意义,一瑞生物,隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。 隐球菌属已知有37个不同的种，但具致病性的多为新型隐球菌，其特点是菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。 新型隐球菌主要包括新生变种、格特变种等,简 介,流行病学,38个 ICUs of 27个意大利医院 384 例真菌感染 (318例侵袭性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐球菌感染),Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 7379.,HIV感染者 器官移植患者 接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者 其他无基础疾病的患者,John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291322,美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（2010 年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：,宿主因素,流行病学,随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV中的感染率已达8.5%。 隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30%， 在发展中国家可达到50-100%。 早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。,早期、快速、准确地诊断很有必要,现有检测手段,墨汁染色（菌体） 真菌培养（活菌） ELISA（荚膜多糖抗原） 乳胶凝集法（荚膜多糖抗原） 胶体金法 （荚膜多糖抗原）,1. 印度墨汁染色： 敏感性差，阳性检出率很低 2. 脑脊液或血液培养（金标准）： 阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊 3. 抗原检测试验： 脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断,* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679684.,现有检测手段,隐球菌荚膜多糖抗原,由3种不同的单糖聚合而成 是引起病理变化的主要毒性因子 在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分泌到胞外 通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影响宿主免疫系统,Oscar Zaragoza, etcAdv Appl Microbiol. 2009, 68: 133216,隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ：,荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据,隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理,隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）,试剂盒组成 隐球菌抗原检测试纸条50条 样本稀释液 滴定液 阳性对照 稳定性/储存方法 2年有效期 室温储存,特 点,无需样本预处理 10分钟得到结果 定性或半定量测定 结果客观 血清，脑脊液，血浆,样本收集及制备,按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。 样本最多可以在 2-8放置 72 小时。 不反复冻融的情况下，样本可以在-20以下保存更长时间。 样本在运输过程中应保持在 2-8或者-20以下。,定性检测操作步骤,简单5步，10分钟得到结果,注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。,定性检测结果,半定量检测操作步骤,1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1:2 稀释至 1:2560。 分别放置于10 个微离心管中并编号1-10。 2、向 1 号试管中加入 4 滴样本稀释液。 3、分别向标号 2-10 的试管中加入 2 滴滴定液。 4、将 40 L 样本加入 1 号试管并混匀。 5、从 1 号试管中吸取 80 L 样本混合液转移至 2 号试管并混匀，依次进行稀释直至 10 号试管。 6、10 号试管中吸取 80 L 样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为 80 L。 7、将试纸条的白端分别没入试管中。 8、等待 10 分钟，读取并记录实验结果。,半定量检测操作步骤,半定量检测操作步骤-2,半定量检测(滴度)结果,对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。,质量控制,阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加入 1 滴隐球菌抗原阳性对照。 阴性对照为：将 2 滴样本稀释液加入试管中。 分别插入试纸条，10 分钟后读取结果。 依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或要求，可能需要做额外的质控检测。,胶体金法和培养/墨汁染色对比,CrAg LFA package insert (IMMY),胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比,TR Kozel, Clin. Vaccine Immunol. (2011) 18:1292 TR Kozel, 8th International Conference on Cryptococcus and Cryptococcosis (2011),灵敏度远远高于其他方法,隐球菌抗原分布,Adapted from Kozel and Bauman, Expert Opin. Med. Diagn. (2012) 6:245,胶体金法和乳胶凝集法对比,适用科室及临床意义,新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。,中枢神经系统隐球菌病-神经内科 隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、散播型脑膜炎等。 临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重者出现不同程度意识障碍。 肺隐球菌病-呼吸科 肺部是隐球菌侵入的门户,适用科室及临床意义,皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科 10%15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。 儿童脑膜炎-儿科 儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查 免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等 新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。,适用科室及临床意义,临床意义,在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几周前被检测到。 隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。,临床意义,筛查了HIV感染病人进行隐球菌抗原预防的成本效益，使用隐球菌抗原可以显著降低成本,临床意义,荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的依据。 在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐球菌病早期诊断的标志物。 随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变化，还可作为病情监测的指标。,G实验： 检测真菌细胞壁特有成分1,3-D-葡聚糖 吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-D-葡聚糖到血液 不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等） G实验检测隐球菌为阴性结果的原因： 隐球菌含1,3-D-葡聚糖的量少 荚膜很厚，不易被吞噬细胞消化,联合检测的意义,联合检测的意义,收录指南,共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一,资质认证,物价标准（2014年版）,物价标准（2014年版）,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用