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文档简介

口服四联活菌肠溶胶囊临床研究SOP 粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程一、革兰染色液的配制(科氏改良法)共5种液体,分为结晶紫A液,结晶紫B液,革兰碘液,脱色液,复染液。染液名称配制方法1结晶紫A液结晶紫0.25g(研磨后),加乙醇(2ml,95%),再蒸馏水98ml2结晶紫B液Na2CO3 1.25g,加蒸馏水100ml3革兰碘液NaOH 0.1g溶于2.0ml蒸馏水中,加I2 2.0g , KI 4.0g,再加蒸馏水至100ml4脱色液丙酮30ml+乙醇70ml(95%)5复染液沙黄2.5g3.0g加入乙醇(95%)10ml,溶解后加入蒸馏水100ml(或用10%石炭酸复红液10稀释即可)二、涂片制作1、取样:粪便标本送检时,观察标本性状,并“多位点”挑取或沾取粪便标本;2、推片与固定:以3040度角推片,面积11.52cm,自然干燥后,酒精灯上火焰上能过3次固定(制作涂片2张,其中作为一张备用);3、染色:第一步,先加A液淹没标本,再加“等量”B液混合,染色1分钟;水轻柔冲洗掉;第二步,加革兰碘液,12分钟;水轻柔冲洗掉;第三步,加脱色液20秒到30秒,根据情况而定,如涂片稍薄时就适当减少染色时间;水轻柔冲洗掉;第四步,最后复染30秒,冲洗后晾干或吸干。4、涂片制作注意要点:1、涂片不可太厚,亦不可太薄,太厚则细菌总数增加,且影响观察,太薄则涂片所见细菌总数减少,厚薄如血膜为宜。2、注意把握染色时间,好的染色是能够清晰准确观察的必要条件。三、镜下观察1、确定涂片和染色情况:涂片要均匀,菌体不变形,革兰阳性和革兰阴性反差要好。2、总览细菌总数:观察总数的多少,以及有无优势菌或真菌等。其评定标准见肠道粪便检查图谱。3、观察G+杆菌、G+球菌、G-杆菌、G-球菌比例:选定有代表性的视野,计数并判定其大概比例(有经验者可根据经验判定)。计数方法可选用纸片打孔缩小视野计数法来计数;亦可选定有代表性视野,数一定数量的细菌,再计数各种比例。四、结果判定:请按照下表进行参照填写每个患者的菌群失调化验单(四联活菌肠溶胶囊临床试验专业)正 常 参 考 值 评 定 参 考 标 准分 析结 果(检验师填写) I 度失调度失调 度失调大便性状正常成形或成型软便正常成形或不成形软便、稀便多数为程度不等的稀便,也可为粘液便、水样便、脓血便或柏油样便多数为程度不等的稀便,也可为粘液便,常呈黄绿色或黑色涂片所见细菌总数 5005000/油镜视野(计数5个油镜视野细菌数的均值) 细菌总数在正常范围(5015000/HP)、正常低值或略有减少(101500/HP)细菌总数明显减少(11100/HP)或无明显改变细菌总数呈显著减少(10HP)革兰阳性杆菌50.2%-74%革兰阳性杆:革兰阴性杆:革兰阳性球:革兰阴性球=50-74:35-44:2-10:0.5-5正常范围低值革兰阳性杆:革兰阴性杆:革兰阳性球:革兰阴性球=50:45-50:13-30:5-10明显减少革兰阳性杆:革兰阴性杆:革兰阳性球:革兰阴性球=35-40:50:30:10细菌总数呈显著减少,粪便中原来的菌群大部分成员被抑制而消失革兰阴性杆菌35.29%-44%多数会稍有增加革兰阳性球菌2%-10%正常范围高值或增多革兰阴性球菌0.5-5% 杆菌:球菌 3:1(杆菌革兰阳性杆菌革兰阴性杆菌)(球菌革兰阳性球菌革兰阴性球菌) 1:12:1可能会出现比例倒置镜下印象:1. 肠道菌群未见明显异常 2. I度菌群失调改变 3. II度菌群失调改变 4. 度菌群失调改变五、其它说明:1、尽量用新鲜粪便进行检测,时间半小时之内,如果耽搁时间较长,可以取稍微量多的粪便样本,取样时挑取中心位置的粪便。2、遇粘液便,胨样便或水样便亦可采用牙签进涂片。3、镜检时,应将涂片视野全面观览,不可只看几个视野就计数或报告,以防误差。六、参考

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