课件：输血前血型血清学检验.ppt

1,输血前血型血清学检验,2,输血前要做三项检查： 血型鉴定； 抗体筛选； 交叉配血试验。 目的有二： 使输入的血液成分有效存活； 不会引起受血者的红细胞发生破坏。,三者有互补作用，缺一不可。,3,在检验医学中，没有几项检验像输血前检验一样， 临床医生几乎完全依赖其结果的正确性。 输血前检验的每一个环节均可能发生差错，标本搞 错最为常见。 给患者输入不相容的血液成分导致严重不良后果： 急性溶血反应：多由ABO血型不相容输血引起，人 为差错是其主要原因； 迟发性溶血反应：多由ABO以外血型不相容输血所 致，输血前检验不规范是其主要原因。,4,常规ABO血型鉴定应包括正反定型，二者起到互 相验证和质控的作用。 ABO正定型采用单克隆抗-A、抗-B血型试剂，抗- B试剂不应该与获得性B抗原反应。,ABO、RhD血型抗原检测,ABO、RhD血型卡检测,5,每个血型检测卡都带自身质控（ctl）对照，实质就是一个阴性质控。如果是阳性，则检测结果无效。 优点为： 避免病人自身凝集引起误判结果。 监控操作规范性。 监测试剂卡质量。,ABO、RhD血型卡检测,操作步骤 a.制备1%待检红细胞生理盐水(1mlN.S+10ul压积红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，2500r/min 1min离心；,6,ABO、RhD血型抗原检测卡,7,ABO、RhD血型抗原检测卡,8,多发生在异型输血、异卵双生、双精受精和异型骨髓移植后。异型输血、异型骨髓移植属于暂时性嵌合（人工嵌合），双卵双生、双精受精是遗传嵌合属于永久性嵌合。,混合凝集外观：一般出现在嵌合体血型中,ABO、RhD血型抗原检测卡,检验结果的解释 A、B管凝胶强度3+，可疑为A、B亚型结果或其他原因引起的抗原减弱； RhD凝集强度3+，可疑为变异株。,9,ABO正反定型不符结果分析,假阴性结果 a.试剂和细胞比例不当； b.没能认识溶血也是阳性反应； c.加错样本； d.离心时间、速度不足； e.试剂失效、用法错误； f.记录或结果判读错误。,10,ABO正反定型不符结果分析,假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。,11,ABO正反定型矛盾 抗体问题,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc - - - - -,12,抗体减弱或不产生原因,新生儿（新生儿ABO抗体很弱，通常在三个月后进行反定) 老年人 白血病、淋巴瘤患者 使用免疫抑制剂的患者 免疫缺陷患者(先天性丙种球蛋白缺乏症等) 骨髓移植患者,13,ABO正反定型矛盾 抗原问题,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc 4+ + 4+ - 4+,14,获得性“B”现象,由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的疾病引起。 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生B特异性。 也见于普通变形杆菌引起的败血症。,15,红细胞血型抗原减弱或消失,A亚型和/或B亚型 白血病、何杰金氏病等 某些疾病引起的血型物质增多，如胃癌，胰腺癌,16,ABO正反定型矛盾 血浆异常（1）：缗钱状凝集,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc 4+ 2+ 4+ 2+ 4+,17,缗钱状凝集原因,白/球蛋白倒置 血浆扩容剂，如右旋糖酐 华通氏胶状物（Whartons jelly)：存在于脐带血中。,18,ABO正反定型矛盾 血浆异常（2）：多凝集,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc 2+ 1+ 4+ 4+ 4+,19,多凝集现象原因,病人红细胞被细菌或病毒感染，使T抗原激活。 所有正常人血清均含有T抗体。 反应强度取决于血清中T抗体的量。,20,ABO正反定型矛盾 血浆异常（3）：丫啶黄抗体,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc - 3+ - 4+ 4+,21,ABO正反定型矛盾 血浆异常（4）：不规则抗体,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc 4+ 4+ 4+ + +,22,ABO正反定型矛盾 血浆异常（5）：其他原因,高效价冷凝集素 抗A1（A2,A2B型） 抗H（A1,A1B型）,23,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB Ac Bc 4+ 2+ 4+ - +,24,ABO正反定型矛盾 cisAB型、AB亚型,ABO正反定型矛盾的处理方法,重复所有试验 直接抗人球蛋白试验 受检RBC用N.S洗3次，用抗A、抗B、抗A1、抗H和抗AB检查 抗A1用来鉴定A亚型（A型中A1和A2这两种亚型占99.99%，A1约占80%，A2约占20%，抗-A1与A2不反应）； 抗H用于鉴定亚型及孟买型（亚型细胞上有较多的H抗原，与抗-H反应较强，而孟买型红细胞上无H抗原） 抗AB用来确认弱A和弱B抗原（这种抗-A和抗-B的混合物与弱A和弱B亲和力强，发生强烈反应） 用A1、A2、B、O细胞反定型 抗体筛选 自身对照,25,处理方法 超量血型物质,用N.S洗涤被检红细胞多次，将红细胞配成盐水溶液，即可得到正确的正定型。,26,处理方法 获得性“B”现象,将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获得性“B”。 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。,27,处理方法 缗钱状凝集,用N.S洗涤被检红细胞，或在反应管中滴加12滴N.S。 脐带血用N.S洗涤68次。,28,处理方法 冷凝集,将反应管置37C水浴，晃动35min 冷吸收放散试验,29,30,对受血者常规只测Rh(D)抗原；而对献血者不 仅要检测Rh(D)抗原，在初筛为阴性时必须进 一步确定是否为弱D(即Du)。 ； Rh(D)阴性及弱D的受血者只能提供Rh(D)阴性 血，不得使用D阳性及弱D的血。即弱D针对受血 者而言为D阴性，而对于供血者而言则为D阳性,Rh（D）血型鉴定原则,2019/4/20,31,可编辑,32,对直抗阳性的Rh(D)阴性红细胞进行Rh(D)定型时，易引起假阳性反应，因此必须按照试剂生产商的试剂使用说明书要求，增加对照试验。,Rh（D）血型鉴定原则,抗体筛选,对受血者作抗体筛选的目的是检出有临床意义的抗体，并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免盲目配血。 方法是用受检者血清与试剂红细胞起反应，以发现在37有临床意义的抗体。 如抗体筛选试验阳性，缺乏谱细胞鉴定其特异性时，可送有条件的单位鉴定。,33,抗体筛选,抗体鉴定试验包括： 自身细胞检查：确定患者血清内是否有自身抗体或自身抗体与同种抗体并存； 使用试剂谱细胞：谱细胞一般是由816单人份的已知血型表型的O型红细胞配套组成，具有各种不同的抗原成分； 根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。,34,交叉配血,主侧交叉：由患者血清和供者红细胞组成； 次侧交叉：由患者红细胞和供者血清（浆）组成（由于我国尚未对供者进行抗体筛选，故次侧交叉是有必要的，尤其是输全血时）； 自身对照：由患者自身血清和患者自身红细胞组成（自身对照有助于分析解释交叉配血试验中出现的阳性结果）。,35,交叉配血,凝聚胺试验原理 凝聚胺（Polybrene）是一种阳离子聚合物，溶解后能产生很多正电荷，可中和红细胞表面负电荷，引起红细胞非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的； 如果是抗体致敏的红细胞在凝聚胺作用下发生凝集，这种凝集是不可逆的；,36,交叉配血,在凝聚胺试验中，首先让红细胞和血清在低离子介质中孵育，促进抗体与红细胞抗原结合，然后加入凝聚胺使红细胞凝聚，再加入枸橼酸钠重悬液（枸橼酸根带负电荷）中和凝聚胺正电荷，恢复红细胞表面的负电荷； 重悬后如果是非特异性凝聚，则由于红细胞表面负电荷的排斥作用，红细胞散开，结果为阴性；若是由于抗原抗体引起的特异性凝集则不会散开，结果为阳性。,37,交叉配血,凝聚胺试验的注意事项 加入重悬液后，应尽快观察结果，最好在1min内，最长不要超过3min，以免弱反应消失； 凝聚胺溶液若放玻璃瓶中太久作用会变弱，所以必须保存在黑色塑料瓶中； 凝聚胺是一种抗肝素药物，所以使用含肝素的血标本要稍稍多加一些凝聚胺来中和肝素。,38,交叉配血,交叉配血实验中，离心力、离心时间不当，可造成假阴性或假阳性结果。 恒温水浴箱温度不正确也会造成错误结果。 对于高效价O型血清出现前带现象时，应当用EDTA盐水适当稀释，以阻止补体C1引起的凝集。 出现溶血或部分溶血应判为阳性结果（标本本身溶血例外）。,39,交叉配血,含有冷凝集素的患者交叉配血时可采用37生理盐水洗涤3次，如还显弱凝集，再用42或45盐水洗1次再配血。 温抗体型的自身免疫性溶血性贫血患者血清中的游离抗体有时很难吸收完全，导致配血困难。在排除同种抗体的情况下可选择凝集反应弱的同型血液输注，亦可输注O型洗涤红细胞。,40,交叉配血,某些紧急情况下需要快速配血，建议血清（血浆）与细胞比例为2:1，细胞悬液浓度为2%3%。同时离心前孵育25min，有利于检测弱的ABO抗体。 婴儿输注O型血或ABO同型血，应当采用母亲的血清（血浆）进行交叉配血。,41,交叉配血,在任何情况下，一定要选择ABO和Rh（D）同型的血液。如果同型血不够用，可以输注O型相合的添加剂红细胞（红细胞悬液、悬浮红细胞），这种红细胞所含血浆量很少。 AB型血液不能满足供应，可选择A型或B型红细胞，尽量不用O型，O型红细胞以备它用。,42,交叉配血,Rh（D）阴性血不够用，可以选择Rh（D）阳性血，但有生育能力的妇女不能用。 在大量输血时如果输的是同型相合的添加剂红细胞（未输全血），供者之间可以不做交叉配血试验。若是输了ABO不同型的相合红细胞，以后要尽快输注与患者同型的红细胞，不要坚持一直应用ABO不同型的相合红细胞。,43,交叉配血不合分析及处理,主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（-） 患者或供者ABO血型错误：重新定型， 患者血清可能含ABO抗体：检查患者亚型、输血史及移植史 患者血清中有抗体，但筛选细胞上无相应抗原：对患者进行抗体鉴定 供者红细胞已被致敏：对供者做直接抗球蛋白试验,44,交叉配血不合分析及处理,主侧（+）、自身（-）、抗体筛选（+）： 患者血清中的同种抗体与供者红细胞上相应抗原起 反应：对患者进行抗体鉴定，选择无对应抗原的血 液输注。,45,交叉配血不合分析及处理,主侧（+）、自身（+）、抗体筛选（+） 患者血清中可能同时存在自身抗体和同种抗体； 对患者血清自身吸收及抗体鉴定，用吸收后血清配血 白/球蛋白比值不正常：盐水添加法解决缗钱状假凝集） 血浆扩容剂（如右旋糖酐）的影响；洗涤细胞或重新抽取标本） 污染:使用洁净的器具和符合要求的试剂,46,交叉配血中的疑难问题,次侧交叉配血不合 受血者红细胞被致敏：对受血者做直接抗球蛋白试验 献血者存在不规则抗体：,47,交叉配血中的疑难问题,双侧交叉配血不合 多见于自身免疫性溶贫患者 高冷凝集素患者或供血者,48,交叉配血不合的处理,复核受血者和供血者血型鉴定结果 抗体筛选试验和抗体鉴定试验 抗人球蛋白试验 吸收放散试验 自身交叉反应试验 试剂问题,49,50,患者女，李芝，39岁，农民，因子宫肌瘤行子宫全切除术。术前定血型为A型，Hb110g/L。术中失血约400mL，手术结束时输A型新鲜全血400mL。输完血后，回病房约10分钟，患者寒战、腰痛、发热39，1.5小时后排出酱油色尿，手术切口渗血不止，即按急性溶血反应治疗，再次核定血型为B型。2天后出现急性肾功能衰竭。3天后，死于转院途中。,病例讨论1,51,调查发现 采集标本的医护人员误将39岁看成39床，错用39床的血标本测定血型并作配血试验。39床血型为A型，女，李兰。实际上，患者为28床，血型为B型。 问题：该患者是什么输血不良反应？,病例讨论1,急性溶血输血反应 1、原因：主要为ABO血型不合 2、症状与体征 开始输血1030min内 意识清楚患者：寒战、高热、呼吸困难、腰背 酸痛、头痛、胸闷、血红蛋白尿。 麻醉中的病人：最早症状为伤口渗血与低血 压。 导致休克、DIC和急性肾功能衰竭,52,病例讨论1,急性溶血输血反应 3、应留取哪些标本？ 献血者的配血标本 血袋残留的献血者血液 病人输血前、输血后血液标本 病人发生反应后第一次尿液,53,病例讨论1,54,王某，女，44岁，因乳腺癌1年前作根治术。手术期间患者输A型全血400ml，无不良反应。术后曾化疗8次。此次入院进行第9次化疗。血常规：红细胞 4.121012/L，血红蛋白125g/L，白细胞3.3109/L，血小板 60109/L。血型“A”。因白细胞和血小板偏低，为了能顺利进行第9次化疗，给,病例讨论2,55,患者输当天新鲜全血400ml，输血过程无任何反应。化疗顺利。输血后第7天血红蛋白降为90 g/L。再输新鲜全血400ml，输后约20分钟，患者觉腰痛，继而出现畏寒、头痛、恶心、体温39，尿呈酱油样。经及时抢救，患者转危为安。,病例讨论2,56,复查血型及交叉配血试验 患者血型“A”（CCDee)；供者血型“A”(CCDEe) 交叉配血试验：盐水介质不发生凝集反应；抗球 蛋白和酶介质中，主侧发生强凝集反应,次侧无凝 集反应。 抗体鉴定:患者血清中存在抗E抗体，效价:512。 问题: 该患者是什么输血反应？,病例讨论2,迟发型溶血输