山东省单县鸡大肠杆菌病病原的离与鉴定及药敏试验.doc

本科毕业论文（设计）题 目 山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离-与鉴定及药敏试验系 部 动物医学系 专 业 动物医学 年 级 2007级 学 号 222007602033167 姓 名 王亚 指 导 教 师 唐建华（副教授） 成 绩 2011年5月23日 目 录任 务 书.1文献综述.2开题报告.6正 文.8摘 要.8引 言.8材 料.9方 法.10结 果.11讨论与分析.14 参考文献.16致 谢.17指导教师评阅表.18交叉评阅表.19答辩记录表.2023西南大学本科毕业论文（设计）任务书论文（设计）题目 山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验 系别、专业 动物医学系 动物医学 学生姓名 王亚 学号 222007602033167 指导教师姓名 唐建华 开题日期 2010年11月10日 论文（设计）的主要内容（技术指标）与要求： 鸡大肠杆菌感染是危害养鸡业的主要细菌性传染病，无菌采取单县各大鸡场中疑似大肠杆病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，通过结合流行病学、临床学、病理学、生物化学和传染病学，进行分离与鉴定，最终确诊为鸡大肠杆茵病。从部分养鸡场分离出的细菌进行药敏试验，通过药敏试验筛选出敏感药物，为治疗与预防提供理论依据和实际应用参数。独立完成课题研究和论文撰写，要深入实地调查了解并收集相关数据资料进 度 安 排2010.102010.11 查阅资料，选题；2010.11 开题；2010.122011.03 调查研究，实验诊断，完成论文初稿 2011.032011.04 补充数据材料，完成论文；2011.05 论文答辩；系意见： 注：1、任务书由指导老师填写。 2、任务书必须在第七学期13周前下达给学生。文献综述我国鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验王亚西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌 402460摘要：大肠杆菌病是在世界范围内影响养殖业发展的主要细菌病之一, 常招致巨大的经济损失，有效防治大肠杆菌病一直是养殖业的一项重要课题。近几年随着我国养殖业迅速发展和集约化程度的大大提高,大肠杆菌病流行势头愈加迅速。无菌采取病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，进行大肠杆菌病原的分离培养与鉴定。本综述主要从大肠杆菌病的概念与临床症状入手，梳理总结了当前有关专家学者对鸡大肠杆菌病相关内容的研究，拟从中发现研究空白，为论文的写作提供依据，以便于进一步对山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定奠定基础。关键词：大肠杆菌 分离与鉴定 药敏试验 综述大肠杆菌病是家禽中最常见的病原菌之一。由于该病在一些养殖场中严重发生，兽医临床上抗菌药物不得不大量地被应用，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，耐药谱不断扩大，形成恶性循环；同时加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留，给养禽业的持续发展和人类的身体健康带来潜在危害。目前，国内有关专家学者对大肠杆菌病做了大量的研究，涉及到的研究成果也颇为丰富，为我国鸡大肠杆菌病的研究提供了重要的理论参考。1.大肠杆菌病的概念与临床表现大肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌(Escherichia coli，Ecoli)引起的禽类肠道传染性疾病的总称1。本病为革兰氏阴性、兼性厌氧性、无芽孢的短杆菌，具有周鞭毛和菌毛2。可以引起胚胎死亡、脐炎、败血症、肉肿、全眼球炎、气囊病、腹膜炎、输卵管炎等一系列病症，并且还常常与病毒和其它细菌性疾病并发。病鸡精神沉郁,闭目呆立或蹲地缩成一团,羽毛蓬乱,两翼下垂,饮食欲减退或废绝。部分病禽跛行,跗关节肿胀,失明,张口喘息,呼吸困难,有的排黄绿色稀粪或血粪,死前鸡冠、颜面呈紫色3。2.大肠杆菌给人类和动物造成的危害根据鞠洪涛的大肠杆菌耐庆大霉素基因定位,可以清晰的看到，全球每年因感染产毒素性大肠杆菌至少可导致6 .5亿人发病,并引起约80万5岁以下儿童死亡。其中，我国许多地区大肠杆菌在腹泻病人的病原谱中占首位4。而恽时锋，潘震寰等人分析认为,O157型大肠杆菌曾在日本等国家引起食品污染事故,致病性较严重, 通常会导致患者腹泻、脱水甚至死亡。在兽医临床上, 致病性大肠杆菌一年四季均可致病, 其中，仅鸡的发病率就达到10%69% , 死亡率约为3.8%72.0 %5。另外，张敬礼，王双山在大肠杆菌病的防治研究提出，该病在所有家禽群中，发病率均高、病程长，且因与其他呼吸道疾病如慢性呼吸道疾病混合或并发感染，是大肠杆菌的主要特征。大肠杆菌病不但造成各种家禽生产能力下降，而且还影响到产品质量。尤其是20世纪80年代以来, 随着我国养殖业集约化程度的不断提高, 畜禽大肠杆菌病在各地的流行趋于严重, 在受不利环境因素和其他传染因子应激的畜禽群中, 大肠杆菌感染一直居于首位，严重影响着我国畜牧养殖业的发展6。3.大肠杆菌病流行特点高福、苏敬良指出，大肠杆菌是哺乳动物和禽类肠道的正常菌群，并且在饲料、饮水、鸡的体表、孵化场、孵化器等各处普遍存在，该病主要是由大肠杆菌污染饲料、饮水、用具及环境后，细菌经鸡的呼吸道、消化道和种蛋等途径进行传播7。而顾城均、吴光明则认为，大肠杆菌发病无明显季节性，一年四季均可发生。尤以冬季和气候多变季节高发，各种日龄、品种的家禽均可发病。同时，大肠杆菌发病率与死亡率因受各种应激因素影响而有较大差异8。另外，大肠杆菌在饲料、饮水、鸡的体表、孵化场、孵化器、鸡舍等地方普遍存在，其中在种蛋表面、种蛋内、孵化过程中的死胚分离率较高。若混有其他病原体感染因素的影响，则大肠杆菌感染率更为严重。如与禽流感、家禽传染性支气管炎、败血支原体、传染性鼻炎、传染性法氏囊、禽霍乱、葡萄球菌等病并发，大肠杆菌发病率就较高9。4.大肠杆菌的分离与鉴定及药敏试验研究进展：众多专家对大肠杆菌的分离与鉴定的方法和结果颇为相似，但药敏试验的结果差异很大。兰罗勋、陈红等人的研究中得出结果为：该菌对氟苯尼考、羟苄青霉素、痢特灵高度敏感，对庆大霉素、大观霉素、四环素、卡那霉素中度敏感，对恩诺沙星、链霉素、氧氟沙星、新霉素、复方新诺明不敏感，青霉素、头孢唑啉无抑菌作用10。马萍等人研究结果表明：大肠杆菌对痢特灵、新霉素，阿米卡星、庆大霉素十分敏感，绝大多数菌株对羧苄青霉素、复方新诺明、氨苄西林等敏感11。王贵升等人认为：同一血清型的分离株对药物的敏感性也表现出不同程度的差异性。O2型的SD9菌和SD10菌共敏感药物为63.64,078型的SD2、SD3和SD5菌共敏感药物为68.18，O138型的SD7菌和SD8菌共敏感药物为77.2712。5.大肠杆菌病防治现状刘倍增、张强认为，抗菌药物和大肠杆菌疫苗在养殖业上广泛使用, 极大地促进了规模化、集约化畜牧业的发展。但抗生素的广泛持续和不当使用造成了畜禽产品中的药物残留, 抗菌药物残留除了可能对消费者造成直接的急、慢性毒性外, 还有可能产生过敏反应, 随着抗生素使用时间的延长, 多重耐药性的问题越来越严重, 目前我国家禽大肠杆菌耐药性严重而复杂, 几乎对所有的抗菌药物都已经产生了耐药性13。中国兽医药品监察所对其保存的大肠杆菌进行药敏试验发现,20世纪50年代分离的菌株基本上不存在耐药性问题；20世纪60年代的菌株耐药谱也较窄,在15种目前常用的抗生素中仅对链霉素和四环素具有耐药性,而且耐药性仅为20%。另外，刘栓江、杨汉春、王建舫提出，从20世纪70年代起,大肠杆菌的耐药性迅速增加,并出现了多重耐药的菌株;20世纪8090年代分离的菌株多为多耐药菌株；20世纪90年代分离的菌株有87%可同时耐5种以上的抗菌素12。家禽大肠杆菌耐药性产生的速度极快, 与我国目前的家禽养殖环境、养殖方式和技术水平密切相关。通过在山东地区对盐酸环丙沙星进行连续3 年的耐药性调查发现,1996 年盐酸环丙沙星治疗大肠杆菌的有效率为100%, 1997年为63.7% ,而其毒力因子就能成为致病的菌株，故迄今对其所引起的疾病尚无理想的疫苗来预防14。6.山东省单县鸡大肠杆菌病研究现状近年来，山东省单县畜牧业日益扩大。单县在畜牧业十二五发展规划中指出，立足资源优势，着力推进“12322工程”。即一个中心，以保持畜牧业的持续稳定健康发展为中心；两个确保，确保不发生重大动物疫情，确保畜产品质量安全；三个创新，即创新观念，用工业化管理的理念谋划发展畜牧业15。“十一五”期间，畜牧业保持持续健康的发展态势，畜牧业已经成为单县农业中的一个大产业，成为建设现代农业增收的主导产业和重要渠道16。单县畜牧局贾成立指出（2010），近年来鸡大肠杆菌病严重威胁着家禽业的发展，给养殖户造成较大的经济损失。市场上治疗大肠杆菌病的药品繁多，其主要成分往往不写明，造成养禽户在发生疾病时用同一种成分、不同品名的药物替换使用，既增加损失，又延误病情。在测得药品对该菌的敏感程度后再用药，效果较好17。 参考文献：1蔡宝祥. 传染病学（第四版） 中国农业出版社,2005:5070.2恽时锋，潘震寰，郑明球鸡大肠杆菌病研究进展J畜牧与兽医，1998，30(6)：2772803李世云.鸡大肠杆菌病的诊断与防治z.中国兽医网.禽病防治.4鞠洪涛.大肠杆菌耐庆大霉素基因定位M . 长春: 解放军军需大学1999(2)3034.5恽时锋.潘震寰，郑明球鸡大肠杆茵病研究进展J畜牧与兽医，1998(6)98101. 6张敬礼，王双山大肠杆菌病的防治研究J安徽农业科学，2008，36(18)：764676477Calnek B W主编禽病学(第10版)M高福，苏敬良译，北京：中国农业出版社. 2005：1581718吴纯柱，桂德旺淮南市鸡大肠杆菌病流行情况及诊治效果分析J现代农业科技，2007(20)：1681699刘倍增, 张强. 肉仔鸡大肠杆菌病的防治措施J . 中国家禽,2002(10)：131137.10兰罗勋,陈红.鸡大肠杆菌病的病原菌分离鉴定和药敏试验J安徽农业科学，2007，35(2)：44244311马 萍,原小强,田爱君. 鸡致病性大肠杆菌病病原分离鉴定与药敏试验J.甘肃畜牧兽医.2007(193):1820.12王贵升，费聿锋.山东省鸡大肠杆菌部分流行菌株的分离鉴定J.中国兽医杂志2006(42):2830.13刘栓江,杨汉春,王建舫.鸡源大肠杆菌的耐药性监测J.中国兽医杂志2004(6)4852.14邹玲，任慧英鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验.中国畜牧兽医，2007，34(2)：11912115冯翔宇.肠出血性大肠杆菌毒力因子研究进展J.医学综述,2002(8)4453.16单县畜牧业十二五发展规划 单县畜牧局 2010(7):35.17贾成立.齐鲁牧业报自制药敏纸片治疗鸡大肠杆菌病,2004 单县畜牧局西南大学本科毕业论文（设计）开题报告论文题目山东单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验系别专业 动物医学系动物医学专业年 级2007级开题日期2010年11月13日学 号222007602033167姓 名王亚指导教师唐建华1.本课题研究意义： 随着山东省单县养殖业的迅速发展和集约化程度的大大提高，鸡大肠杆菌病流行势头愈加明显。该病原与其他传染病在临床上主要以混合感染、继发感染或慢性感染为主，加之人们不够重视，因此极易在临床诊断中造成误诊或漏诊。本研究从鸡大肠杆菌的病原、流行病学、临床症状入手，通过病理解剖、实验室诊断等方面进行实际操作，旨在为大肠杆菌病的防治提供一定的参考。2.研究内容：1.单县鸡大肠杆菌现状1.1大肠杆菌对当地养殖业的损失剖析 对山东省单县六和养殖场、华英禽业等养鸡场进行实地的流行病学调查与取样。1.2主要鸡场大肠杆菌流行病学调查 在不同的季节与时间进行调查，分析鸡大肠杆菌病病原的流行情况。2. 鸡大肠杆菌临床诊断及实验室诊断2.1 临诊诊断2.2 实验室诊断2.2.1病理剖检 对病死鸡病理剖检及大体病变的观察2.2.2 组织病理学检查 提取病死鸡心、肝、脾、肺、肾等器官进行观察和健康组织的比较2.2.3病原分离培养 将病料无菌接种于普通营养琼脂平板，挑取分离培养的单菌落，进行革兰氏染色、镜检2.2.4药敏试验 将细菌纯培养物用无菌生理盐水洗下稀释并与麦氏比浊管进行比浊，选取30 xlOm个mL浓度的菌悬液用无菌棉拭子蘸取稀释液均匀涂布于普通平板经室温干燥35min后每块平板贴药敏纸片3片371824 h培养。2.3 实验结论分析3.技术路线、研究方法和研究进度：（1）技术路线：调查单县鸡大肠杆菌病的流行现状抽取个别的样本进行分析对病死鸡病理剖检及大体病变的观察提取病死鸡心、肝、脾、肺、肾等器官进行观察和健康组织的比较病原分离培养、药敏试验将病料无菌接种于普通营养琼脂平板挑取分离培养的单菌落，进行革兰氏染色、镜检运用中兽医知识研究对抗大肠杆菌病的有效措施实验结论分析提出防治鸡大肠杆菌病的对策。（2）研究方法：在调查研究、收集资料的基础上，运用病理学、临床诊断学、家畜传染病学等相关学科进行研究，并运用实际调查法、实验操作等方法进行分析。（3）研究进度：2010.102010.11 查阅资料，选题；2010.11 开题；2010.122011.03 调查研究，实验诊断，完成论文初稿 2011.032011.04 补充数据材料，完成论文；2011.05 论文答辩；4.导师意见： 指导教师（签名）：年 月 日5.系（部）意见： 系（盖章） 年 月 日山东省单县鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验王亚西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌 402460摘要：鸡大肠杆菌感染是危害养鸡业的主要细菌性传染病，无菌采取单县各大鸡场中疑似大肠杆病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，通过结合综合流行病学、临床学、病理学、生物化学和传染病学，进行分离与鉴定，最终确诊为鸡大肠杆菌病。从部分养鸡场分离出的细菌进行药敏试验，通过药敏试验筛选出敏感药物，为治疗与预防提供理论依据和实际应用参数。关键词：大肠杆菌；分离；鉴定；药敏试验 The Separation,identification and Antimicrobial Susceptibility Test of Chicken Colibacillosis in Shanxian ,Shandong WANG Ya Department of Veterinary Medicine ,Southwest University, Chongqing, 402460 ,ChinaAbstract: Chicken colibacillosis infection is the major infectious diseases in poultry industry. Sterilely resorting to visceral organs, such as livers ,spleens, lungs of illness, chicklings that are suspected colibacillosis of each large chicken places in Shanxian,by the means of combing with epidemiology,clinical, pathology, biochemistry and epidemiology,we can separate and identificate to diagnose whether it is colibacillosis or not. By the means of form dyeing and Biochemical tests and then antimicrobial susceptibility test on bacterium that is separated from part chicken places,we can screen some Sensitive drugs and find more effective proprietary to Provide theoretical basis and practical parameters of treatment and prevention.Key words: Colibacillosis；Separation and Identification；Antimicrobial Susceptibility Test引言鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株引起的一类疾病的总称1。大肠杆菌致病性菌株的致病因子主要由该病原体的三个特征所决定：侵袭力，感染力，致病性潜力。该菌主要有三个原类型，即菌体抗原，表面抗原，鞭毛抗原。该菌对外界的抵抗能力不强，一般6015min便可致死，对一般消毒药的抵抗力也很弱，但常用的消毒药水均能将其杀死2。 大肠杆菌病可以引起胚胎死亡、脐炎、败血症、肉肿、全眼球炎、气囊病、腹膜炎、输卵管炎等一系列病症，是家禽中最常见的病原菌之一3。由于该病在一些养殖场中严重发生，兽医临床上抗菌药物不得不大量地被应用，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，耐药谱不断扩大，形成恶性循环；同时加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留，给养禽业的持续发展和人类的身体健康带来潜在危害4。随着单县养鸡业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡大肠杆菌已成为鸡群中重要疾病之一。2010年9月，单县浮岗水库散养鸡舍所饲养的鸡于24天开始发病，两天之内，死亡21只。病鸡多精神沉郁，食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色，本实验室对单县送检的病鸡48只，病死鸡进行了剖检、病理学诊断和病原检测，确诊该鸡场发生了大肠杆菌病，筛选出对这些致病菌比较敏感的几种药物进行治疗，控制疫情。1 材料1.1 病料来源 所有病料来自于单县六和饲料公司、华英禽业、浮岗水库等六大鸡场提供的病鸡，初步确诊为大肠杆菌病，病鸡48只，其中死亡35只，死亡鸡死亡时间不超过24h，其中肉仔鸡、蛋雏鸡27只，产蛋鸡21只。 1.2 仪器及设备 光学显微镜、恒温箱、高压灭菌器、无菌实验台、微量移液器等（由山东省单县六和化验室提供）。1.3 培养基与试剂 麦康凯琼脂（NA）、伊红美兰琼脂、普通肉汤、营养琼脂（NA）验所用的培养基均参照兽医微生物实验指导制备。硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管（购于菏泽畜牧兽医学校）、药敏纸片购自单县畜牧兽医站(上海市医学化验所试剂厂生产)1.4 试验动物。小白鼠（购于菏泽畜牧兽医学校）和各日龄健康鸡（购自浮岗水库分散养殖场）。2 方法2.1 病理剖检 对送检的35只病死鸡进行了病理剖检及大体病变的观察。2.2 大肠杆菌的分离鉴定操作流程如下：样品在各种培养基上划线分离(置37培养24h)菌落形成 挑取菌落染色镜检 纯培养 培养特性检查 染色镜检 生化试验 致病力测定 药敏试验2.3病料采集 采集六大鸡场病死鸡各一只，无菌取心脏和肝脏。注射器自心脏采血1ml用于细菌分离培养，用灭菌后的外科手术刀片烧烙脏被膜后，再用接种环刺入肝实质取肝样做分离培养。 2.4 分离培养 以无菌操作的方法，将采取的病料，分别接种在普通琼脂平板、麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂，37恒温培养24h，然后观察。挑取表面光滑、边缘整齐、灰白色、半透明的单个微隆起小菌落，划线接种于肉汤中，在37恒温培养24h5。2.5镜检 挑取麦康凯琼脂平板上培养2O h的新鲜菌落,光滑、砖红色的单个菌落涂片，将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗；滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；滴加95%乙醇脱色约1530s,直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；滴加番红染液，复染1min，水洗、待干、镜检。结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色6，观察记录菌体形态和染色特征。2.6生化鉴定a、糖发酵试验 取可疑菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37培养23d，观察结果。 b、MR试验和VP试验 取可疑菌接种葡萄糖蛋白胨水，37培养23d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。c、吲哚试验 取蛋白胨水培养管先加少量乙醚，塞紧棉塞振摇试管，使乙醚与培养液充分混匀，静置试管架上片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂23滴，观察其颜色变化7。2.7致病性试验动物试验将分离菌接种于营养肉汤，于37恒温培养箱中培养24h。取健康小白鼠6只，分为A、B两组， A组3只，腹腔接种营养肉汤菌液，每只0.2mL；B组3只，腹腔接种等量的灭菌生理盐水作对照组，分别隔离饲养观察。取6只7日龄雏鸡，健康，也随机分为C、D两组，与小白鼠同样的方法，C组皮下接种营养肉汤菌液，每只0.2mL；D组接种等量的灭菌生理盐水，隔离饲养。2.8 药敏试验药敏纸片购于单县畜牧兽医站(上海市医学化验所试剂厂生产)，选取不同地区的分离株6株进行药敏试验。在无菌条件下将培养24h的肉汤培养物，用灭菌生理盐水作10倍稀释，取0.2mL滴加在普通琼脂平板培养基上，用灭菌棒涂匀，平板置室温下干燥35min，用无菌镊子将卡那霉素、新霉素、庆大霉素、呋喃妥因、四环素、链霉素6种药物的含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于20mm，纸片距平板内缘大于15mm8；置35恒温箱内1618h后，观察结果。3 结果3.1 病理剖检 剖检时可闻到特殊臭味，见病鸡胸腔、腹腔内有大量黄色干酪样渗出物腹腔内大块黄色块状渗出物；肝脏肿大，表面瘀血，有散在的白色小坏死灶；纤维性心包炎，心包浑浊增厚，心包腔内充满大量淡黄色液体，心包膜及心外膜上有白色纤维蛋白附着，严重者可见心包膜与心外膜粘连；肺脏瘀血，表面的纤维性渗出物明显；肠黏膜弥漫性出血，整个肠管呈紫红色；肾脏体积肿大，呈紫红色，肾脏出血，水肿，质脆，一触即烂。3.2 大肠杆菌的分离培养 麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为1.52.5毫米的小菌落（见图1）；在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落（见图2）；在普通琼脂斜面上的菌落为灰白色；在普通肉汤中呈均匀浑浊，管底有灰白色沉淀，并有粪臭味。 图1 麦康凯琼脂Figure 1 MaiKangKai agar 图2 伊红美蓝琼脂Figure 2 Eosin methylene blue agar3.3 形态学观察 经镜检可见到革兰氏阴性菌，两端钝圆，有长约1.53.O微米的短小杆菌，偶有23个菌体相连，无芽孢。（见图3）图3 镜检结果Figure 3 Microscopy result3.4 生化鉴定将分离到的菌株，经生化试验鉴定，分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，不分解蔗糖,MR试验呈阳性，VP试验为阴性，吲哚试验阳性,硝酸盐试验阳性，枸橼酸盐试验阴性，硫化氰试验阴性。此结果符合大肠杆菌的特征，见表1：表1 分离菌生化试验结果Table 1 The biochemical test results of separating bacteria生化试剂生化试剂乳糖构椽酸盐葡萄糖VP试验甘露醇靛基质+麦芽糖MR试验+蔗糖硫化氢阿拉伯糖尿素酶山梨醇吲哚+硝酸盐+注：+表不阳性；一表不阴性； 表不阳性并产气9。3.5 致病性实验小白鼠试验结果：接种36h内A组小白鼠全部死亡，剖检可见肝肿大、表现出点状出血和灰白色坏死灶，脾脏瘀血，肺脏出血等明显病理变化，从死亡小白鼠的心、肝、脾等病料中均能回收到接种菌；B组小白鼠饲养1周后全部存活，剖检无病理变化。雏鸡试验结果：接种1周后，C组雏鸡全部死亡，用死鸡的心血、肝、脾接种于普通营养琼脂培养基上，经37培养24h后，有菌落生长，革兰氏染色及生化化鉴定表明：此菌与接种菌为同种细菌；D组雏鸡则正常。动物试验结果表明：此次分离出的细菌对小白鼠和雏鸡均有较强的致病性。3.6 药敏试验卡那霉素、新霉素、庆大霉素等药物为高度敏感；呋喃妥因、四环素等药物为中度敏感；链霉素不敏感；见表2：表2 耐药性实验结果统计 Table 2 The statistics of resistance experiment results药敏纸片抑菌圈直径mm1号菌株2号菌株3号菌株4号菌株5号菌株6号菌株呋喃妥因109111098卡那霉素222020172121庆大霉素181919202019四环素131012101114新霉素222123202021链霉素799787*抑菌圈直径15.120毫米者为高度敏感；直径10.115毫米者为中度敏感；直径在l0毫米以下者为耐药10。4 讨论与分析大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色均一，有周身鞭毛，致病性大肠杆菌还能产生毒素。大肠杆菌有3种抗原：菌体抗原(OAg)、荚膜抗原(KAg)和鞭毛抗原(HAg)，这3种抗原形成了众多的血清型11。高崧12等关于禽致病性大肠杆菌的流行病学调查表明，禽病原性大肠杆菌的优势血清型与时间、地区及实地状况密切相关。因此，开展特定地区鸡大肠杆菌的流行病学调查成为大肠杆菌病防治的重要基础。在生产当中用药不规范，疗程不当，用量不足，长期使用同一类药物或长期在饲料、饮水中加入预防性用药，均可使细菌产生抗药性。为防止细菌产生耐药性，应采取以下措施：严格掌握适应性；避免滥用抗菌药；确定有效的剂量和疗程；严格遵守抗菌药物局部使用、预防应用、饲料添加及联合使用的相关原则；有效地分期交替使用抗菌药；根据细菌耐药机制和抗菌药结构的关系，寻找和研制出新的尤其对耐药菌有抗菌活性的抗菌药。大肠杆菌是一种条件性致病病原微生物，它广泛存在于饲料、垫草、粪污和禽舍的灰尘中，也作为常在菌，存在于正常动物的肠道中，当机体抵抗力下降，特别是应激情况下，细菌的致病性即可表现出来，使感染的鸡发病。因此，防治鸡大肠杆菌病应改善鸡舍卫生条件，减少发病率。良好的环境对于有效地控制大肠杆菌感染及泛滥十分重要，对此，可以采取以下措施：1.注意种蛋卫生经蛋传递是本病重要的传播方式，因此，在种鸡场应及时收集和熏蒸消毒，污染严重的不应该选作种蛋，对轻度污染上了粪便的种蛋可用刀片刮净。由于雏鸡对温度的要求很高，在育雏前4天，保证育雏室的温度达到3334，以后每周均匀地下降2，直到30天育雏期结束，使室温维持在1821左右13。育雏期间在供暖炉上适时蒸发点食醋或定期带鸡喷雾消毒(防疫期间除外)，这样既可以保持空气湿润，又可保持地面干燥，效果很好。2加强卫生管理饲料、饮水、空气是本病的主要传播媒介，应加强对粪便的处理及鸡舍空气的消毒与净化。对鸡舍粪便要及时清理，垫料要经常更换。鸡舍要保持清洁，水槽要经常清洗，保持干净，避免饮水被污染。要保持鸡舍通风，空气清新，结合不同种类，日龄情况提供相应适宜的室温、湿度，降低鸡舍灰尘含量，尽可能消除环境所导致的应激因素。3适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵抗力由于大肠杆菌是一种极易产生抗药性的细菌，因此使用对症性药物时还应交替使用，以提高药效。在饲料中添加一些维生素A、E对治疗本病也有一定帮助。不定期饲喂乳酸菌片，维持鸡肠道正常菌的平衡，减少致病性大肠杆菌的侵入14。4免疫预防接种免疫预防接种疫苗是预防鸡大肠杆菌病的重要措施，鉴于各种疫苗的特点不同，因此，选择适宜的大肠杆菌疫苗对鸡免疫接种，是获得免疫成功的前提和基础。由于大肠杆菌血清型多，不同血清型抗原性不同，因此市场上的疫苗具有一定的局限性。在常发病的养禽场，可从本场病禽中分离出致病性的大肠杆菌，制成自家多价灭活疫苗。建议在雏鸡715日龄、2535日龄、120140日龄各免疫一次15。5.结论本试验从可疑病鸡分离到可疑菌经形态学及培养条件观察、生理生化实验分析鉴定，鉴定为鸡大肠杆菌的感染，由于条件不足没做大肠杆菌的血清型鉴定。根据药敏试验结果，本试验中，可以看出鸡大肠杆菌对卡那霉素、庆大霉素、新霉素等药物高度敏感；对四环素、呋喃妥因等药物中度敏感；对链霉素产生耐药性表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌。参考文献：1恽时锋，潘震寰，郑明球鸡大肠杆菌病研究进展J畜牧与兽医，1998，30(6)：2772802李世云.鸡大肠杆菌病的诊断与防治z.中国兽医网.禽病防治.3Calnek BW禽病学M高福，苏敬良，译10版北京：中国农业出版社，2005：1581714陈溥言.兽医传染病