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文档简介

铜绿假单胞菌的分离及鉴定,组员:张冲 郭泽 王平,-,铜绿假单胞菌,2019,-,2,实验目的,了解铜绿假单胞菌的微生物学特性 掌握微生物实验技术基本原理及操作 熟悉铜绿假单胞菌的分离鉴定程序及 方法,2019,-,3,概述,铜绿假单胞菌惯称绿脓杆菌,为革兰氏阴性杆菌,属假单胞菌属。它在自然界分布甚广,空气、水、土壤中均有存在,在潮湿处可长期生存,对外环境的抵抗力比其他菌强,抗干燥的能力也强。,2019,-,4,生物学特性,形态:革兰氏阴性杆菌,菌体长短不一 ;单端单鞭毛;动力阳性;无芽胞。 特性:专性需氧;生长温度范围是2542, 最适生长温度35,4不生长。,2019,-,5,生物学特性,抗原性:,O抗原 H抗原 粘液抗原 R抗原 菌毛抗原,产生荧光素和水溶性的绿脓素,培养物呈蓝绿色。,2019,-,6,生物学特性,在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落,有生姜味; 在普通平板、血平板、麦康凯平板上可形成5种不同形态的菌落,典型型 粘液型 侏儒型 粗糙型 大肠菌样型,2019,-,7,生物学特性,菌落呈灰绿色,大小 不一,扁平湿润,边缘不规则呈伞状伸展,表面常可见金属光泽。,典型型(麦康凯平板),2019,-,8,生物学特性,产绿脓素 琼脂染成黄绿色,典型型(普通平板),2019,-,9,生物学特性,菌落光滑凸起 成粘液状,粘液型(血平板),粘液型(麦康凯平板),2019,-,10,生物学特性,菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙,粗糙型(麦康凯平板),2019,-,11,生物学特性,菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落,大肠型(麦康凯平板),细小,无光泽 半透明菌落,侏儒型(麦康凯平板),2019,-,12,生化特性,氧化酶:+ 葡萄糖的氧化(O/F):O 枸橼酸盐利用:+ 精氨酸双水解:+ 明胶液化:+ 硝酸盐还原:+ 乙酰胺酶:+ 吲哚试验:-,2019,-,13,微生物学检验,2019,-,14,脓液 痰 尿液等,直接涂片、革兰染色、镜检,分离培养 (血平板、麦康凯),18-24h,35,可疑菌落(金属光泽、-溶血、产绿色素、特殊气味),初步鉴定,最终鉴定,色素鉴定,生化 反应,42 生长,分型 (血清学 噬菌体),革兰阴性杆菌,氧化酶阳性,菌落特征 气味 绿脓素,报告,检验程序,药敏试验,2019,-,15,试验材料,病料:痰液标本 试剂:氧化酶纸片,明胶、革兰染色液、药敏纸片、无菌生理盐水及生化管配套试剂等 培养基:普通平板、血平板、麦康凯平板、半 固体培养基、非发酵菌微量生化管等 其它 :显微镜、培养箱、小试管、载玻片、 接种针、接种环、酒精灯、火柴、平皿等,2019,-,16,分离培养,标本采集:脓液、浓痰(无菌拭子) 痰液标本的前处理 加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液,放置35、90 min使痰液均质化。 直接涂片,革兰氏染色,镜检 分别接种普通平板、血平板和麦康凯平板,培养1824h ,进一步进行鉴定。,2019,-,17,初步鉴定,选出可疑菌落 金属光泽、-溶血、产绿色素、特殊气味等 初步鉴定,染色镜检:取可疑菌落,进行革兰氏染色、镜检。 氧化酶试验:挑取可疑菌落于滤纸片上,滴加一滴新配制的5%二甲基对苯二胺试剂,15-30min内,出现红色至紫红色,为阳性;若不变色,为阴性。,2019,-,18,绿脓菌素试验:选取可疑菌落2-3个,置于绿脓菌素测定用培养基,于37培养24h,加入氯仿、色素后,再加入盐酸 ,上层稀盐酸液内出现红色为阳性,表示菌落中含有绿脓菌素。,初步鉴定,2019,-,19,最终鉴定,明胶液化试验:选取可疑菌落的纯培养物,穿刺接种于明胶培养基内,37培养24h,取出后放入冰箱10-30min,如若溶解,即试验呈阳性;如凝固不溶,试验呈阴性。 硝酸盐还原试验:选取可疑菌落的纯培养物,接种于硝酸盐培养基,置于37培养24h,如若培养基中的小倒管内有气体,试验呈阳性。,2019,-,20,最终鉴定,吲哚试验:选取可疑菌落的纯培养物接种于蛋白胨水,培养8h-24h后,加Kovacs(靛基质)试剂约3mm高,如若在液层界面发生红色,即为阳性反应。 42生长试验:选取纯被检物,接种于普通琼脂斜面培养基上,于42培养4h,铜绿假单胞菌能生长为阳性反应。,2019,-,21,血清学鉴定,血清群鉴定:取洁净玻片,滴加多价O血清于玻片,再接种此菌的纯培养物少许混匀,2min观察凝集现象,鉴定。 血清学分型:按血清分型试剂盒操作说明进行操作:将待检测菌在LB琼脂培养基中过夜培养,取少许与30L阳性血清混合,一分钟观察结果。 判定标准:有凝集块出现,且生理盐水空白对照组不凝集者为阳性。,2019,-,22,药敏试验,扩散法(K-B法) 选用抗菌药物,对分离的细菌进行敏感性试验: 药敏片:庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、链霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、头孢哌酮、青霉素; 根据抑菌圈的大小判断病原菌对药物的敏感程度。,2019,-,23,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考,实际情况实际分析,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projec

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