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文档简介
实验项目 甘油三酯的测定(72-1) 3学时,一、实验目的,掌握:血清甘油三酯(三酰甘油)测定的原理、操作方法和临床意义。,二、实验原理,2、,3、,4. 用72-1型分光光度计测出红色化合物吸光度,再利用公式 求出甘油三酯含量。,三、实验器材与试剂,(1)试管 3支 (2)水浴箱 1台 (3)试管架 1个 (4)洗耳球 1个 (5)微量五档可调移液器 2支 (6)刻度吸量管(5ml) 1支 (7)72-1型分光光度计 1台,(一)实验器材,微量五档可调移液器,使用方法:,1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动,以保证密封。 2.使用前应先将移液器吸液和排液几次,润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。 3.选择量程。 4.垂直地握住移液器,将按钮按到第一停止点,然后把吸嘴浸入到液面下23mm,再缓慢放松按钮,使之复位,等待12秒后,从液体中取出,并避免碰撞任何物体。 5.将吸液嘴移至加样容器壁上,缓慢地把按钮按到第一停止点,等待12秒,再把按钮全部按下去,排尽液体后,吸液嘴应沿容器壁上滑动取出,再放松按钮,使之复位,即完成。 6.最后,打掉用过的吸液嘴,调回最大量程,仪器放置好保存。,72-1型分光光度计,工作原理,物质对光的吸收具有选择性,不同的物质都有各自的吸收波长。在一定波长下,某物质的溶液对光的吸收强弱(吸光度A)与溶液的浓度C和液层的厚度L的乘积成正比,即遵循朗伯-比尔定律: A=KCL (K为吸收系数,对同一物质来说为一常数),使用方法: 1.检查 :指针位于“0”。 2.打开电源,打开比色皿暗箱盖,预热20分钟。 3.加样:夹毛面,擦干。 4.放置好比色皿,选择波长、调灵敏度。 5.反复调0、调100至稳定。 6.合盖,读数,记录,取样,清洗,关闭仪器。,2019/4/19,8,可编辑,1、血清(样本) 2、蒸馏水 3、工作液 4、甘油三酯标准液(标本):2.26 mmol/L,(二)实验试剂,四、实验内容和操作过程,1、取3支干净试管,分别标明测定(T)、标准(S) 和空白管(O),然后按表加入试剂:,加入物,测定管T 标准管S 空白管O,血清(ml) 15,标准液(ml) 15,工作液(ml) 1.5 1.5 1.5,2、将样品混匀后,置于37水浴箱中水浴 10min。 3、用分光光度计在波长546nm处,以空白管O调零,分别读取两管吸光度值,记录测定管T、标准管S的吸光度值AT、AS 。,计算公式: 甘油三酯(mmol/L)= 标准液浓度(2.26 mmol/L),五、实验结果计算及分析,【结果分析】,经过计算得到的血清中甘油三酯浓度为多 少,是否在人体的正常范围内(空腹甘油三酯 浓度为0.451.36mmol/L )。,六、临床意义,TG升高:,1、随年龄增长有上升趋势,体重超标者。,2、高脂血症、糖尿病、肾病综合症、动脉粥样硬化、 甲状腺功能减退等。,3、先天性脂蛋白脂酶缺陷,脂肪肝及其他肝病。
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