课件：焦磷酸测序.ppt_第1页
课件：焦磷酸测序.ppt_第2页
课件：焦磷酸测序.ppt_第3页
课件：焦磷酸测序.ppt_第4页
课件：焦磷酸测序.ppt_第5页
已阅读5页，还剩19页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

焦磷酸测序,基因测序,对DNA分子的核苷酸排列顺序的测 定，也就是测定组成DNA分子的A、T、G、C的排列顺序。 A-T-T-C-A-C-G-G-T-A-C,焦磷酸测序步骤,一 PCR 二 焦磷酸测序,PCR,聚合酶链式反应 亦称之为DNA扩增，是DNA复制的体外模拟,普通PCR,实时荧光定量PCR,PCR反应的基本步骤,高温变性 低温退火 适温延伸,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点,一、PCR反应的条件,1、一定的缓冲溶液； 2、DNA模板； 3、分别与两条模板链相结合的两种引物； 4、四种脱氧核苷酸：4种dNTP混合物； 5、耐热的DNA聚合酶； 6、控制温度（PCR重要条件）。,二、DNA变性和复性,在80-100的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性；当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。,三、复制方向（53）,1、DNA分子的3端与5端：-OH端为3; 磷酸基团的末端为5 。 2、DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。,1、DNA聚合酶催化 2、DNA的延伸方向:5-3,四、引物问题,1、两种引物：DNA或RNA，长度15-30bp， 常用为20bp左右。 2、原因：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3端延伸DNA链。,2019/4/19,13,可编辑,五、PCR过程 变性 复性延伸,1、变性：当温度上升到90 以上时，双链DNA解为单链。,2、复性：温度下降到50 左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合,3、延伸：温度上升到72左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。,4、 循环特点： 上一次循环的产物为下一循环的模板 结果单链中有最初母链的只两条（无引物存于两个子代DNA分子中 ） ，其它子代DNA分子都为双引物分子 处于两引物之间的DNA序列呈指数增长12N,焦磷酸测序,峰形图,峰高与结合模板的dNT
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论