课件：迪安诊断产品资料.ppt

感染现状,1. 感染人数多 5.5 亿人感染过结核 2. 患病人数多 现有活动性肺结核患,者500万,3. 潜伏感染人数多 受限于检测条件 较难统计， 2009 年流行病调查结果 为总人口的 44.5%（因采用PPD检 测，假阳性较多）,4. 新发患者多 仅活动性肺结核 2009,年新发病患 107 万,5. 死亡人数多 13 万/年,中国独立医学实验室领导者,T-spot.TB项目介绍,济南迪安医学检验中心 马凤美,其它检测技术 PPD（TST）实验 影像学检查 病理学诊断,实验室常规检测 细菌学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断 原检测手段,假阴性：免疫力低下或HIV人群，新生儿、老 弱人群，药物影响,假阳性：BCG接种人群，其它分支杆菌感染， 交叉污染,肺外的结核感染无法明确诊断 抗痨治疗疗效无法评价,无法排筛结核感染，造成生物制剂或移植手术 治疗后病患免疫力下降，引发结核，形成医疗 事故,现有检测的不足之处：,WHO关于血清学检测声明,2011年7月20日，世界卫生组织（ WHO ）正式声明，要 求禁止将 血清学检测方法 （抗原，抗体，蛋白芯片等）用 于肺结核和肺外结核的诊断。,WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB.,A substandard test with unreliable results, TB can be wrongly diagnosed, A serological test for diagnosing active TB disease is bad practice Problems of misdiagnosis, The inaccurate serological tests are costly, Selling substandard tests with unreliable results,T-SPOT.TB,结核感染T细胞检测,全球最精确的快速结核感染检测, ,-干扰素释放实验 （IGRAs，interferon- gamma release assays ） 酶联免疫斑点技术 （ELISPOT，Enzyme-Linked ImmunoSpot assay） 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6，early secreted antigenic target 6 ） 培养滤液蛋白10（CFP 10，culture filtrate protein 10 ）,技术背景,TB 抗 原 多 肽,T细胞,活化T细胞, 干扰素,-干扰素释放实验（IGRAs） 干扰素 检测阴性 干扰素 检测阳性,-干扰素释放实验（IGRAs）,结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效 应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细 胞因子（IFN-）。,因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核,潜伏感染者的诊断。,由于效应T细胞存活时间很短，而且具有 特异性，因此可以作为机体是否正处于被感 染的指标，无论是否有临床症状。,特点：,实验中采用的两个抗原 (ESAT-6 & CFP10) 均来自结核分枝杆菌基因组 RD1区域 所有的卡介苗均缺失 RD1 区基因,因此， 结核感染T 细胞斑点试剂盒不会受卡介苗接种影响,大多数环境分枝杆菌也缺失 RD1区基因（仅结核分枝杆菌复合群存在 RD1区）,技术背景,ESAT-6与CFP 10抗原,病人需就医两次 结果报告时间 48-72 小时 灵敏度有限，尤其是免疫低下者 特异性高 与卡介苗有交叉反应 与非结核分支杆菌有交叉反应 主观性判断,单次血液测试 第二日报结果 敏感度95.6%，免疫低下者仍有效 特异性97.1% 不受卡介苗接种影响 与非结核分支杆菌无交叉反应 每例样本均有阴阳对照, ,美国（CDC和儿科学会）；加拿大 （加拿大结核病委员会）；巴 西（卫生部） 英国（国家卫生和临床协会）；法国（国家卫生局）；西班牙 （西班牙肺病和胸部手术协会）；德国（德国抗结核病中央委员 会）； 意大利；瑞士（瑞士肺科协会）；荷兰（实用结核病控制 委员会）；丹麦（丹麦肺部医学会）；挪威（挪威公共卫生协 会）；芬兰（国家卫生和福利协会）；爱尔兰（国家结核病咨询 委员会）；葡萄牙；捷克共和国； 斯洛伐克； 波兰； 保加利亚； 克罗地亚 澳大利亚（国家结核病咨询委员会、传染病协会和澳大利亚风湿 病协会）；沙特阿拉伯；南朝鲜；日本（日本结核病预防协会） WHO 和 ECDC,-干扰素释放实验（IGRAs)在欧美国家得到全面 推广，并被写入诊疗指南,例1：英国结核诊疗指南, The National Institute for Health and Clinical,Excellence (NICE) released new clinical,guidelines for the use of innovative TB blood tests called interferon-gamma release assays (IGRAs) for diagnosing latent tuberculosis infection (LTBI) on 24th March 2011., 英国国家健康与临床卓越研究所（NICE）发布 了新的临床指南，指出用创新TB全血实验，即 -干扰素释放实验，来诊断潜伏性结核感染,例2：英国皮肤病学诊疗指南, 2009年英国皮肤病学中TNF-治疗前结核筛查指南：,2019/4/19,17,可编辑,例3：瑞士抗TNF-治疗前筛查潜伏感染指南,Experts in rheumatology, gastroenterology and pneumology agreed that:,1. A definite risk of tuberculosis exists with anti-TNF,agents, and all patients should be screened for tuberculosis and latent tuberculosis infection prior to any anti-TNF-a therapy.,2. The screening should be based on history,chest x-ray and an IGRA test.,瑞士关于抗TNF-治疗前筛查结核潜伏感染的指南中建议: 1. 要求所有接受抗TNF-治疗患者在治疗前都应该进行结核,病检测和潜伏感染的筛查,2. 筛查应该基于既往史，X摄片和干扰素释放实验（T- SPOT.TB方法）,用BD CPT 管或Ficoll提取液收集 外周血单个核细胞 过夜孵育，洗板，加入酶标二抗,结核特异抗原（ ESAT-6/CFP 10） 刺激结核特异的效应 T淋巴细胞使 其分泌 - 干扰素 加入底物工作液，用肉眼或放大 镜计算斑点数,效应T淋巴细胞分泌的 -干扰素 与膜板预包被的抗 -干扰素抗 体结合并固定在细胞周围 1 个斑点=1 个效应 T细胞,实验过程,阴性结果,阳性结果,阳性对照 （PHA ）,实验结果 空白对照 特异性94.1% 抗原A ESAT-6 抗原 B CFP10,灵敏度95.3%,临床应用及科室,临床应用 1 、结核病辅助诊断 /疗效评价, ,“菌阴”结核病患者的辅助诊断 肺外结核的鉴别诊断 抗痨治疗的疗效评价,2 、免疫力低下 /受抑制患者的结核诊断/感染筛查, ,使用生物制剂 /免疫抑制剂患者的结核感染筛查 HIV感染者/ 肾透析患者/器官移植患者,3 、儿童结核病的辅助诊断 4 、结核密切接触者 /高危人群的结核感染筛查,结核病患者的家属 /医务工作者 /监狱囚犯,5 、接触追踪,肺内/外结核辅助诊断,2周以上不明原因发热病人的结核感染排筛 诊断阴性结果95%以上可排除结核感染,结核/感染/呼吸科,生物制剂/免疫抑制剂使用前的结核筛查 肺结核与肺间质病的鉴别诊断 “结脑”和“狼脑”的鉴别诊断,写入由全国风湿病学权威署名的英夫利西,单抗治疗前结核预防与管理专家建议,风湿免疫科,腹水待查,肠结核的鉴别诊断 发热待查,生物制剂治疗前结核筛查（克罗恩病，炎,症性肠病）,消化科,移植，HIV感染者并发结核,神经内科，结核性脑膜炎的辅助诊断,肾内科，肾结核的鉴别诊断，血透患者的结核筛查 内分泌科，糖尿病患者的结核筛查,血液科，血液病治疗前的结核筛查（血液病合并活动性结,核）,生殖中心，盆腔结核造成不孕不育，试管婴儿手术前的结,核排筛,骨科，骨结核诊断,其他科室,合并结核的相关疾病, ,艾滋：据报道，艾滋病患者合并结核病感染者为15.9%50%。HIV的流行已成为全球结核病发病率及 死亡率第三次回升的主要原因，而结核病也是艾滋病患者最常见的机会感染和致死病因。 风湿病：日前判断风湿病患者是否存在LTBI，除通过详细询问病史、行x线胸片检查外主要依靠 PPD试验的结果。而大部分患者在接受肿瘤坏死因子(TNF-)拮抗剂治疗之前往往已接受免疫抑制治疗， 包括甲氨蝶呤(MTX)、糖皮质激素等，这导致PPD试验假阴性率升高。 糖尿病：我国9 240万成年人有糖尿病，1.482亿成年人处于糖尿病前期。糖尿病是活动性结核的一个 中度甚至高强度的危险因素。可能是因为持续的高血糖损害了针对结核杆菌的机体免疫。 血液病：血液病合并活动性结核发生率约为该发病率的15. 5 倍。因自身免疫功能低下, 大部分患者长 期用免疫抑制剂，PPD 试验阴性占多数，同时合并其他感染，使误诊率较高。 抗TNF治疗：广泛应用于免疫介导的炎性疾病(immunemediated inflammatory diseases，IMID)， 如类风湿关节炎(RA)、强直性脊柱炎(AS)、银屑病关节炎、克罗恩病等。 其它疾病：肿瘤