课件：微肠杆菌科弧菌螺旋菌属.ppt

第九章 肠杆菌科,微生物学与免疫学教研室,概述,粪口途径传播的细菌 粪便污染水、食物、手和器皿等引起感染 肠杆菌科 也包括：弧菌属、弯曲菌属及幽门螺杆菌,肠杆菌科,通过粪-口途径传播的（常寄局于肠道） 一大群生物学性状相似的 革兰阴性杆菌 包括： 致病菌：伤寒沙门菌、志贺菌 机会致病菌：大肠杆菌 带有致病基因的大肠杆菌：致病性大肠杆菌,形态结构相似 培养要求不高 生化反应活泼 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异,共 同 特 性,1. 形态结构相似,中等大小 G- 杆菌 无芽孢 有菌毛、大多数有鞭毛 少数有荚膜,生化反应： 常用SS培养基（选择培养基）分离细菌 乳糖发酵试验 SS培养基 非致病菌(大肠） + 红色大菌落(分解乳糖) 致病菌 (伤寒、痢疾） - 无色透明小菌落(不分解乳糖),乳糖发酵试验： 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,抗原： 耐热性菌体抗原；细胞壁脂多糖，稳定， 属特异性，刺激机体产生IgM抗体 抗原：鞭毛蛋白，不耐热，失去后运动消失， 刺激机体产生IgG抗体 荚膜抗原（抗原）：多糖类物质，位于抗原外围。,抗原结构复杂,易变异,溶原性转换,生化反应变异,通过,引起,耐药性变异,毒力变异,转导,接合,H-O抗原及S-R菌落变异等,第一节 埃希菌属,有6个种，其中大肠埃希菌（E.coli）最常见，重要的一个菌种 肠道中重要的正常菌群，出生后数小时就进入肠道，终生伴随，为宿主提供具有营养作用的合成代谢产物 免疫力下降或侵入到肠道外组织器官， 成为条件致病菌，引起肠道外感染 有一些血清型大肠埃希菌具有致病性 作为水源、食物粪便污染的指标,一、生物学性状,G-菌 多有周鞭毛， 普通菌毛、性菌毛 致病性与菌毛有关,培养特性与生化反应,营养要求不高，普通平板，灰白色、圆形、光滑、中等大小的菌落；液体培养呈浑浊生长 生化反应活波，IMViC实验结果、 发酵葡萄糖等，产酸产气 分解乳糖、硫化氢阴性、动力阳性，可与沙门菌、志贺菌区别,主要有O、H、K 抗原，血清型分型的基础,抗原 血清学分型 超过170种 抗原 鞭毛抗原 56种 抗原 抗原外层 菌毛抗原荚膜抗原 100种以上,抗原结构,抵抗力,对热抵抗力比其他肠道杆菌强，水中存活较久。,二、致病性,黏附素: 黏附在泌尿道和肠道细胞 、致病物质 志贺毒素和 外毒素 不耐热肠毒素和 耐热肠毒素a和b 溶血素A 其他：内毒素等,肠道外感染：化脓性感染和泌尿道感染最常见，属于内源性感染 （1）泌尿道感染 （2）败血症 （3）新生儿脑膜炎 胃肠炎：某些致病性血清型菌株引起，属外源性感染，食入污染的食物和水，主要有五种类型,、所致疾病：,肠道感染 1）肠产毒型大肠杆菌（ETEC） 2）肠致病型大肠杆菌（EPEC） 3）肠侵袭型大肠杆菌（EIEC） 4）肠出血型大肠杆菌（EHEC） 5）肠聚集型大肠杆菌（EAEC）,五种引起胃肠炎的大肠埃希菌,1、肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli, ETEC) 婴幼儿和旅游者腹泻的主要病原菌，症状从轻度腹泻到严重霍乱样腹泻 致病物质 肠毒素：不耐热肠毒素(LT) LT-主要致病物质 耐热肠毒素(ST) STa 致病 定植因子(菌毛）：黏附作用，失去定植因子的菌株 不引起腹泻,2.肠侵袭性大肠埃希菌(enteroinvasive E.coli, EIEC) 似菌痢，脓血便，有里急后重 致病机理 不产生肠毒素 靠侵袭力侵袭结肠粘膜上皮细胞，生长繁殖 导致组织破坏，引起炎症、溃疡 血性黏液便,3.肠致病型大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli, EPEC) 婴幼儿腹泻的主要病原菌 致病机理 不产生毒素，靠粘附于微绒毛，大量繁殖破坏肠粘膜微绒毛(A/E组织病理损伤) 黏膜上皮细胞结构和功能受损，导致腹泻,4、肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli, EHEC) 出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征的病原 污染食品是EHEC感染的重要传染源，如牛肉 致病物质是菌毛和毒素 毒素-细胞毒，破坏肠绒毛 选择性破坏肾小球内皮细胞-急性肾衰 临床表现: 轻重不一 10%为十岁以下患儿，有严重并发症 (急性肾衰竭)，死亡率高 重要血清型：O157：H7,5、肠集聚型大肠杆菌(enteroaggregative E.coli, EAEC) 引起婴儿和旅行者持续性腹泻、脱水、偶有血便 致病物质：质粒编码的蛋白 致病机制：介导细菌聚集性黏附于肠粘膜细胞，阻 止液体的重吸收，导致腹泻,三、微生物检查,1.标本： 肠外感染 尿、血等 腹泻 粪便 2.分离培养与鉴定： 涂片染色镜检 （选择培养基）分离培养 生化鉴定 *尿路感染需计数细菌总数， 10万/mL,在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的 检测指标, 3个大肠菌群/1L饮水 5个大肠菌群/100ml瓶装汽水、果汁,卫生学指标,大肠菌群数,我国的卫生标准：,防 治,治疗：早期纠正体液平衡，抗生素治疗 预防：防止粪便污染 切断粪-口传播途径 疫苗：ETEC（肠产毒型E.coli)的菌毛抗原是关键抗原，动物实验已获成功 另：合成ST 与LT 非毒性亚单位，疫苗正在研制中,G-菌，球杆状 又称痢疾杆菌 是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌,第二节 志贺菌属(shigella),不分解乳糖,无鞭毛，无芽孢，有菌毛,生化反应,低于其他肠道杆菌，对酸和一般 消毒剂敏感,形态,对理化因素的抵抗力,一.生物学性状,无鞭毛区别于其他肠道杆菌，初步鉴别,SS培养基上为无色透明菌落,动力实验,抗原与分类：有K、O抗原，无H抗原,根据O抗原分类,致 病 性,侵袭力：菌毛粘附肠粘膜M细胞，波及临近细 胞，生长繁殖-细胞坏死脓血便,加重局部和全身症状,外毒素,细胞毒，与内毒素协同作用,致病物质,所致疾病,特点：病灶局限于结肠粘膜，一般不入血 病后免疫期短，也不巩固,所致疾病：细菌性痢疾 传染源:患者和带菌者,传播途径：粪口传播,急性细菌性痢疾 急性典型：发热、腹痛、脓血粘液便、里急后重 急性非典型：易误诊，导致带菌和慢性 中毒性痢疾：小儿，全身中毒症状（严重，死亡率高） 慢性细菌性痢疾：病程迁移两个月以上，细菌定植在结肠，症状不明显，传染源 中毒性细菌性痢疾：儿童急性细菌性痢疾，内毒素入血,所致疾病,免疫性,血液循环抗体,无保护性 粘膜免疫,有一定保护力,短暂,微生物学检查,及时送/暂用30%甘油缓冲水保存,SS平板（无色透明小菌落）,血清学反应（玻片凝集）,明确诊断,分离培养,新鲜脓血便/肛拭,双糖培养基（生化反应）,快速诊断,荧光菌球试验,协同凝集试验,毒力试验,预防：,口服减毒活疫苗,治疗：,多种抗生素可选择,但很易引起耐药性,防治原则,及时治疗患者，切断传播途径等 加强卫生管理,其中许多为人畜共患病,第三节 沙门菌属（Salmonella）,一大群寄生在人与动物肠道中的G-杆菌,菌群菌型甚多，仅少数对人致病,引起肠热症的伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌等；引起食物中毒的鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌,生物学性状,1、形态与染色 G-杆菌 有菌毛、周鞭毛;无芽胞、荚膜,2、培养特性与生化反应 普通平板无色半透明S型菌落，SS平板无色菌落 生化反应：不发酵乳糖 肠道致病菌 分离鉴定依据,四类肠道杆菌的生化反应: 代表种 动力 葡萄糖 乳糖 靛基质 H2S 尿素酶 埃希菌属 大肠埃希菌 + + + + - - 志贺菌属 痢疾志贺菌 - + - +/- - - 沙门菌属 伤寒沙门菌 + + - - -/+ - 变形杆菌属 变形杆菌 + + - + + +,3、抗原构造 （1）O抗原：1、脂多糖，耐热 2、可刺激机体产生IgM （2）H抗原：1、蛋白质，不耐热 2、可刺激机体产生IgG （3）Vi抗原（强毒株），表面抗原：抗吞噬,4、抵抗力 不强，对热及一般消毒剂敏感 对氯霉素极敏感 对胆盐、煌绿等耐受 水、有机物或低温耐受,致病性,侵袭力：. 菌毛黏附并侵入吞噬细胞内生长繁殖 .耐胃酸 C. Vi抗原：抗吞噬 内毒素：沙门菌重要的毒力因子-内毒素效应 激活补体-产生炎症反应 肠毒素：如鼠伤寒沙门菌可产生肠毒素,1.致病物质,2、所致疾病,肠热症: 由伤寒沙门菌引起的伤寒、甲型副伤 寒沙门菌等引起的副伤寒 胃肠炎(食物中毒) 败血症 无症状带菌者,胆囊-肠道-粪排菌 皮肤-血栓出血-玫瑰疹 肾-尿 肝、脾-肿大 骨髓,伤寒和副伤寒的致病过程,伤寒和副伤寒杆菌,小肠上部粘膜,肠系膜淋巴结,固有层淋巴结,进入血液,再次进入血液,第一次菌血症,第二次菌血症,(发热、不适、 全身酸痛),高热 相对缓脉 皮疹 肝脾肿大 白细胞减少,消化道,生长繁殖,胆囊中 排出体外（粪便） 超敏反应: 引起肠壁组织坏死 肠出血、穿孔 （注意饮食） 肾脏 随尿排出,典型的伤寒病程 34 周，症状相对较重 恢复期带菌者排菌 3周3月 长期带菌者 1年以上 重要传染源,（2）急性胃肠炎（食物中毒） 最常见沙门菌感染，常为集体食物中毒 食用由鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌污染食物引起 发热、恶心、呕吐、腹痛、水样腹泻 血培养阴性，粪便培养阳性,2019/4/20,50,可编辑,（3）沙门菌败血症 多见于儿童和免疫功能低下者 血培养阳性，粪便培养阴性 高热、寒战、厌食、贫血，菌可随血流导致脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、心内膜炎 （4）无症状带菌者 1的患者症状消失后年仍可在粪便中检出沙门菌 细菌贮留在胆囊内,3、免疫性,依靠细胞免疫，增强了巨噬细胞杀灭细菌的功能；恢复机制靠细胞免疫 体液免疫（sIgA、抗O、抗Vi）：只能对胞外细菌有杀死或溶菌作用 可获一定免疫力，黏膜抗体形成局部免疫,三、微生物学检查,1、沙门菌的分离鉴定,第1周 血液 第2周 粪便 第3周 尿液 第13周 骨髓,肠热症,胃肠炎,败血症,粪便、呕吐物、可疑食物,血液,（1）标本,（2）分离培养和鉴定 血液、骨髓穿刺液 肉汤基 （增菌培养） 粪便、尿液、呕吐物 选择培养基 双糖铁培养基 SS琼脂平板 （分离培养） （纯分离及初步鉴定） 血清学鉴定 系列生化反应 动力试验,微生物学检查,血清学诊断,肥达试验（Widal试验）,原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌的H抗原与受检血清作凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 用途：辅助诊断伤寒、副伤寒,肥达试验的结果判断,考虑正常人群抗体水平正常值：伤寒 1：80 1：160 有诊断价值 副伤寒 1：80 动态观察：恢复期效价增加4倍 O IgM,出现早，维持时间短 H IgG,出现迟，维持时间长 O高 H高 肠热症可能性大 O低 H低 排除 O高 H低 感染早期或有交叉反应的其它沙门菌感染 O低 H高 预防接种或非特异性回忆反应,玻片凝集实验,1.结果解释必须结合临床表现、病程、病史、地 区流行病学等 2.其他：例外，整个病程中肥达试验结果无变化 使用抗生素 免疫功能低下,四、防治原则,加强卫生管理 早发现，及时治疗 药物治疗：环丙沙星 疫苗：伤寒Vi荚膜多糖疫苗,第十章 弧菌属（Vibrio）,菌体短小、弯曲呈弧状或逗点状 G-菌，单鞭毛 分布广泛，水中居多，大多数是非致病菌 致病菌主要是霍乱弧菌和副溶血弧菌,霍乱 食物中毒,历史上的霍乱恐惧,1893年的一天,53岁的柴可夫斯基在彼得堡成功地演出第六交响曲 酒馆去庆贺 口渴 一杯生水 当天夜里,身体不适 发病第四天与世长辞 一代音乐大师倒在了小小的霍乱病菌下 也就成为了一曲“绝唱”,一、霍乱弧菌（V.cholerae）,引起烈性传染病霍乱 曾发生过7次世界性霍乱大流行,19世纪初至今已引起7次世界性大流行。 18171923年的百余年间，在亚、非、欧、美、澳等发生的六次世界性霍乱大流行皆由O1群的古典生物型引起。 1961年开始的第七次世界性霍乱大流行至今已波及五大洲140个以上的国家和地区，报告病例数在400万以上，目前尚无停息的迹象。它们由O1群的埃尔托(El Tor)生物型引起。,流行病学概况,1992年10月印度和孟加拉相继发生一种新型霍乱暴发和较大流行，这型霍乱随后在亚洲传播，至今已有印度、巴基斯坦、孟加拉、中国、泰国、马来西亚、缅甸、尼泊尔、新加坡、斯里兰卡、香港等国家和地区报告发生O139霍乱病例。2003年，WHO报告45个国家111575例病例O139群霍乱弧菌引起。,流行病学概况,Cholera,一、生物学特性,1.形态与染色,液体中 运动非常活泼 呈穿梭样 涂片中 排列整齐 呈鱼群状,革兰染色阴性 弧型或逗点状，单鞭毛,2、培养特性与生化反应,营养要求不高，耐碱不耐酸 在pH8.89.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好 无盐环境生长，其他致病性弧菌否,3.抗原构造 抗原: 现已有155个血清群 O1群与O139群引起霍乱,抗原: 特异性低,O1群,古典生物型,El Tor生物型,4.抵抗力 较弱，不耐热 对酸敏感，耐碱耐低温 对一般消毒剂都敏感 对链霉素、氯霉素敏感 在水中存活时间较长,二、致病性与免疫性,1、致病物质鞭毛、菌毛、霍乱肠毒素 鞭毛运动、穿透 穿过肠粘膜粘液层接近肠黏膜细胞 菌毛粘附、定居作用,霍乱肠毒素(CT)：致泻毒素中最强烈的毒素 蛋白质, 不耐热，甲醛脱毒成类毒素 疫苗,毒性部位A,结合部位B,亚单位与受体结合,亚单位作用于腺苷环化酶,ATP转化成cAMP， cAMP,水、电解质过度分泌，腹泻、呕吐,霍乱肠毒素的作用机理,1,2,3,4,2.所致疾病,烈性肠道传染病-霍乱，我国甲类法定传染病 传染源-患者和带菌者 通过污染食物或水源经口传染 一般情况被胃酸杀灭，胃酸减少时可进入小肠 临床表现： 上吐下泻：剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物）， 大量水分和电解质丧失 低容量性休克和肾衰竭（死亡率高达60%）,3.免疫性,可获得牢固免疫，再感染少见 可出现保护性抗肠毒素抗体（抗B亚单位）、抗菌抗体（抗O抗原的Ab） 肠腔中SIgA发挥重要作用,三、微生物学检查法,标本,直接镜检,分离培养,涂片见G-性弧菌，鱼群状排列 悬滴法观察细菌呈穿梭样运动,碱性蛋白胨水增菌 选择培养基为TCBS 玻片凝集反应,病人粪便，肛拭 （流行病学调查包括水样）,TCBS-agar