2018届高考生物二轮复习微生物的培养与应用专题卷2.docx

微生物的培养与应用一、单选题1下列有关发酵过程的做法中，符合生产实际的是（ ）A通过人工诱变、杂交、基因工程和细胞工程育成菌种B生产过程中排出的废弃物可直接排入附近农田作肥料C分离单细胞蛋白时，通常采用萃取、离子交换等方法D在连续培养过程中补充的同种培养液和空气须先灭菌【答案】D【解析】2下列实验材料、试剂等，不必放入冰箱的是A. 层析光合色素后的滤纸 B. 长期保存得到的菌种C. 用于粗提取DNA的酒精 D. 保存PCR所需的Taq酶【答案】A【解析】A. 层析光合色素后的滤纸不必放入冰箱，A符合题意；B. 长期保存得到的菌种需要放在低温条件下保持，B不符合题意；C. 用于粗提取DNA的酒精是冷却的，C不符合题意；D. 保存PCR所需的Taq酶，酶的保存需要低温条件，D不符合题意。故选A。3下列关于微生物培养和利用的叙述，不正确的是A制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分开获得单个菌落C含酚红的培养基可鉴别尿素分解菌D菌种的临时保藏是将菌种接种于固体斜面培养基中，然后再放入-20的冰箱中保存【答案】D【解析】试题分析：将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。所以D选项是错误的。考点：本题考查微生物培养和利用，意在考查学生能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用。4若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确的操作步骤是（）土壤取样；称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备102土壤稀释液；吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布；依次将土壤稀释液稀释至浓度为103、104、105、106、107的溶液A. B. C. D. 【答案】C【解析】稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是：土壤取样；称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液；进行梯度稀释，即依次稀释至103、104、105、106、107稀释度，吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布，故选C。5科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株，步骤是：采集菌种选择培养纯种分离性能测定。下列相关的叙述中，错误的是A.筛选目的菌的培养液中必须以多环芳烃菲作为唯一碳源B.选择培养需多次进行的目的是为了分离和纯化目的菌C.利用平板划线法纯化目的菌，接种环最少灼烧1次D.接种后需将平板倒置且需一个未接种的培养基作对照【答案】C【解析】试题分析：要想分离能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株，配制培养液时，必须用多环芳烃菲作为唯一碳源，故A正确；选择培养的目的是为了分离和纯化细菌，故B正确；用平板划线法纯化目的菌时，每次划线前都要灼烧，故C错误；接种后需要将平板倒置过来培养，需要设置空白对照，故D正确。考点：本题考查微生物的实验室培养的有关知识，意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。6下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是（ ）A. 获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B. 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法C. 培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌D. 倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落【答案】C【解析】试题分析：微生物培养的关键是防止杂菌污染；培养基制作完成后需要进行灭菌处理，培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌；倒平板后需要将培养皿倒置解：A、微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A正确；B、通常可以采用稀释涂布平板法或平板划线法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B正确；C、培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解的成分，就不能用此方法，如培养基中的碳酸氢钠等物质，C错误；D、倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而污染，D正确故选：C考点：微生物的分离和培养7下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是A. 刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入B. 刚果红可以在菌落形成后加入C. 刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌D. 在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌【答案】C【解析】刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入，也可以在菌落形成后加入，A、B项正确；若在细菌菌落形成前倒平板时加入刚果红，则所加刚果红要进行灭菌，以防杂菌的侵入，影响纤维素分解菌菌落的形成，C项错误；若在菌落形成后加入刚果红，则不需要灭菌，D项正确。【考点定位】刚果红染色的原理和方法8微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是A. 溶化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底B. 新配置的培养基可以用高压蒸汽灭菌或干热灭菌的方法灭菌C. 倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置D. 用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环【答案】B【解析】试题分析：琼脂熔化时，容易糊底，所以熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底，A正确；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，不是干热灭菌，B错误；倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，C正确；用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，D正确。考点：本题主要考查微生物的分离的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。9生产用菌种的来源主要是自然环境 收集菌株筛选 购置生产用菌种 培养基 C 【答案】D【解析】略10以下有关生物技术实践的叙述中，不正确的是A. 除活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法B. 在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点C. 在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸D. 不能用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目【答案】D【解析】本题考查培养基对微生物的筛选与微生物的分离计数，要求考生明确利用选择培养基可对微生物进行筛选，利用平板划线法或稀释涂布平板法可进行微生物分离，利用稀释涂布平板法可测定土壤溶液中某活菌数目。除活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，A正确；在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点，B正确；在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸，C正确；可用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目，D错误。11在生物工程中，科学家已经可以利用多种类型的生物反应器来生产人类需要的生物产品。下列生物反应器的应用中，必须破坏相应细胞才能获得生物产品的是A利用单克隆抗体制备技术制作精确诊断SARS病毒的试剂盒B利用筛选出来的优质酵母酿造葡萄酒C利用植物组织培养技术培育人参细胞快速获得大量人参皂苷D利用微生物的发酵作用将沼气池中的有机废物转化为沼气【答案】C【解析】试题分析：单克隆抗体是由杂交瘤细胞分泌的蛋白质，生产不需要破坏细胞，A错误。酵母菌无氧呼吸产生的酒精也可以排出细胞外，B错误。人参皂甙位于人参细胞内，获得该物质需要破坏细胞，C正确。微生物发酵产生的沼气能直接排到细胞外，D错误。考点：本题考查细胞工程、微生物工程的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。12下列叙述错误的是 （ ）A. 培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素B. 培养霉菌时需将培养基的pH调至碱性C. 培养细菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性D. 培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件【答案】B【解析】维生素是乳酸菌生长繁殖所必须的，在体内又不能合成，因此要在培养乳酸菌的培养基中添加维生素，A正确；霉菌生长所需要的PH是酸性，培养霉菌时应将PH调至酸性，在碱性情况下不易繁殖，甚至会导致霉菌死亡，培养霉菌时应将PH调至酸性，B错误； C、细菌生长繁殖所需要的PH是中性或微碱性，所以培养细菌时需将PH调至中性或微碱性，C正确；厌氧微生物在有氧时无氧呼吸受抑制，因此培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件，D正确。【考点定位】微生物代谢的条件13可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是A以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂B以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂C以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂【答案】B【解析】试题分析：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，能使酚红指示剂变红，B正确。考点：本题考查鉴定分解尿素的细菌的方法，意在考查考生的理解应用能力。14控制细菌主要性状的基因，控制根霉菌主要性状的基因，控制病毒抗原特异性的基因依次是:核区DNA上 线粒体DNA上 细胞核染色体上 蛋白质壳内核酸上A BCD【答案】A【解析】15在现代生物工程技术中，下列研究方案不能实现其目的的是【答案】CD【解析】试题分析：沼气工程可以再生饲料、肥料、食用菌培养基，提供燃料。实现物质和能量多级旅游，A正确。体外诱导个体自身胚胎干细胞分化形成相关组织和器官，能够提供自身移植，避免器官排斥，B正确。骨髓瘤细胞与免疫的B细胞融合成的杂交瘤细胞，能够生成单克隆抗体，C错。胃蛋白酶需要在强酸下才能分解蛋白质，而动物细胞培养在接近中性，D错。考点：本题考查现代生物工程相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构能力。16微生物分离和培养正确方法步骤是A. 灭菌、培养基的配制、搁置斜面、接种、培养B. 培养基的配制、灭菌、搁置斜面、接种、培养C. 接种、灭菌、培养基的配制、搁置斜面、培养D. 培养基的配制、接种、灭菌、搁置斜面、培养【答案】B【解析】分离微生物的主要操作步骤为：原料称量、溶解、调pH、分装，包扎等培养基的配制，灭菌，倒平板或搁置斜面，接种，培养，故B正确。17下图是利用牛肉育蛋白胨培养基培养和纯化X细菌的部分操作步骤。有关叙述正确的是A步骤中，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上进成污染B步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液C步骤沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数D步骤是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落【答案】B【解析】倒完平板后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，A错误；步骤接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以沾取菌液后平板划线，B正确；步骤多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，但不能用于计数，C错误；步骤将培养皿放在恒温培养箱培养后可用来对X细菌进行分离得到纯种，D错误。【考点定位】微生物的分离和培养18下列关于细菌的叙述，错误的是A. 根瘤菌能够固氮，因此是自养型微生物B. 硝化细菌可以利用化学能将CO2转化为有机物C. 在培养基中可以不加碳源进行硝化细菌的培养D. 含伊红美蓝试剂的培养基可以鉴别牛奶中的大肠杆菌【答案】A【解析】根瘤菌只有入侵到豆科植物根内才能固氮，利用豆科植物的有机物，属于异养型微生物，A错误；硝化细菌可以利用氨气氧化释放出的化学能，将二氧化碳和水等无机物转化为有机物，属于生物圈中的生产者，B正确；硝化细菌属于自养型微生物，故培养硝化细菌可以不加碳源，C正确；伊红美蓝是专一鉴定大肠杆菌的指示剂，可以用来鉴别和计数大肠杆菌，D正确。19酵母菌培养基中，常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的生长，原因是（ ）A.细胞失水 B.细胞吸水 C.改变了酵母菌的pH值 D.碳源太多【答案】A【解析】二、非选择题20幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氣型（氧气浓度在5%8%左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存)，这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以_为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在_条件下，倒置于37的恒温培养箱中培养。（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有_。（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是_。（4）采用液体培养基培养幽门螺杆歯菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用_法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计_的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏_（填“大”或“小”)，原因是_。【答案】尿素氧气浓度在5%8%左右干热灭菌、高压蒸汽灭菌脲酶将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色稀释涂布平板菌落小有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的【解析】试题分析：接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞。微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及生长因子。由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，PH升高，指示剂变红。（1）根据提供信息分析，幽门螺杆菌体内含有脲酶，能够降解尿素，所以应该将幽门螺杆菌接种在以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在氧气浓度在5%8%左右条件下，倒置于37的恒温培养箱中培养。（2）微生物的培养基常用的灭菌方法有干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法。（3）幽门螺杆菌体内的脲酶能够将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色，所以可以用添加酚红指示剂的培养基鉴定幽门螺杆菌。（4）微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用于计数。该方法一般通过统计菌落的数量代表菌体的数量；用于有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的，所以统计的数据往往比真实值小。【点睛】本题的知识点是微生物培养过程，分离微生物和统计活菌数常用的常用方法，主要考查学生设计和完善实验步骤，分析实验结果获取结论的能力和提出问题进行进一步探究的能力，利用所学的微生物知识解决生活问题的能力。21在家庭装修过程中会产生甲醛、酚类等对人体有害的物质。甲醛和酚类可以当作一些微生物生长的碳源，经微生物代谢分解后变成无毒物质或形成二氧化碳和水。某研究小组研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，请回答下列问题：（1）在培养该细菌的培养基中必须含有水、碳源、 和 。该实验所用的培养基从功能上属于 培养基。中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基 （会/不会）影响细菌的数量。（2）从到进行微生物接种的最常用方法是 和 。中微生物不生长，其作用是 。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是 。（3）若在该实验中统计菌落数目时得到4个平板，数目分别为21、213、257、27 8，则应计数为 ，该方法往往比活菌的实际数目 （高/低）。【答案】（1）氮源 无机盐 选择 苯酚 会（2）平板划线法 稀释涂布平板法 对照试验 防止水分污染培养基，防止水分过快挥发（3）249 低【解析】试题分析：（1）培养基的成分包括水、碳源、氮源和无机盐；该培养基的目的提筛选获得只能降解利用苯酚的细菌菌株，则该培养基属于选择培养基，该细菌只能降解苯酚，则中应加苯酚，苯酚浓度的不同会影响细菌的数量。（2）微生物接种的常用方法有平板划线法和稀释涂布平板法。没有接种，作为对照实验。为防止水分污染培养基，防止水分过快挥发，采用固体平板培养细菌时进行倒置培养。（3）平板中菌落数目是21的操作错误，应舍弃，则另三个平板中菌落数的平均值为249。由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。考点：考查微生物培养的知识。点评：难度中等，理解微生物的培养基以及接种和统计的方法。22氢气是一种清洁能源，可由产氢菌群无氧发酵产生。科研人员从厌氧活性污泥中获得产氢菌群，并利用硫酸纤维素钠和聚二甲基二烯丙基氯化铵能形成中空微胶囊的特性将其固定化。在此基础上比较固定化产氢菌和游离产氢菌的菌体浓度随时间的变化、不同温度条件下氢气产率的变化，结果如下图。请分析回答：（1）本实验中，固定化产氢菌采用的方法称为_。（2）分离纯化产氢菌的方法有平板划线法和_法，由图1可知，与游离的产氢菌相比，固定化的产氢菌培养后菌体浓度增加较快，其主要原因是_。（3）由图2可知，固定化产氢菌生产氢气的优势表现在氢气产率高、_。（4）实验中使用的发酵培养液成分如下表：培养液成分葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母汁NaClK2HPO4半胱氨酸微量元素含量（g/L）2042121.50.5适量其中为产氢菌群提供氮源的成分有_。培养基配制时，培养基灭菌采用的最适方法是_，灭菌与调pH的先后顺序是_。（5）在生产实践中，为了充分发挥固定化产氢菌的优势，除了探究固定化产氢菌发酵所需的适宜条件外，还需探究_。【答案】 包埋法 稀释涂布平板 微胶囊有利于形成无氧的环境，便于产氢菌的生长繁殖 对温度变化适应性更强 蛋白胨、牛肉膏、酵母汁、半胱氨酸 高压蒸汽灭菌 先调PH，后灭菌 固定化产氢菌可重复使用的次数【解析】试题分析：本题以产氢菌为素材，考查固定化细胞、培养基、灭菌等相关知识，考查学生的分析实验结果和图文信息转换能力，从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题。解析：（1）根据题干“利用硫酸纤维素钠和聚二甲基二烯丙基氯化铵能形成中空微胶囊的特性将其固定化”，则固定化产氢菌采用的方法称为包埋法（2）分离纯化产氢菌的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，由图1可知，固定化的产氢菌培养后菌体浓度增加较快，主要原因是微胶囊是中空的，有利于形成无氧的环境，便于产氢菌的生长繁殖。（3）由图2可知，固定化产氢菌生产氢气的优势是氢气产率高、对温度变化适应性更强。（4）蛋白胨、牛肉膏、酵母汁中含有蛋白质，半胱氨酸是蛋白质的基本单位之一，元素组成为C、H、O、N，则能提供氮源。培养基配制时，培养基灭菌方法是高压蒸汽灭菌，而且先调PH，后灭菌，防止杂菌污染。（5）为了充分发挥固定化产氢菌的优势，需要探究固定化产氢菌发酵所需的适宜条件，还需探究固定化产氢菌可重复使用的次数。点睛：固定化技术包括包埋法、物理吸附法和化学结合法（交联法），由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法。固定化细胞既能与反应物接触，又能与反应物分离，还可以重复利用。灭菌是指利用强烈的理化因素杀灭物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子；高温杀菌可以破坏蛋白质、核酸等高分子化合物的活性，可分为灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。细菌培养过程中接种针、接种环等金属用具采用火焰灼烧灭菌，培养基进行高压蒸气灭菌，玻璃器皿进行干热灭菌；高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，一般压力在100KPa，温度在121的条件下，维持15-30分钟用于培养基的灭菌。培养基一般含有水、碳源、氮源和无机盐。23（12分）根据生物技术实践的有关知识，回答下列问题：（1）下图表示利用生产果酒装置继续生产果醋过程中培养液PH变化情况。由图可知，接种醋酸菌是在 时刻，此时还需进行的操作是 。（2）为了分离纯化果酒发酵中的酵母菌，若用平板划线法接种，则此过程中通过接种环在固体培养基表面进行 操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，可以得到由单个细胞形成的菌落；若用稀释涂布平板法接种，则必须将菌液进行一系列的 ，然后分别涂布到固体培养基表面进行培养。（3）菊花的组织培养一般选择 作为材料。（4）用凝胶色谱法分离淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较快的蛋白质相对分子量较 。【答案】（1） c 适当升高温度并通气 （2）连续划线 梯度稀释（3）未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 （4）大【解析】试题分析：由图可知，接种醋酸菌是在c时刻，此时还需进行的操作是适当升高温度并通气利于醋酸菌的生长，若用平板划线法接种细菌的时候需要在固体培养基表面进行连续划线的操作，若用稀释涂布平板法接种需要进行一系列的梯度稀释，组织培养利用植物的茎尖，茎段培养新植物体，菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝作为材料，用凝胶色谱法分离淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较快的蛋白质相对分子量较大。考点：考查微生物的培养分离，植物组织培养。24为解决塑料袋造成的“白色污染”这一问题，某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌，以下是该同学从土壤中寻找并筛选目的菌的流程，请回答下列问题：（1）对培养基灭菌常用的方法是_。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是_。（2）号培养基属于_（按功能分）培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为_。号培养基从物理性质来看，_（填“能”或“不能”）添加琼脂。（3）该同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为20.4，则每毫升样品中的菌落数是_个。（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL）（4）假设该同学发现培养基上细菌数目过多而连成一片,说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因:_；措施:_。【答案】 高压蒸汽灭菌法 将未接种的培养基在37（或适宜温度）恒温箱中倒置培养一段时间（或12天），观察是否有菌落生成 选择 稀释涂布平板法 不能 1.02106 菌液浓度过高（或稀释倍数不够）可以通过增大稀释倍数解决（或原因：培养过程中被杂菌污染） 严格无菌操作程序【解析】试题分析：本题主要考查微生物的分离和培养相关知识点，微生物这部分内容是高考试题的一个热点一般体现在对生物工程中的应用，考查的知识点有微生物的无菌操作、微生物的分离以及产品的提取，注意总结。（1）培养基常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，可以将未接种的培养基在37（或适宜温度）恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，若有菌落生成，则已经被污染，否则没有被污染。（2）要筛选能降解聚乙烯塑料的微生物，应选择以聚乙烯塑料为唯一碳源的选择培养基。图号培养基上采用的接种方法为稀释涂布平板法。号培养基为固体培养基，因此不需要加凝固剂-琼脂。（3）根据题意可知，每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值体积稀释倍数=20.40.2104=1.02106个。（4）如果培养基上细菌数目过多连成一片，可能的原因是菌液浓度过高或操作过程不是无菌操作，还可能是接种时没有把细菌分散开，采取的措施有：可以通过增大稀释倍数解决（或培养过程中被杂菌污染；严格无菌操作程序。或利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针灭菌处理；每划一个新的区域都要对接种针进行灭菌处理）。25【选修1生物技术实践】急性肠胃炎是由细菌通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水中细菌的含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：（1）为检验大肠杆菌的含量时，该小组将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为44、43和42，据此可得出每升水样中的活菌数为_。但通常计算出来的活菌数目往往比实际的数目低，原因是_。（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要对照组？_。为什么？_。（3）有三种材料或用具需要消毒或灭菌：培养细菌用的培养基与培养皿；玻璃棒、试管和烧瓶；实验操作者的双手。其中需要消毒的是_，需要灭菌的是_。（4）下图所示的四种菌落分布中，不可能由稀释涂布平板法得到的是_。（5）已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸、产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具有塞子的试管，应如何判断水样中是否有大肠杆菌？_。【答案】4.3107当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格）D通过无菌操作向试管内注入一定量待测水样，再注入适量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液，塞上塞子，混匀后置于37恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌，否则，说明水样中无大肠杆菌【解析】分析：微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等微生物的培养的关键是无菌操作，接种后的培养皿应该倒置培养。分类或筛选微生物常用的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。可以根据菌落的特征进行初步的鉴定或分类。（1）由由题意知1ml水样中的菌落数是（44+43+42）30.1100=4.3104个，每升水样中的活菌数为3.8104103=4.3107当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落导致通常计算出来的活菌数目往往比实际的数目低；（2）因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格），所以用该方法统计样本菌落数时是否需要对照组；（3）在使用操作过程中，实验操作者的双手应当进行消毒，培养细菌用的培养基与培养皿应当进行灭菌，玻棒、试管、烧瓶和吸管等玻璃器皿应当进行干热灭菌；（4）题干所述方法为稀释涂布平板法据图分析，A、B、C三个培养皿的菌落分别均匀，应该属于稀释涂布平板法得到的，D属于平板划线法接种得到的，不可能是稀释涂布平板法得到的，故选D；（5）通过无菌操作向试管内注入一定量待测水样，再注入适量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液，塞上塞子，混匀后置于37恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌，否则，说明水样中无大肠杆菌。26生物选修1:生物技术实践牛的瘤胃中含有多种厌氧细菌，下列过程是从瘤胃中分离产脲酶细菌的流程图，回答有关问题。（1）图中选择培养的目的是_。为保证该细菌能正常生长繁殖,必须放在_环境条件下培养。（2）鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后,其菌落周围的指示剂将变成_色,简述其原因_。【答案】 通过选择培养分离出产脲酶细菌并增加其浓度，确保能从样品中分离得到所需细菌（扩大培养） 无氧 酚红 红 细菌产生脲酶，分解尿素产生NH3，使培养基pH升高，酚红指示剂呈红色反应【解析】试题分析：鉴定分解尿素的细菌：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够产生脲酶，并分解尿素。（1）图中为选择培养，目的是通过选择培养分离出产脲酶细菌并增加其浓度，确保能从样品中分离得到所需细菌，即该菌是扩大培养过程。根据题干信息可知，该菌是厌氧菌，所以应该提供无氧环境。（2）过程是鉴定产脲酶细菌，由于脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性，能够使得酚红指示剂呈红色反应，所以应该在培养基中加入酚红。【点睛】解答本题的关键是了解选择培养的目的，并掌握鉴定产脲酶细菌鉴定的原理。27【生物-选修1：生物技术实践】人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮元素，同时净化环境。请回答下列相关问题：(1)将样液进行一系列的梯度稀释，然后采用_法接种培养。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_旁进行操作。接种后的平板应_放于37 的恒温箱中培养。(2)用_的培养基可分离获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分，该培养基属于_培养基。若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，则其菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生_，使pH升高，培养基中加入的酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力_。【答案】（15分，除标注外每空2分） (1)稀释涂布平板 酒精灯火焰 倒置(2)以尿素为唯一氮源 选择 红色环带 氨 越强（1分）【解析】（1）分离细菌时将样液进行一系列的梯度稀释，对应于稀释涂布平板法。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，接种后的平板应倒置放于37 的恒温箱中培养，以避免杂菌污染。（2）分离获得能分泌脲酶的细菌可选用以尿素为唯一氮源的培养基。从功能上划分，该培养基属于选择培养基。由于培养基中加入酚红指示剂，若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，尿素被分解产生氨，使pH升高，菌落周围会出现红色环带。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。【考点定位】本题考查微生物的培养与分离。28(12分) 解磷微生物能分解有机磷，可降低水体富营养化程度。下图是从湖泊污泥中筛选解磷微生物的过程示意图，下表是分离纯化的结果。请回答下列问题：（1）培养基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及无菌卵黄液，其中 主要提供有机磷。从土壤中富集解磷微生物时，应选用 (固体、液体)培养基。（2）在倒平板前，应对玻璃器皿和培养基灭菌，灭菌方法是 。配制成l0-1浓度稀释液时，用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有 mL无菌水的试管中，并依次配制10-210-10的梯度稀释液。（3）过程、为菌种分离纯化的过程，接种方法分别为 、 。（4）分析菌种的分离纯化结果，应选择为_号菌落进行扩大生产，原因是 。【答案】（除注明外，每空1分，共12分）（1）卵黄 液体 （2）高压蒸汽灭菌（2分） 9（3）稀释涂布平板法（2分） 平板划线法（4）3（2分） 透明圈/菌落大，解磷能力强（具有相对较大的透明圈，解磷能力强）（2分）【解析】试题分析：（1）卵黄中富含卵磷脂，主要为解磷微生物提供有机磷。从土壤中分离微生物时，应选用液体培养基。（2