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文档简介

动物细胞工程专题复习,动物细胞培养,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬浮液,10代 细胞,部分细胞“癌变”,遗传物质改变,无限传代,动物细胞培养不能 最终培养成动物体,50代细胞,原代培养,传代培养,细胞贴壁,剥离、分瓶,细胞株,细胞,细胞系,1、过程:,如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?,遗传物质改变,几个有关概念:,原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。,细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到4050代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。,1、无菌、无毒:,2、全部的营养物质:,3、适宜的温度和PH值:,4、必要的气体条件:,(添加一定量的抗生素,定期更换培养液),(葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。),保证细胞顺利的生长增殖,36.5+(-)0.5度, 7.2-7.4,O2和CO2(95%空气和5% CO2 ),2、条件:,维持培养液的PH,3、应用:,大规模培养生产生物制品(病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体) 作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性 用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植株,培养结果,获得细胞或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物组织培养和动物细胞培养的比较,1.动物细胞工程技术的基础是( ) A、动物细胞融合 B、胚胎移植 C、动物细胞培养 D、核移植 2.下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是( ) A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散 C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株,C,B,3.下列关于动物细胞培养的叙述中,错误的是( ) A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组 织 B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单 个细胞 C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离, 制成悬浮液 D、动物细胞培养只能传50代左右,所培养的细胞会衰 老死亡,D,4.下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答: (1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 _。 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ,然后用 酶处理,这是为了使细胞 分散开来,这样做的目的是 (3)培养首先在B瓶中进行,瓶中的培养基成分有 _等。,幼龄动物或胚胎的组织或器官,剪碎组织,胰蛋白,使细胞与培养液充分接触,葡萄糖、氨基酸、水、无机盐、促生长因子 与微量元素和动物血清,在此瓶中培养一段时间后,有许多细胞衰老死亡,这是培 养到第 代,到这时的培养称为_。 为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中,用 处理 然后配置成 ,再分装。 在C瓶中正常培养了一段时间后,发现细胞全部死亡, 原因是,10,原代培养,胰蛋白酶,细胞悬液,细胞没有发生癌变,核移植技术和克隆动物,1. 概念:将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。,核移植,(难度高),受体细胞:M期的卵母细胞,细胞分化程度低,恢复全能性容易,用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 原理:动物体细胞核的全能性。,取供体细胞,取卵母细胞,供体细胞培养,培养到 M中期,卵母细胞去核,供体细胞注入去核的卵母细胞,供体核进入受体卵母细胞,重组胚胎,代孕母牛,生出与供体遗传物质基本相同的个体,2.过程:,3.克隆动物的研究意义:,1.克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.治疗人类疾病,作为供体 4.保护濒危动物,4体细胞核移植技术存在的问题:,1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷,如体型 过大,异常肥胖,发育困难,免疫失调等。 2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。,1.下列哪项属于克隆( ) A将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤 细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系,D,2.(多选)美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用 成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应 器,成功地在实验室里培育出新的动脉血管,这种血管的 外形和功能都与真的血管一样,这一研究成果是生物组织 培养领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中,正 确的是( ) A属于“克隆” B可能要利用去核卵细胞 C关键是激发血管细胞的全能性 D关键是激发血管细胞发育成血管的潜能,ABD,3 .从母羊甲的体细胞中取出细胞核,注入到母羊乙去掉 核的卵细胞中,融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎,再植 入到另一只母羊丙的子宫内,出生小羊的大多数性状 ( ) A、难以预测 B、像甲 C、像乙 D、像丙 4.生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再 是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功 “复生”野驴的方法是 ( ) A将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分 化、再分化,培育成新个体 B将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个 体 C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中, 经孕育培养成新个体 D将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体,B,C,5.下图所示为用两栖动物卵所做的实验图解,据图回答 下列问题:,蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所需的_,重新组合的细胞相当于蛙的_ 细胞,经过 _ 和_形成组织和器官。,全部基因,受精卵,细胞分裂,细胞分化,本实验结果说明_具有全能性,图中A过程采用的技术手段称做_。,动物体细胞核,核移植技术,动物细胞融合,1.过程:,动物细胞A 动物细胞B,诱导,融合,2个完整的杂交细胞AB,有丝分裂,(膜融合、质融合),(核融合),注意:动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起,让它们随机融合后,再从中筛选杂交细胞,2.意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。,3.应用:成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体,植物体细胞杂交和动物细胞融合比较,细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、 果胶酶去壁,用胰蛋白酶 使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、 生物方法,获得部分或完整植株,主要用于制备 单克隆抗体,1、基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合,用灭活 的仙台病毒处理后,不可能获得下列哪种基因型的细胞 AAAaa BAaBb CAabb DBBbb 2、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是 诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞 A. B. C. D. 3、动物细胞融合和植物原生质体融合比较,在动物细胞融合中有特殊性的是 A、融合的原理 B、融合的优点 C、融合的诱导手段 D、融合的过程,C,C,C,4.科学工作者用绿色和红色荧光材料,分别标记人和鼠的 细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后, 起初一半膜发出绿色荧光,另一半膜发出红色荧光,一段 时间后,两种颜色的荧光点均匀分布,如图所示。请分析 回答:,该实验结果说明了细胞膜 ,这是因为 若在两个细胞融合成一个细胞后,将融合细胞置于0 条件下再保持40min,则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧 光,另一半膜发红色荧光,这说明,具有一定的流动性,构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的,膜的流动性受温度影响,在低温下分子的运动受抑制,单克隆抗体,1.单克隆抗体制备过程,诱导其融合的方法有哪些?,融合后培养液中有几种细胞,怎样筛选出杂交瘤细胞,杂交瘤细胞有何优点,注射抗原的目的是什么,为何要进行克隆化培养和专一抗体检测,多次筛选,大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法,过程:,B淋巴细胞 骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞( B-瘤细胞),克隆化培养,抗体检测,产生所需抗 体的杂交瘤 细胞,体外培养,单克隆抗体,2.单克隆抗体的应用:,.作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质,并与抗原特异性结合,2.用于,运载药物:制成“生物导弹”,治疗疾病:主要用于癌症治疗,优点:准确、高效、简易、快速,单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高,优点:疗效高、毒副作用小,1、下图是单克隆抗体制备过程示意图,其中1过程注射的物质和A细胞的名称为 ( ),A、抗体、T淋巴细胞 B、抗原、T淋巴细胞 C、抗体、B淋巴细胞 D、抗原、浆细胞,D,2、关于单克隆抗体,下列叙述不正确的是 A、可以制成诊断盒用于疾病的珍断 B、可以与药物结合,用于病变细胞的定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产,不能体外生产 3、“生物导弹”是指 A、单克隆抗体 B、带有特定药物的单克隆抗体 C、杂交细胞 D、B淋巴细胞,D,B,4.单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究 中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述,错误 的是 A特异性强、灵敏度高 B与抗癌药物结合可制成“生物导弹” C体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体 D由效应B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌,C,5.下图为细胞融合的简略过程(只考虑两个细胞的融合) 请据图回答:,I若A、B是基因型分别为rrHH、RRhh两个烟草品种细胞 的花粉,且这两对基因位于非同源染色体上,由于一对 隐性纯合基因(rr或hh) 的作用,在光照强度大于800勒 克斯时,都不能生长。 实验开始时必须用 除去不利于原 生质体融合的物质。 实验中除获得杂种细胞外,还有基因型 为 的融合细胞。,纤维素酶和果胶酶,rrHH、RRhh,设计一方法(不考虑机械方法),从培养液中分离出杂 种细胞,方法: 将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础 是 。 II若该过程是制备治疗“SARS”病毒的单克隆抗体,A为 人B淋巴细胞(染色体组成为2AXX=46),B为鼠骨髓瘤 细胞(染色体组成为2AXX=40) 用单克隆抗体制成“生物导弹”主要利用了抗体 的 特性。 A细胞来自于 ,杂种细胞C共有 个 染色体组。 杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是 培养基要用 培养基。(物理状态),培养基中除 了添加必要的营养物质为还需加入 。,置大于800勒克斯光照下培养,收集分化的 细胞团,细胞的全能性,抗体与抗原结合,发挥特异性免疫效应,非典患者,4,液体,动物血清,6.右图是制备分泌抗X抗体的过程,根据图解回答问题:,给小鼠注射抗原的目的是_。 在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓 瘤细胞,是因为它们融合后的杂交瘤细胞具 有_ 的特性。 由图中可看出,单克隆抗体制备过程运用了_和 _的动物细胞工程技术手段,前

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