课件：免疫血液学一.ppt

,第四章 免疫血液学,医学检验系 张晨光 3832185,主要内容： 1、红细胞血型系统 2、HLA血型 3、血小板血型系统 4、血清型 5、输血前免疫血液检查 6、新生儿溶血病,免疫血液学,ABO血型的问题,问题的发现正反定型不符 可能性有许多种 ABO亚型，疾病因素，年龄体质和个体差异，冷抗体，自身抗体，输血，其它血型抗体的干扰，蛋白干扰，多凝集等。 通常情况下O型红细胞加AB血浆可以解决问题，但不总是这样。 孟买型和类孟买型常常不能输O型血,?,Rh血型问题,Rh阴性的患者输什么样的血？输什么样的血成分？ RhD亚型问题（弱D，不完全D，Del） Rh系统抗D、C、c、E、e抗体及其联合 Rh血型错误输血的后果,同种抗体问题,常见红细胞同种抗体有那些？ 如何锁定目标？ 谱细胞，抗原/抗体测定，效价测定 它们的临床意义 是否为温抗体？是否致敏补体？红细胞上有多少抗原？以往表现如何？ 是否能提供配合型的血？是否有权宜方案？（亲属血）,自身抗体问题,自身抗体 冷自身抗体和温自身抗体 如何锁定目标？ 针对红细胞的直抗试验和放散试验，针对血清的间抗试验 病史，输血史 它们的临床意义 是否为温抗体？药物抗体，类抗体，多凝集 是否能提供配合型的血？是否有权宜方案？,新生儿溶血病诊断及换血,新生儿溶血病的实验室诊断 直抗试验、游离试验、释放试验 ABO溶血病 换血血液的选择 Rh溶血病 换血血液的选择,骨髓移植后输血,红细胞血型的选择 血小板血型的选择,其它特定病患的输血前检查,白血病 消化道疾病 多发性骨髓瘤 冷凝集素病 大量输血输液患者,已经发生溶血性输血反应的患者,区分自身抗体和同种抗体 分离自身和输入的红细胞 正确鉴定血型 正确鉴定抗体 血浆置换 交换输血,1818年英国妇产科医生布伦德尔成功地用输血救活了一名产后大出血的产妇，成为人类历史上成功输血的第一例。,1900年奥地利维也纳大学 Landsteiner Landsteiner（18681943）获得1930年诺贝尔奖金 发现了ABO、MN、P、RH等许多血型,ABO血型的发现,ABO血型发现的意义,打开了免疫血液学、免疫遗传学的大门 为临床输血铺平了道路，使它成为一项有效的治疗手段。,1900年 2009年,1990年,1985年,ABO血型系统 从血清学到分子生物学,抗原决定簇 (表位),血型抗原是红细胞上的一种特异性的呈立体排列的化学基团。 依生化性质人红细胞抗原决定簇可分为多肽和糖分子两类。,人出生时，抗原决定簇是多肽的红细胞膜的血型抗原已发育成熟，而决定簇为糖分子的血型抗原则在出生后逐渐发育成熟。,决定簇,糖分子,多肽,ABH，Lweis Ii，TTn,抗原,MNSs，Rh， Kell，Kidd,存在多种细胞表面 体液和分泌液中,只分布于红细胞膜 其他血细胞膜上,分布,组织血型抗原可以表示细胞分化和成熟的标志，胎儿和新生儿红细胞表达强i抗原，弱I抗原，而成人则为强I抗原，弱i抗原。,IgG,相对分子量为15万，由2条重链及2条轻链构成，根据重链恒定区氨基酸序列的差异，分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4四种亚类。 IgG是唯一能通过胎盘到达胎儿的免疫球蛋白(1gG2通过胎盘效率最低)，并有结合补体的能力，IgG3结合补体能力最强。其次是IgGl，所以IgG3和IgGl在溶血性输血反应和新生儿溶血病中有重要意义。,IgM,相对分子量为90万，由5个免疫球蛋白单体通过J链连接而组成的五聚结构。 IgM是胎儿免疫系统成熟时最早出现的免疫球蛋白，并具有高度的有效凝集素，使补体活化的效率高，1个IgM分子与红细胞表面的抗原结合，就能引发补体介导的细胞溶解现象。,ABO血型系统抗体若按产生的原因又分为“天然抗体”和“免疫性抗体”。 “天然抗体”主要由自然界中与A、B抗原类似的物质(细菌)免疫刺激产生，以IgM为主。 “免疫性抗体”主要是由母婴血型不合的妊娠、血型不合及有输血史的输血产生，以IgG为主。,ABO抗体的特性,“天然抗体”与“免疫性抗体”的特征及区别,特性,天然抗体（IgM）,免疫性抗体（IgG）,抗原刺激,分子量,与红细胞反应的最适温度,被血型物质中和,溶血素效价,耐热性,在盐水中与相应红细胞,反应发生肉眼可见凝集,对酶处理红细胞的反应,通过胎盘,无察觉,100万,4-25,能,较低,不耐热（冷抗体）,能,变化不大,不能,有（妊娠、输血）,15万,37,不能,较高,耐热（温抗体）,不能,能反应,能,人在出生前尚未产生抗体. ABO抗体出生后3-6个月出现，5-6岁时达高峰; 成人随年龄增长而降低。 新生儿血清中抗体常是来自母体的IgG，偶尔也有胎儿自身产生的IgM。由于新生儿血型抗原位点少，抗体效价低，为此检测血型时应十分慎重，可因抗原少或抗体效价低而凝集不明显而误定血型。 抗A、抗B、抗AB抗体存在于所有缺少相应抗原的人血清中，唾液、乳汁、泪液等各种体液及分泌物中也可发现ABO抗体.,ABO抗体的产生及存在部位,2 9 个 血 型 系 统 ， 2 0 0 多 个 抗 原,第一节 红细胞血型系统,一、ABO血型系统,ABH血型抗原不仅存在于红细胞表面，而且还广泛存在于消化道，皮肤上皮细胞，呼吸道及泌尿系统，包括唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、乳液、羊水、体腔液及卵巢囊肿液中。,ABO血型系统的独特特点,A和B抗原的免疫原性强 血清中规律性存在抗A和/或抗B抗体 分泌型个体的血浆、唾液、组织细胞等处存在A、B、H血型物质,ABO血型系统是根据每个人红细胞上是否存在A和B抗原，可将人分成四种血型,ABO血型的配合性是 输血前试验的重要基础,血型抗原能够激活免疫系统 ：,母胎不相容 输血不相容 自身溶血性贫血,ABO血型的主要抗原和抗体,已知血清+受检者红细胞 受检者血清+已知红细胞 （正定型） （反定型） 抗A 抗B 受检者血型 A细胞 B细胞 O细胞 A B O AB ,(一) ABO血型的遗传基础,我们从双亲的染色体各获得一半的遗传基因。 我们遗传的是二个血型基因，一个是从母亲那儿来的A、B或O基因。另一个基因来自父亲的A、B或O基因。,基因型，从双亲染色体上所遗传下来的基因。 表型，所观察到的遗传基因即血型本身。 A和B基因对于O基因是显性基因，O基因是隐性基因。,不同婚配类型子女可能的血型,(二) ABO血型表型的频率,中国：从北向西南的方向，B基因频率逐渐下降，而O基因频率升高；云贵川和长江中下游地区A基因频率升高，两广、福建、台湾O基因频率较其它地区高。 欧洲：A基因频率最高 B基因在亚洲频率最高。,(三),(三) ABO血型抗原的生化合成,ABO系统抗原概述,A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。 二者之间的区别在于免疫结构域末端单糖性质不同。 A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖 B抗原末端糖基是D-半乳糖。,Type1 Gal13GlcNAc 1R （主要存在于血浆） Type2 Gal14GlcNAc 1R （存在于红细胞、血浆）,ABO生化合成的概述-血型前体物质,在H基因编码产生的岩藻糖基转移酶(H转移酶)的作用下，把一个岩藻糖接在其前身物质即红细胞膜上寡糖链的半乳糖上形成H物质(H抗原)，它是A、B抗原的前身物质。,ABO生化合成的概述-H物质,ABO生化合成的概述-A酶和B酶,A抗原,D-半乳糖(H物质) + N-乙酰半乳糖胺,D-半乳糖(H物质) +D-半乳糖,B抗原,A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。 A抗原 N-乙酰半乳糖胺(GaLNAc) B抗原 D-半乳糖(GaL)。,ABO生化合成的概述-A抗原和B抗原,H抗原是形成A、B抗原的结构基础，但是H物质抗原性很弱，血清中一般没有抗H抗体。 O型就只有H抗原，O基因为无效基因，不会产生转移酶，糖不会连接到H物质上。 如果缺失H基因，即缺乏H转移酶，则无H物质，这时即使体内存在A或B转移酶也不能形成A或B抗原，如hh型(孟买型)就是缺乏H基因。,ABO生化合成的概述-0型和孟买型,ABO系统概述,O基因的产物是一种无活性的转移酶，不能转移任何糖基到H抗原上，因此O型个体的抗原就是H抗原。,ABO抗原不是ABO基因的直接产物，A和B基 因编码不同的糖基转移酶，催化不同的糖基转移到H抗原末端半乳糖基上，形成相应的A或B抗原。,ABO基因糖基转移酶结构模式图（1）,2019/4/20,44,可编辑,ABO基因糖基转移酶结构模式图（2）,ABO物质的生物合成,A、B、H血型物质,1930年Lehrs发现唾液中有A和B物质 1943年Wiener发现分泌型占80 AB物质的量具有较显著的个体差异 血清中的血型物质较弱 唾液中的血型物质较容易测到,-常见ABO亚型,A抗原中主要为A1和A2 其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、 Amos 、Aint、 Aw和Ael B亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm、 Bmos和Bel等 其他亚型：嵌合体(Chimera) 、 CisAB型、孟买型、类孟买型,(四)ABO血型系统的 抗原，亚型及变异型,ABO亚型的判断,1. 红细胞与抗A、抗A1、抗B及抗AB的凝集程度,2. 红细胞上H物质活性的强弱,3. 血清中是否存在抗A1,4.分泌型人的唾液中A、B和H物质,A1和A2决定簇的区别 是仅存在量的差异还是抗原决定簇结构不同？,A1型和A1B型红细胞上的A1抗原数远远多于A2型和A2B型红细胞，A1型个体血清中A酶的活力也远强于A2型。表明二者之间有量的差别。 A2和A2B个体常常产生抗A1，说明A2细胞上缺乏A1细胞上的一种决定簇。,H抗原强弱趋势：OA2 B A2B A1 A1B,两种A型抗原:A、A1。 A1细胞具有A、A1抗原。 A2细胞只有A抗原。 B型人血清中有抗A和抗A1。 A1细胞与抗A、抗A1反应 A2细胞只与抗A反应,A1和A2同样存在质的区别,血型,抗原,抗体,A1 A2 O B,A1、A A H B,抗B 抗B、抗A1 抗A、抗B、抗A1 抗A、抗A1,A1基因与A2基因共同遗传A1 A2基因被存在的A1基因所隐蔽 A2基因与B或O基因配对时A2B、A2 此时的A2基因为显性遗传,A1和A2的遗传及表型,根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为Al、A2和AlB、A2B四种亚型。抗A血清中含有抗A和抗A1两种抗体，抗A可以凝集所有A型和AB型红细胞，而抗A1只能与一部分A型和AB型红细胞反应. 据此凡与抗A1反应者被定为A1或A1B型，不与抗A1反应，而与抗A反应者被定为A2或A2B型。,A1和A2亚型鉴定原理,A1和A2表型鉴别,血型 抗原 抗-A 抗-A1 A1 A、A1 + + A2 A + -,A1、A2的血清学区别是以抗Al试剂作试验获得的。 抗A1试剂：B型人的血清制成或为双花 扁豆提取并稀释的植物凝集素。 凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型。 不与抗A1试剂凝集者为A2或A2B型。,A1、A2亚型的鉴定方法,防止误定血型。 在常规输血试验中，A2或A2B型人的血清含有抗A1抗体，患者与供血者间的A1或A2需加以区别。 较A2更弱的亚血型不常发现， 一位弱亚型患者错误地定型为O型而输予0型血液时，预期应无严重的后果。 若一位具有弱A抗原的供血者血液，被定型错误而输给一位0型的患者时，则能引发严重的输血反应问题。,A1、A2亚型的临床意义,用A2细胞重复吸收来源于B型血清，可以移去所有抗A血清，血清中余下的抗体只能与A1型红细胞反应，表明B型个体的血清中含有抗A和抗A1两种抗体。 抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和O型人的血清中除含抗A外还有抗A1 ，所以抗A1试剂可以从B型人血清中获取。,A1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A H A2 4+ 0 4+ 3+ 0 2+ 0 4+ 0 A H A3 2+mf 0 2+mf 3+ 0 + 0 4+ 0 A H Am 0/ 0 +/ 4+ 0 0 0 4+ 0 A H Ax 0/ 0 +/2+ 4+ 0 2+ 0/2+ 4+ 0 H B 0 4+ 4+ 0 3+ 4+ 0 0 B H B3 0 +mf 2+mf 4+ 4+ 4+ 0 0 B H Bm 0 0 0/ 4+ 4+ 4+ 0 0 B H Bx 0 0/ 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 H,A亚型及B亚型的鉴定表,红细胞 表现型,红细胞与 已知抗血清反应,血清与 试剂红细胞反应,分泌者唾液 含型物质,抗A 抗B 抗AB 抗H 抗A1 A1 A2 B O,注：mf为混合外观凝集；0为无凝聚,A3,最早由Friedenreich在1936年描述 与抗A和抗AB共同孵育时：“混合视野外观” 。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。 与抗A反应强度低于A2。 与抗AB反应呈混合视野,但并不增强. 偶有抗A1 (occasionally) 血型物质 A、 H A3不像是A2和O细胞的嵌合体,Aend（Afinn，Abantu）,Aend最早由Weiner等于1959年描述 类似于A3细胞：它们与一些抗A和抗AB表现很弱的混合视野外观 Aend分泌型的唾液中只有H物质，但是无A物质 抗A1出现在部分Aend个体的血清中 10细胞凝集（Mf）,Am,Am细胞不能被抗A和抗AB凝集，或者仅能发生很弱的凝集。 血型物质: A、 H Am细胞可以吸附放散抗A。 Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物质，Am血清中通常无抗A1。 Am作为ABO位点上一个稀有等位基因遗传。,Ax,Ax表现型最初于1935年报道，它的主要血清学特点是： 红细胞与多数来源于B型血清的抗A不发生反应，但是可以被大多数来源于O型个体的抗AB凝集。 血清中含有抗A1，有时可凝集A1和A2细胞 除了H物质，Ax分泌型个体唾液中可以捡出痕量的A物质。,Ael,在通常的条件下，Ael细胞与抗A和抗AB不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体通过吸收放散技术可以检测到。 Ael分泌型唾液中无A物质，仅有H物质，血清中常含有抗A1，也可以含有能够凝集A2细胞的抗体。 Ael以ABO位点上的一种稀有的等位基因遗传的。,各种弱A亚型的鉴别程序,B亚型,弱的B变异型是很少的。 可能是由于在许多群体中B基因的频率要相对低得多。 弱B亚型较难以分类。 Salmon做出结论：B亚型最好的分类应参照A变异型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4种类型的Bw。,成人与新生儿抗原数量比较,ABH 抗原决定簇,新生儿正定型：RBC与血型试剂反应弱。 1、56周的胚胎RBC就可检测出来 2、出生时发育不完整 3、24岁红细胞发育完全,新生儿通常不做反定型 1、 新生儿免疫系统发育不成