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第1章 无菌操作技术实践 第2节 分离特定的微生物并测定其数量学业分层测评(建议用时:45分钟)学业达标1下列关于微生物分离的叙述,错误的是()A平板分离法能将单个微生物经过培养形成便于移植的菌落B只有细菌才可以形成菌落,所以只有分离细菌时才可能获得菌落C平板分离法有涂布平板法和混合平板法等D涂布平板法得到的菌落仅在平板的表面生长【解析】大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类均能在固体培养基上形成菌落。【答案】B2产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A一个细菌,液体培养基B许多细菌,液体培养基C一个细菌,固体培养基D许多细菌,固体培养基【解析】菌落是指单个微生物的子细胞群体,在固体培养基上肉眼可见,是作为菌种鉴定的重要依据,若是多个细菌形成的菌落则不是标准菌落。【答案】C3有关涂布平板法的叙述错误的是()A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落【解析】涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,在适宜条件下培养的过程。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。【答案】D4从土壤中分离能分解尿素的微生物与分离能分解纤维素的微生物时,所利用的培养基中最明显的特点是()A前者尿素是唯一的氮源,后者纤维素是唯一的碳源B二者都具有琼脂成分C二者的pH相同D以上均不正确【解析】由于分离微生物所利用的是选择培养基,所以培养基中有与其他培养基不同的某种成分,该种成分是由培养的目的微生物而定的。分离能分解尿素的微生物,所利用的培养基中尿素是唯一的氮源,凡是能分解尿素的微生物就能生存,否则就不能生存, 由相同的原理可知,分离能分解纤维素的微生物时,纤维素是唯一的碳源。【答案】A5选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物,通过不含有机物的培养基、缺氮培养基;含尿素(不含其他氮源)的培养基,可从土壤中分离出的微生物依次是 () 【导学号:67850011】A硝化细菌、放线菌、根瘤菌B根瘤菌、青霉菌、固氮菌C异养型细菌、放线菌、硝化细菌D自养型细菌、固氮菌、分解尿素的细菌【解析】选择培养基是根据不同微生物的代谢特点,通过改变培养基的成分,以达到选择某种微生物的目的。不含有机物的培养基可以选择自养型微生物,缺少氮元素的培养基可以培养固氮微生物,含尿素(不含其他氮源)的培养基可以选择能分解尿素的微生物。【答案】D6通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需要的微生物。在缺乏氮源的培养基上,大部分微生物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放线菌;在培养基中加入10%的酚,可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分离出()A大肠杆菌B霉菌C放线菌 D圆褐固氮菌【解析】固氮细菌的生长不需要从培养基中获得氮源,可在缺乏氮源的培养基上正常生长,因此可分离出圆褐固氮菌;在加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌,可分离出霉菌;在加入10%的酚的培养基中,因该培养基能抑制细菌和霉菌的生长,所以可分离出放线菌。利用上述三种培养基无法分离出大肠杆菌。【答案】A7下列说法中不正确的是()A科学家从7080 热泉中分离得到耐高温的Taq DNA聚合酶B统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5,以M3作为该样品菌落数的估计值C设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度D同其他生物环境相比,土壤中的微生物数量最大,种类最多【解析】Taq DNA聚合酶是从一种水生耐热菌中分离提取的,这种耐热菌能在7080 的高温条件下生长。统计平板的菌落数时,应选择菌落数在30300的平板,每个稀释度至少取3个平板,为了提高准确度,应求其平均值。设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。土壤有“微生物的天然培养基”之称,同其他生物环境相比,土壤中的微生物数量最大,种类最多。【答案】B8下列关于分离纤维素分解菌实验的叙述,错误的是()A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B选择培养这一步可省略,但培养纤维素分解菌少C经稀释培养后,用刚果红染色D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上【解析】经选择培养后,再经稀释,才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上;选择培养可省略;经稀释培养后,用刚果红染色;设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。【答案】A9用涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是()A涂布了一个平板,统计的菌落数是230B涂布了两个平板,统计的菌落数是215和260,取平均值238C涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163D涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和256,取平均值235【解析】在设计实验时,一定要涂布至少3个平板,作为重复组,才能增强实验的说服力与准确性,所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板,但是其中1个平板的计数结果与另两个相差太远,说明在操作过程中可能出现了错误,因此,不能简单地用3个平板的计数值来求平均值。【答案】D10(2016徐州高二检测)在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中,需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片,样品就滴在计数室内。计数室由2516400个小室组成,容纳液体总体积为0.1 mm3。某同学操作时将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释,盖上盖玻片,用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室,并用滤纸吸去多余菌液,进行观察计数。(1)在实验中,某同学的部分实验操作过程是这样的:从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数,并记录数据;把酵母菌培养液放置在冰箱中;第七天再取样计数,记录数据,统计分析绘成曲线。请纠正该同学实验操作中的3处错误:_;_;_;(2)在实验前应该对计数板、吸管等器具进行_处理。(3)如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应采取的措施是_。(4)如果观察到如图所示a、b、c、d、e 5个大格共80个小室内共有酵母菌48个,则上述1 mL酵母菌样品中约有酵母菌_个;要获得较为准确的数值,减少误差,你认为该怎么做?_。【解析】(1)在从试管中吸取酵母菌之前,应将试管轻轻振荡几次,目的是使酵母菌在培养液中均匀分布。酵母菌的培养液应置于适宜条件下,并且每隔24小时就要统计一次菌落数目。(2)为了避免杂菌污染,实验中所用吸管、计数板等器具需进行灭菌处理。(3)(4)解答时要注意以下两点:统一单位;注意体积的变化。400个小室共容纳液体总体积为0.1 mm3,则80个小室容纳体积为:2102mm3,含酵母菌48个,又因酵母菌培养液总体积为100 mL,统一单位后即可求出酵母菌个数。【答案】(1)应将试管轻轻振荡几次再吸取酵母菌培养液进行计数应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养应连续七天观察、取样计数并记录数据(2)灭菌(3)适当稀释(4)2.4108多次计数,求平均值能力提升11下列关于分离与培养土壤微生物的操作,叙述错误的是() 【导学号:67850012】A制备土壤悬液时,应依此配制成浓度分别为102、103、104、105、106、107、108g/mL的土壤悬液B制平板时,应将熔化的培养基冷却到4550 后再倒入培养皿中,并迅速盖好培养皿盖C接种时应从最低的土壤悬液开始,并且每个浓度设置3个重复组D计数菌落时,应选取菌落数为100300的一组为代表进行统计【解析】分离与培养土壤微生物的操作过程中,对土壤悬液应进行10倍浓度梯度差的稀释,并稀释至108g/mL。制平板时应防止杂菌的污染,接种时应从最低的土壤悬液开始,并且每个浓度设置3个重复组。计数时应选取菌落数为30300的一组为代表进行统计。【答案】D12现有两种固体培养基,已知其配制时所加的成分和含量如下表,用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物,你认为它们适于分离()A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌;乙培养基适于分离异养型自生固氮菌B甲培养基适于分离异养型自生固氮菌;乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C甲培养基适于分离酵母菌;乙培养基适于分离真菌D甲培养基适于分离自养型共生固氮菌;乙培养基适于分离异养型共生固氮菌【解析】固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌,甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物,由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌;乙培养基中不含有机碳源,所以可用来分离自养型的自生固氮菌。【答案】B13实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应,用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触),将平板置于37 条件下恒温培养3天,结果如图所示。从实验结果分析,下列叙述不正确的是() 【导学号:67850013】A链霉素能阻止结核菌的生长B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D链霉素可以用于治疗伤寒【解析】链霉素能阻止霍乱菌和结核菌的生长繁殖,不能阻止伤寒菌的生长繁殖,链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效,所以A、B、C正确。链霉素不能用于治疗伤寒菌感染的伤寒病人。【答案】D14尿素是一种重要的农业肥料,但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类、数量繁多,某生物小组试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示,实验步骤如下图所示。请分析回答:KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g10 g1 g15 g(1)培养基中加入尿素的目的是筛选_,这种培养基属于_培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和_,实验中需要振荡培养,目的是_。(3)转到固体培养基上时,常采用_法接种,获得单个菌落后继续筛选。(4)下列材料或用具中,需要灭菌的是_;需要消毒的是_(填序号)。培养细菌用的培养基与培养皿玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管实验操作者的双手【解析】(1)培养基中加入尿素为唯一氮源能够筛选出能分解尿素的细菌,此培养基属于选择培养基。(2)尿素为“目的菌”提供氮源,葡萄糖为“目的菌”提供碳源。振荡培养基可溶入氧气,为培养的目的菌提供必需的氧气。【答案】(1)目的菌选择(2)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(3)涂布平板(或平板划线)(4) 15一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解,长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤,可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低,含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行_处理。(2)要在长期使用该除草剂的土壤中分离出目的菌,从物理性质、用途方面来看,上述培养皿中培养基的特点是_。(3)在划线培养时,只有很少的菌落出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中,无透明圈菌落利用的氮源主要是_,有透明圈菌落利用的氮源主要是_,据此可筛选出目的菌。实验结果如图显示的AE五种菌株中,_是最理想菌株。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B,然后对突变株A和B进行实验,结果如下表所示:接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲,能生长B不生长添加营养物质乙,能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙都能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是_。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是_。【解析】(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理性质方面来看,题图中的培养基属于固体培养基;从用途方面来看,该培养基属于选择培养基。该除草剂为含氮有机化合物,降解该除草剂的细菌可以该除草剂为氮源。故该培养基中除加入除草剂外,不能再含有其他氮源,以选择出能降解该除草剂的细菌。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上,不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能

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